茶黄素对糖尿病大鼠肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶及细胞外基质合成的影响

探讨茶黄素对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及细胞外基质(ECM)合成的影响。分别以正常糖(NG)、高糖(HG)、糖基化终产物(AGE)及过氧化氢(H2O2)孵育大鼠肾小球系膜细胞,Western Blot检测系膜细胞中p38MAPK和转化生长因子-β(TGF-β)蛋白表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养液中细胞外基质成分纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)及层黏连蛋白(LN)的含量。结果显示HG、AGE和H2O2能明显诱导p38MAPK磷酸化和TGF-β蛋白表达增加而导致细胞外基质的积聚,茶黄素能明显抑制p38MAPK的磷酸化活性和TGF-β蛋白表达及减少细胞外基质的积聚。提示茶黄素可通过调节p38MAPK信号转导通路而减少细胞外基质的合成,延缓糖尿病肾小球肥大和肾小球硬化。     

大豆异黄酮甙元对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响

大豆异黄酮通过促进肿瘤细胞凋亡可抑制多种肿瘤细胞的增殖.从大豆提取大豆异黄酮糖甙,再将其部分水解成其甙元,研究大豆异黄酮甙元抑制结肠癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用.采用MTT比色法观察大豆异黄酮甙元对结肠癌HT-29细胞增殖的影响,采用TUNEL染色法检测其对HT-29细胞凋亡的影响,采用免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2和p53的表达.结果表明:大豆异黄酮甙元可在20～80 mg·L-1范围内时间和浓度依赖性地抑制结肠癌HT-29细胞增殖和诱导细胞凋亡.用40 mg·L-1大豆异黄酮甙元作用结肠癌HT-29细胞72 h时,细胞生长抑制率为(57.1±4.9)%,其对肿瘤细胞凋亡率为(20.9±2.1)%.免疫组化结果还显示,大豆异黄酮甙元可显著性增加HT-29细胞凋亡相关基因bax蛋白表达和降低bcl-2表达.提示,大豆异黄酮甙元可通过诱导结肠癌细胞凋亡发挥抗结肠癌作用.     

EGCG抑制Nicotine诱导肺腺癌H1299细胞JAK2/STAT3 mRNA的表达研究

为探索EGCG对Nicotine诱导肺癌细胞增殖的抑制作用,本研究通过MTT实验筛选出EGCG、Nicotine对肺腺癌细胞H1299的最佳作用浓度,利用实时荧光定量PCR技术检测EGCG、Nicotine对H1299细胞中Bax、Bcl-2、Jak2和Stat3基因mRNA相对表达量的变化。实验结果表明,EGCG对H1299细胞的半抑制浓度IC₅₀值约为32βμmol·L^-1（24βh）、15βμmol·L^-1（48βh）;1βμmol·L^-1的Nicotine对H1299细胞促增殖作用明显;以15βμmol·L^-1的EGCG预处理H1299细胞24βh可显著下调1βμmol·L^-1 Nicotine的促增殖作用（P<0.05）。1βμmol·L^-1的Nicotine处理H1299细胞可明显降低JAK2/STAT3信号通路中Bax基因mRNA的表达,增加Bcl-2、Jak2、Stat3基因的mRNA表达;15βμmol·L^-1 EGCG预处理H1299细胞可反向调控Nicotine诱导所致JAK2/STAT3信号通路中Jak2、Stat3和Bax、Bcl-2基因表达量的变化,结果具有显著性差异（P<0.05）。由此可知,EGCG对Nicotine诱导的肺腺癌H1299细胞增殖及JAK2/STAT3信号通路中促增殖基因mRNA的表达起抑制作用。     

大豆异黄酮和皂甙对结肠癌细胞增殖和凋亡的研究

从大豆胚轴提取大豆异黄酮和皂甙,研究大豆异黄酮和皂甙抑制结肠癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用.采用MTT比色法观察大豆异黄酮和皂甙抑制结肠癌细胞增殖,采用流式细胞仪检测大豆异黄酮和皂甙对HT-29细胞周期分布的影响,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2和p53的表达.结果表明:大豆异黄酮和皂甙可时间和浓度依赖性地抑制结肠癌细胞增殖;诱导细胞凋亡和改变细胞周期分布,多数细胞阻滞于G/2M期;与对照组比较,细胞凋亡率显著增加;用药前后凋亡相关基因bax蛋白表达显著增加,bcl-2表达显著降低.提示,大豆异黄酮和皂甙可通过改变细胞周期分布和诱导结肠癌细胞凋亡,发挥抗结肠癌作用.     

铁观音黄片和茶末体外抗人乳腺癌作用研究

本文研究铁观音黄片和茶末体外抗人乳腺癌MDA-MB-468细胞的作用。以铁观音按照1:25的茶水比进行浸提30min的茶汤为原始浓度的试验样品,利用MTT法测定人乳腺癌细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡比例并进行凋亡相关蛋白的检测。结果表明:铁观音黄片和茶末均能抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖,其干预MDA-MB-468细胞48h的IC50分别为终浓度稀释119.87±12.22倍和117.56±21.73倍。用其IC50浓度进行诱导细胞凋亡试验,表明了该两种品类铁观音副产品均能显著提高MDA-MB-468细胞的凋亡比例,且这两种铁观音副产品均是通过促进Caspase 9和Caspase 3蛋白的活化来诱导细胞凋亡的。     

EGCG对高脂饮食GK大鼠白色脂肪米色化的诱导作用与机制研究

脂肪组织类型与人体代谢密切相关,通过饮食或营养干预将白色脂肪细胞转变为产热的米色脂肪细胞是一种减少脂肪积蓄、调节代谢的安全策略。目前关于白色脂肪组织米色化作用的研究多聚焦于肥胖群体,为探究EGCG对非肥胖代谢紊乱群体的内脏白色脂肪组织米色化的诱导作用及相关机制,采用非肥胖型自发性2型糖尿病模型Goto-Kakizaki(GK)大鼠,给予每日高脂饮食,并进行40 mg·kg^-1和80 mg·kg^-1 EGCG灌胃干预,检测GK大鼠的体质量、摄食量、脂肪组织细胞形态及米色化相关基因表达水平、UCP1蛋白表达水平,并进行转录组测序。结果表明,80 mg·kg^-1 EGCG灌胃干预对GK大鼠摄食量和体质量无明显影响,但能够促使脂肪细胞呈现向多房型脂肪细胞转变趋势,并显著上调米色化相关的Pparg、Ppargc1a、Ucp1基因表达水平和UCP1蛋白表达水平,具有诱导高脂饮食GK大鼠内脏附睾白色脂肪组织米色化的作用,且表现出调节脂质代谢的潜力。结合转录组分析结果表明,EGCG对高脂饮食GK大鼠白色脂肪组织米色化的诱导作用机制可能与...     

儿茶素对ECV304细胞增殖和迁移的影响

利用体外细胞培养技术探讨了四种儿茶素对ECV304细胞增殖和迁移的影响。结果发现,EGCG对ECV304细胞存活率的影响最显著,在EGCG浓度为50~150μmol/L时,细胞存活率达到极显著差异,半数抑制浓度IC50为75~150μmol/L;EGCG对该细胞迁移作用影响明显,且呈剂量依赖性,IC50为150μmol/L,EGCG可能通过抑制内皮细胞的迁移抑制新生血管的生成;ECG与ECV304作用36h和48h,IC50分别为390μmol/L和370μmol/L;C和EC与ECV304作用时,细胞存活率在80%以上。四种儿茶素在浓度低于75μmol/L时,对正常ECV304细胞抑制影响不大。     

氧化应激对Vero细胞的损伤及EGCG的保护作用

研究了氧化应激对肾细胞Vero细胞的损伤及EGCG的保护作用。用MTT、吖啶橙染色和DNA凝胶电泳等方法研究了H2O2和Cr6+应激对Vero细胞的损伤,及EGCG对凋亡细胞的保护作用及其机理。结果表明,H2O2和Cr6+剂量效应地抑制Vero细胞活性,IC50分别为175.6和9.8mgL-1;其中50 mgL-1 H2O2和400 mgL-1/2h Cr6+可诱导Vero细胞凋亡。0~60 mgL-1 EGCG有效抑制H2O2和Cr6+应激引起的细胞活性下降,且40 mgL-1 EGCG显著抑制细胞凋亡。对于Cr6+所诱导的细胞凋亡,EGCG的保护作用与EDTA和Vc的协同作用效果相当,表明清除活性氧和络合金属离子都有助于减轻Cr6+应激损伤。可见,EGCG通过清除活性氧和络合离子有效地保护了肾细胞免受应激损伤,这对易遭受活性氧损伤的肾脏无疑具有一定的临床价值。     

伐地那非增加EGCG-β-乳球蛋白纳米粒对肝癌细胞的抑制作用

较高浓度的EGCG才能抑制癌细胞的增殖,通过纳米化和EGCG与其他药物的联合使用是提高EGCG生物活性的重要策略。本研究将EGCG和伐地那非(VD)同时包埋于β-乳球蛋白(β-Lg)纳米载体中,制备出EGCG-VD-β-Lg纳米粒(EVβ-NPs),体外试验证实,EVβ-NPs能提高人肝癌细胞(HepG2细胞)中Caspase-3活性,使HepG2细胞在S期产生明显的阻滞,诱发细胞核分裂,从而导致HepG2细胞凋亡。研究结果表明,将EGCG与微量的VD联合使用,并通过纳米化包埋可以显著提高EGCG的抗癌活性。这一方法在EGCG抗癌制品的开发方面具有潜在的价值。     

豆豉对早期动脉粥样硬化大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响

观察豆豉对早期动脉粥样硬化大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡及相关凋亡基因突变型p53和Fas蛋白表达的调节作用,以探讨其机制.采用高脂饲料喂养法建立大鼠早期动脉粥样硬化模型,同时连续10周灌胃给予豆豉提取物进行干预.末次给药后处死动物,光镜下观察血管平滑肌细胞的形态,透射电镜观察超微结构,采用流式细胞术检测细胞凋亡率以及凋亡相关基因突变型p53和Fas蛋白的表达.模型对照组主动脉平滑肌细胞的凋亡率及增值指数(FI)明显高于正常对照组(P＜0.05),053蛋白表达上调;豆豉干预组(20 g生药·kg-1,dO g生药·kg-1)大鼠主动脉平滑肌细胞的凋亡率明显高于模型对照组(P＜0.05),增殖指数明显低于模型对照组(P＜0.05),Fas蛋白表达上调(P＜0.05),p53蛋白表达下调(P＜0.05),光镜及透射电镜可见主动脉损伤明显较模型对照组改善.豆豉可调节早期动脉粥样硬化大鼠血管平滑肌细胞凋亡与增殖的平衡,其机制可能与调节突变型p53和Fas蛋白的表达有关.     

伐地那非增加EGCG-β-乳球蛋白纳米粒对肝癌细胞的抑制作用

较高浓度的EGCG才能抑制癌细胞的增殖,通过纳米化和EGCG与其他药物的联合使用是提高EGCG生物活性的重要策略。本研究将EGCG和伐地那非（VD）同时包埋于β-乳球蛋白（β-Lg）纳米载体中,制备出EGCG-VD-β-Lg纳米粒（EVβ-NPs）,体外试验证实,EVβ-NPs能提高人肝癌细胞（HepG2细胞）中Caspase-3活性,使HepG2细胞在S期产生明显的阻滞,诱发细胞核分裂,从而导致HepG2细胞凋亡。研究结果表明,将EGCG与微量的VD联合使用,并通过纳米化包埋可以显著提高EGCG的抗癌活性。这一方法在EGCG抗癌制品的开发方面具有潜在的价值。     

混菌发酵绿茶产脂肪酶及其对酯型儿茶素的水解作用分析

微生物的发酵作用导致黑茶加工过程中儿茶素的生物转化和总茶多酚含量的下降,这一转化过程的代谢途径和调控机制尚不清楚。通过添加冠突曲霉(Aspergillus cristatum)菌株PE-1和黑曲霉(A. niger)菌株PE-4混合发酵绿茶,采用鉴别培养基平板检测、酶活性测定和酶蛋白分离纯化,研究脂肪酶活性及其对酯型儿茶素的水解作用。两个菌株单菌发酵和混合菌种发酵绿茶条件下均可以检测到脂肪酶活性,混菌发酵酶活力高于两个菌株单菌发酵的酶活力。混菌发酵条件下获得一个分子量约为37 kDa的脂肪酶,对EGCG和ECG有不同的生物转化作用。UPLC检测结果表明,该脂肪酶对EGCG有较好的底物选择性,EGCG的水解率为94.46%,EGC的产率为63.33%;ECG的水解率为15.45%,EC的产率为4.15%。脂肪酶对EGCG和ECG的生物转化将为儿茶素代谢途径的研究和单体儿茶素的生产起到促进作用。     

EGCG纳米载体制备技术及其对EGCG活性影响的研究进展

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶中最重要的生物活性成分,在肿瘤形成的各个阶段都有抑癌活性。纳米化途径是提高EGCG稳定性和生物利用度的有效技术之一。已有较多的研究表明,多类材料可用于制备纳米粒子作为EGCG载体,并在改善EGCG生物活性方面效果显著。本文按制备纳米粒子主要材料的不同,对各类纳米粒子的制备方法、特性及其在改善EGCG的生物活性方面的研究进行了分述,并对各种纳米粒的增效作用进行了归纳总结。     

茶叶中EGCG对非酒精性脂肪肝大鼠的调脂保肝作用研究

非酒精性脂肪肝是以肝实质细胞发生脂肪堆积和脂肪变性为主要特征,并伴随机体脂质代谢紊乱的一种获得性代谢疾病。以高脂饲料喂养大鼠,建立非酒精性脂肪肝大鼠模型;以低、中、高剂量（10、50、100 mg·kg^-1）表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）分别灌胃模型大鼠,探讨茶叶中EGCG对非酒精性脂肪肝大鼠的调脂保肝作用。结果表明,与模型组相比,EGCG能显著降低血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）含量,降低丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）活性水平,提高高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）的含量,改善大鼠肝脏氧化应激状态。此外,肝脏病理切片显示,EGCG能减少肝细胞中脂滴的形成,同时脂质代谢相关基因表达量分析显示,EGCG能调理肝脏的脂质代谢。综合以上实验结果表明,EGCG能显著改善非酒精性脂肪肝大鼠的脂质代谢紊乱和脂肪性肝损伤。     

EGCG抑制四氧嘧啶致糖尿病小鼠RCCs-RAGE信号轴表达的研究

糖基化终末端产物（AGEs）和4-羟基任烯醛（4-HNE）等活性羰基化合物（Reactive carbonyl compounds,RCCs）激活的RCCs-RAGE（Receptor for AGEs,RAGE）信号轴在糖尿病、神经退行性疾病、癌症等衰退性疾病的发生发展中起了关键性的作用。本研究采用四氧嘧啶腹腔注射的方法建立糖尿病小鼠模型,探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin Gallate,EGCG）阻抑四氧嘧啶致糖尿病小鼠RCCs-RAGE轴表达的活性。糖尿病小鼠按其体质量与血糖值随机均匀分为模型组、EGCG低剂量组（10 mg·kg^-1·d^-1）、EGCG中剂量组（20 mg·kg^-1·d^-1）和EGCG高剂量组（30 mg·kg^-1·d^-1）。小鼠连续灌胃EGCG 12 d后,检测小鼠血清中血糖值、胰岛素和水溶性RAGE（sRAGE）浓度、羰基蛋白含量、AGEs荧光值,QPCR检测肾脏RAGE基因相对表达量,Western blot方法检测肾脏RAGE蛋白和4-HNE含量。结果显示,与糖尿病造模组相比,EGCG通过抑制4-HNE、AGEs等RCCs毒性活性羰基化合物的生成,增加sRAGE血清浓度,抑制AGEs-RAGE信号轴介导的炎症瀑布反应,有效缓解了机体的氧化应激压力,表现出很好的保护糖尿病小鼠的活性。本研究从一个新角度揭示了EGCG抑制RCCs-RAGE信号轴是其防治衰退性相关疾病的潜在作用机制之一。     

表没食子儿茶素没食子酸酯和维生素C联用对高尿酸血症小鼠血尿酸水平的影响

以KM雄性小鼠为研究对象,酵母膏（7.5 g·kg^-1）和氧嗪酸钾（250 mg·kg^-1）联合给药建立高尿酸血症小鼠模型,探究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）和维生素C（Vc）联用对高尿酸血症小鼠血尿酸水平的影响。将小鼠随机分为6组（n=6）：空白组、模型组、别嘌呤醇组（阳性药组）、EGCG组、EGCG联合Vc组和Vc组,连续给药7 d后测定生化指标。结果表明,与模型组相比,EGCG联合Vc组小鼠的血尿酸值（UA）,血尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）水平均明显降低（P<0.001）;EGCG与Vc联用明显抑制了肝脏中腺苷脱氨酶（ADA）和黄嘌呤氧化酶（XOD）的活性（P<0.05或P<0.01）,并显著下调了肾脏中葡萄糖转运蛋白9（GLUT9）mRNA的表达（P<0.001）;肾脏切片显示EGCG和Vc联用显著改善高尿酸血症小鼠的肾脏损伤。此外,EGCG与Vc联用对高尿酸血症小鼠的作用效果优于EGCG。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对卡莫司汀处理后张氏肝细胞DNA损伤的保护作用

采用MTT法、Cometassay(彗星实验)和流式细胞分析法研究了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对卡莫司汀引起的张氏肝细胞DNA损伤的保护作用及其机制。结果表明:EGCG能阻止卡莫司汀所致张氏肝细胞的生长抑制,卡莫司汀单用对张氏肝细胞的IC50为43.31μg/ml,当用无毒浓度25μg/ml和50μg/ml的EGCG与卡莫司汀联用时,对张氏肝细胞的IC50分别提高至52.46μg/ml和46.65μg/ml。彗星分析结果表明EGCG还能减小卡莫司汀引起的张氏肝细胞DNA损伤,彗星Olive尾矩值由单用时的9.07±5.48降为联用时的6.02±2.46。EGCG还能减小卡莫司汀所致张氏肝细胞的早期凋亡率,25μg/ml的EGCG和20μg/ml的卡莫司汀联合处理4、6h和24h时,早期凋亡率分别从4.53±0.64(%)、6.01±0.14(%)、2.27±0.32(%)降至3.04±0.47(%)、5.61±0.10(%)、1.14±0.23(%)。说明EGCG能保护卡莫司汀对正常肝细胞的杀伤,其机理是它能减少这类药物引起的细胞DNA损伤,降低卡莫司汀所致细胞早期凋亡。     

The beneficial effect of (-)-epigallocatechin-3-gallate in an experimental model of Alzheimer's disease in rat: a behavioral analysis

BACKGROUND: Progressive cognitive decline is one of the hallmark symptoms of Alzheimer's disease (AD) which can be modeled by beta-amyloid injection into specific regions of brain. Since epigallocatechin-3-gallate (EGCG) is a potent antioxidant agent which its role against oxidative stress and inflammation has been shown in prior studies, we tried to determine whether EGCG administration protects against beta-amyloid-induced memory and coordination impairment in rats. METHODS: Animals (male Wistar rats) were divided into four groups: sham operated, EGCG-pretreated sham operated (sham+EGCG), untreated lesion (lesion), and EGCG-pretreated lesion (lesion+EGCG). Animals in lesion, lesion+EGCG, and sham+EGCG groups received sterile saline or saline plus EGCG (10 mg/kg) intraperitoneally one day pre-surgery and every other day for three weeks. The lesion was induced one day after EGCG pretreatment by injection of 4 microl of sterile saline or water containing 2 nmol/microl beta-amyloid (1-40) into the hippocampal fissure. For behavioral analysis, psychomotor coordination (PMC) index and spontaneous alternation behavior were assessed using Rota-rod Treadmill and Y-maze, respectively at the third week post-lesion. RESULTS: We found that beta-amyloid (1-40) injection into hippocampus can decrease these behavioral indexes in lesion group in comparison with sham group which is similar to behavioral changes in AD. On the other hand, pretreatment with EGCG can improve the PMC index and spatial Y-maze alternation in the lesion+EGCG group in comparison with lesion group. CONCLUSION: We concluded that EGCG can be effective in restoring beta-amyloid-induced behavioral derangements in rats regarding coordination and memory abilities.