产单核细胞李斯特菌溶血素的纯化

本文旨在探讨产单核细胞李斯特茵溶血素（LLO）的纯化方法。将产单核细胞李斯特茵（LM）接种于BHI液体培养基中培养,得到含LLO的培养液上清（LLO1）,再经70％饱和硫酸铵沉淀、透析,得到溶血素粗提物（LLO2）,LLO2经凝胶过滤层析,聚乙二醇浓缩,得到活性峰收集液（LLO3）。通过以上三步的纯化,溶血素的比活提高160倍,纯化蛋白在SDS-PAGE中呈现一条带,达电泳级纯度。     

产单核细胞李斯特菌的PFGE分子分型分析

对50株不同来源的产单核细胞李斯特菌（Lm）进行PFGE分型,比较食源、环境、人源菌株之间的相似性。结果显示,同一市场内,环境污水分离株和新鲜食品分离株表现出较高同源性,新鲜食品分离株与即食性（RTE）食品分离株相似性很高,临床脑膜炎病人的1株Lm与RTE食品分离株在进化上显示出了很近的亲缘关系。50株Lm的分子分型分析提示了菌株从市场环境污水-新鲜食品-RTE食品-人的传播模式,为食源性疾病溯源追踪提供了新的思路。     

用四重PCR检测方法检测产单核细胞李斯特菌

为了同时快速准确的检测产单核细胞李斯特菌以及是否为有毒力的产单核细胞李斯特菌,根据相关文献报道的四重PCR方法,针对该菌的种特异性基因inl A基因进行引物设计,扩增片段大小为800bp,结果应用该PCR法可特异性的扩增出目的基因片段,与GenBank上发表的序列同源性为97.3%。同时通过对毒力基因inlB,inlC和inlJ的检测用来判断菌株的相关毒力。而同一属的其他菌种无害李斯特菌(L.innocua),韦氏李斯特菌(L.welshimeri)均无特异条带,嗜水气单胞菌(J-1),产气荚膜梭菌(C57-13),大肠埃希菌(ATCC 25922),鼠伤寒沙门菌(C79-32),金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)结果均为阴性。对临床上送检的23份样品进行四重PCR方法检测并同时与国家标准GB/T22429-2008食品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验中使用的检测方法进行比对,两种检测方法的结果完全符合,均检测出7份阳性样品。并且四重PCR法表明这7份阳性样品中的产单核细胞李斯特菌均携带有3种毒力因子(inlB,inlC和inlJ),因此该四重PCR法可用于快速鉴定是否是有毒力的产单核细胞李斯特菌,为有效预防控制产单核细胞李斯特菌污染提供技术支撑。     

产单核细胞李斯特菌溶血素基因的克隆及原核表达

利用PCR方法扩增产单核细胞李斯特菌（LM）的溶血素基因hlyA,获得一条大小约为1600bp的目的片段,将其与pMD18-T载体连接,经酶切、PCR鉴定,命名为pMD18-T—hlyA。测序结果显示所扩增的hlyA基因与GenBank中发表的hlyA的序列同源性为99％。利用含有BamHⅠ／XhoⅠ酶切位点引物B从pMD18-T—hlyA扩增不含信号肽序列的目的片段B,获得了大小约为1500bp的基因片段,该片段与pET32a表达载体经BamHⅠ／XhoⅠ处理后进行连接,转化BL21受菌体。通过酶切、PCR鉴定及序列测定后获得阳性pET32a-hlyA表达重组质粒,将重组菌用终浓度为0．1mmol／L的IPTG进行诱导表达,结果表明重组菌在诱导2h～3h表达量最高,融合蛋白约占菌体的40％,分子量大小约为80ku;利用LM的阳性血清进行Western blot分析,证实该融合蛋白可以被LM阳性血清所识别,为今后研制针对该蛋白的单克隆抗体和建立间接ELISA诊断方法提供了条件。     

食品中产单核细胞李斯特菌PCR检测方法的建立

根据产单核细胞李斯特菌hlyA基因设计引物,进行PCR扩增,检测该方法的特异性和灵敏度。人工污染样品经Half-fraser和Fraser增菌后进行PCR检测。结果表明,产单核细胞李斯特菌扩增出234bp的条带,对照菌未扩增出目的条带。该方法的灵敏度为104cfu/mL。人工污染样品的检出限为8cfu/25g,说明PCR方法检测食品中产单核细胞李斯特菌具有快速、特异、敏感等特点,具有较高的实用价值。     

产单核细胞李斯特菌毒力因子及免疫预防研究进展

产单核细胞李斯特茵在病原学上已被公认为一种人兽共患病和食源性疾病的致病菌,在各国已引起食品加工部门、公共卫生部门的高度重视和研究者的兴趣.文章就该菌的毒力因子及免疫预防研究做一简述.     

山羊源产单核细胞李斯特菌的分离与鉴定

从贵州省盘县某养羊场病例组织样本中分离出1株疑似产单核细胞李斯特菌(Lm)。通过革兰染色、生化鉴定、PCR扩增hly基因、克隆、测序、序列分析及药敏试验等方法对可疑菌株进行分析鉴定。结果显示,该分离菌的培养特性、菌落形态、菌体形状特征、生理生化特征均与文献报道的产单核细胞李斯特菌相同,并从该分离菌株基因组中扩增到大小约850bp的Lm的特异性DNA片段,其序列与GenBank中其他Lm地方株核苷酸同源性在39.1%~99.7%之间,其中与从发病动物分离到的加拿大、瑞士参考株同源性最高,均达到99.7%,与其他途径分离到的参考菌株同源性都很低,分子水平上进一步证实分离菌株为产单核细胞李斯特菌,且从不同途径分离的地方株hly基因差异大。研究结果为本病临床防控与治疗提供理论依据。     

产单核细胞李斯特菌的检测方法

产单核细胞李斯特菌(Listeria monocy-togenes,LM)是一种重要的人兽共患食源性病原菌,可引起以脑膜炎、脑炎、败血症为症状的李斯特菌病.该菌还可引起怀孕妇女的菌血症、死胎或流产.此外,感染LM偶尔可引起皮肤的损伤和流行性感冒样症状[1].     

单核细胞增生性李斯特菌检测研究进展

单核细胞增生性李斯特菌是近年来又重新抬头出现的病原微生物,已在世界许多港口被检测到,并造成了一定的经济损失被认为是影响畜禽和人类健康的重要病原微生物之一。文章就单核细胞增生性李斯特菌检测方法的研究进行了系统的综述,为控制该病原微生物的传播和蔓延提供参考。     

食品中单核细胞增生性李斯特菌的污染及耐药现状

单核细胞增生性李斯特菌作为一种重要的食源性致病菌已引起世界各国的广泛关注.文章主要综述了近些年来该菌对食品的污染状况和该菌耐药性的发展趋势,以便人们更好地了解和掌握该菌对人类健康存在的潜在威胁,进而为制订行之有效的公共卫生政策奠定基础.     

生鸡屠宰场屠宰环节单核细胞增生李斯特菌的分子分型研究

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种革兰氏阳性兼性胞内寄生的食源性病原菌,为了解鸡肉产品中Lm污染情况及其血清型等,本研究采集江苏省某生鸡屠宰场屠宰环境样品(40份)、屠宰环节肉鸡擦拭样品(160份),进行Lm的分离鉴定,采用多重PCR和O抗原玻片凝集相结合的方法对分离菌株进...     

石河子地区动物性食品中单核细胞增生李斯特菌的检测

目的了解新疆石河子地区动物性食品中单核细胞增生李斯特氏菌(LM)污染状况。方法在石河子地区选取5个具有代表性动物性食品零售点,对最常食用的生鲜猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、冻鸡肉、冻虾和冻带鱼8类动物性食品进行随机采样,采用病原分离培养和PCR法对样品中的单核细胞增生李斯特氏菌进行检测。结果检测8类249份食品样品,细菌分离鉴定阳性样品12份,平均阳性率4.82%;PCR法检测阳性样品36份,平均阳性率为14.46%。结论石河子动物性食品中LM的污染比较普遍,尤以冻鸡肉和冻虾LM污染较重,新鲜猪肉、牛肉和羊肉LM污染程度较轻。     

单核细胞增生性李斯特氏菌及其检验

单核细胞增生性李斯特氏菌是近年来又重新抬头出现的病原微生物,已在世界许多港口被检测到,并造成了一定的经济损失,被认为是影响畜禽和人类健康的重要病原微生物之一。本文就单核细胞增生性李斯特氏菌的生物学特性、流行病学、致病性及检验等方面进行了系统的综述,为控制此病原微生物的传播和蔓延提供了重要的理论和实践依据。     

单核细胞增生性李斯特氏菌及其检验

单核细胞增生性李靳特氏菌是近年来又重新抬头出现的病原微生物、已在世界许多港口被检测到，并造成了一定的经济损失，被认为是影响畜禽和人类健康的重要病原微生物之。本文就单核细胞增生性李斯特氏菌的生物学特性、流行病学、致病性及检验等方面进行了系统的综述，为控制此病原微生物的传播和蔓延提供了重要的理论和实践数据。     

应用PCR技术调查市售猪肉产单核细胞李斯特菌

产单核细胞李斯特菌(LM)为李斯特菌属中的一个种,在病原学上作为一种人畜共患病和食源性疾病的致病菌已得到世界范围的普遍公认。LM在自然界中分布广泛,具有耐热(60℃)、耐低温(4℃)、耐盐、耐干燥、耐化学试剂等特性,食用被LM污染的食品而引起人体感染发病易感人群如新生儿、孕妇、老人及免疫抑制病人等,临床上表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻,发烧、头疼、类似感冒样,脑膜炎、败血症、心内膜炎,孕妇感染后流产,致死率高达30%以上,对免疫缺损的病人,致死率甚至高达70%。LM本身的生物学特点及其致病性及突出的公共卫生学重要性引起了国际…     

单核细胞增生李斯特菌ActA单克隆抗体的制备

原核表达单核细胞增生李斯特菌(Lm)ActA蛋白并进行亲合层析纯化,以Lm全菌为免疫原、以纯化的表达蛋白为检测抗原制备Lm单克隆抗体,共获得4株抗Lm ActA单克隆抗体。其中3G6、4E10和2B9为IgG1亚类,2B4为IgM亚类;检测腹水抗体效价,3G6和4E10为1∶64 000,2B9为1∶32 000;3G6、4E10和2B9的亲和常数分别为6.62×107L/mol、5.67×107L/mol和7.15×106L/mol;3G6、2B4和4E10为Lm ActA特异性单抗,2B9为致病性李斯特菌特异性单抗。所制备的单抗为Lm检测方法的建立奠定了基础。     

广州地区禽产品单核细胞增生性李斯特菌污染情况调查

单核细胞增生性李斯特菌是食品卫生上重要的病原菌.它广泛存在于自然界,可导致人和动物脑膜炎、流产、败血症等,病死率高达30％～70％,是目前人类最重要的食物源性病原菌之一[1,2].在欧美许多发达国家常发生因食品中污染该菌而导致的人员死亡事件,因此,很多国家都将单核细胞增生性李斯特菌列入食品安全重点监测对象[2,3].本调查采集广州不同地点和来源的各种禽类产品,进行了单核细胞增生性李斯特菌的分离和鉴定,分析了广州地区禽类产品中该菌的污染情况,为单核细胞增生性李斯特菌病的防制提供依据.     

鸡单核细胞增生性李斯特菌病诊断与病原鉴定

通过临床观察、病理剖检、细菌学检测、生化试验、动物试验及低温培养试验,确诊一例鸡李斯特菌病,并鉴定一株鸡源单核细胞增生性李斯特菌,药敏试验结果表明该分离菌对氯霉素敏感性最高。     

甘肃省畜禽肉品中单核细胞增生李斯特菌污染情况的调查

采集甘肃省兰州市、定西市、张掖市、酒泉市和庆阳市等地区部分屠宰场和农贸市场共1 387份样品。通过常规细菌学和分子鉴定方法对样品进行单核细胞增生李斯特菌分离鉴定,并对分离菌株的耐药性、血清型以及生物被膜形成能力进行测定。1 387份样品中共分离出14株单核细胞增生李斯特菌,总分离率为1.0%。选择12种抗菌药物进行纸片扩散法(KB)药敏性检测,结果表明分离菌株对四环素和头孢噻吩耐受最严重,耐药率为100%。青霉素、乙酰螺旋霉素、复方新诺明、红霉素、磷霉素和多黏菌素,多重耐药严重。血清型鉴定结果表明1/2a血清型菌5株(35.7%),1/2b血清型菌2株(14.3%)1/2c血清菌6株(42.9%),4b血清型菌1株(7.1%)。同时,分离株均能形成生物被膜,其中1/2a、1/2b和1/2c血清型菌株形成生物被膜的能力较强。研究表明,甘肃省畜禽肉品中存在单核细胞增生李斯特菌污染,农贸市场中污染最严重,相关部门应加强监控,从而预防食源性疾病的发生。