大豆子叶节再生体系的建立

以吉农28、吉农27、吉农17三个基因型大豆子叶节作为外植体,采用正交实验设计方法,对大豆的基因型和子叶节再生中植物生长调节剂浓度进行了研究。结果表明:适合大豆子叶节不定芽诱导的基因型是吉农27,最佳诱导培养基是MS+6-BA3.Omg/L+IBA0mg/L+2,4-D0mg/L。适合大豆子叶节不定芽继代的基因型是吉农17,最佳继代培养基是MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L。适合大豆子叶节不定芽增殖的最佳基因型是吉农27,最佳增殖培养基是MS+6-BA1.Omg/L+NAA0.1mg/L+GA31.Omg/L。     

改良大豆子叶节再生体系的研究

采用大豆种子萌发5~6 d后的子叶节作外植体，对农杆菌介导的大豆遗传转化系统及其影响因素进行了研究。结果表明，将子叶节与农杆菌共培养60 h后放入含卡那霉素50 mg/L的诱芽培养基上，待苗长至4~5 cm后放入生根培养基中进行生根，最后移栽到培养土中，效果较好。对大豆遗传转化再生的主要因素，如大豆基因型、诱导出芽所需激素浓度、卡那霉素筛选压力等条件做了一系列的研究，建立了一个比较好的遗传转化系统，其转化率达到2.8%。     

不同基因型对白菜子叶培养不定芽再生的影响

探讨了基因型对白菜子叶培养不定芽再生的影响。结果表明，不同基因型的不定芽再生率和平均每子叶生芽数差异极大，在被检索的123个大白菜和20个小白菜品种中，芽再生率为0－97.5%，平均每子味生芽数为1.0-10.7个。17个大白菜和5个小白菜品种的不定芽再生率在80％以上。芽再生率与品种起源地、结球类型及熟性无相关。     

纳米材料钼对大豆子叶节诱导的影响

为提高大豆子叶节转化效率,以豫豆22为试验材料,研究不同浓度(0,20,40,60 mol/L)纳米材料钼(Mo)对大豆子叶节的影响.结果表明,纳米材料钼对出芽、抽茎和生根都有促进作用,在0～40 mol/L范围内随着浓度的升高逐渐增加,40 mol/L时达到最大值,出芽率、抽茎率和生根率分别比对照提高了13.54％、13.18％和11.96％;在60 mol/L时,3项指标均下降,出芽率仍显著高于对照,抽茎率降至与对照无显著差异,生根受到抑制,生根率下降了4.76％,显著低于对照.因此,在0～40 mol/L浓度范围内,向培养基中添加纳米材料钼可以提高大豆子叶节的诱导效果.     

棉花子叶节芽分化培养基的优化研究

以陆地棉百棉1号为材料,离体培养子叶节,对芽分化培养基中6-BA和KT的使用浓度进行了优化;6-BA和KT浓度各设置(0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、5.0 mg/L)5个梯度,比较了单独使用6-BA、KT和2种激素组合时对诱导多芽发生的差异;结果显示,单独使用6-BA对诱导芽分化效果较好,单独使用KT可以在芽分化的同时,诱导根的生成.组合使用两种激素时,效果优于单独使用;组合使用1.0mg/L6-BA+2.0mg/L KT时效果最佳.     

农杆菌介导大豆子叶节遗传转化的研究

直接以农杆菌转化系统为平台,以栽培大豆(Glycine max L.) 吉林35、中黄28、南农、铁丰29、铁丰30、开育12的子叶节为外植体,用LBA4404 农杆菌（含pPC-KSA质粒）研究了影响大豆子叶节转化的因素。结果表明,大豆品种之间转化存在着差异,吉林35转化率最高,平均转化率为2.16%,单次最高转化率达6.12%;中黄28次之,平均转化     

诱导不同基因型大豆未成熟子叶体细胞胚胎发生的研究

以未成熟子叶为外植体,研究25种基因型对大豆愈伤组织形成与体细胞胚胎发生的影响。结果表明,大豆不同基因型间愈伤组织诱导率变化较小,而基因型对体细胞胚胎发生的影响较大,依基因型不同体细胞胚诱导率变化在3.33%～83.33%。体细胞胚诱导率、平均胚数在基因型间的差异均达极显著水平,且两者间存在极显著相关关系。     

不同黄瓜基因型子叶再生体系的建立

以6个不同黄瓜品种和自交系为试材,研究了基因型、激素(6-BA、ABA)对黄瓜离体子叶再生的影响。结果表明:不同基因型黄瓜之间的再生频率差异较大,吉林旱瓜为最佳基因型,在培养基M7(MS+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LABA+2mg/LAgNO3)上再生频率最高达97%,平均每外植体再生芽数为5.2;与对照相比,6-BA、ABA和AgNO3组合能促进芽的再生,显著提高再生芽数,其中6-BA是黄瓜子叶再生的必要激素,而ABA是促进子叶高效再生的激素;此外,MS培养基添加0.1mg/L6-BA能显著促进再生不定芽的伸长。     

蓖麻子叶节遗传转化研究

利用前期构建的P450基因的RNAi植物表达载体侵染蓖麻受体材料,旨在获得转P450基因的阳性株。以蓖麻品种通蓖5号为试验材料,利用根癌农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,研究影响子叶节遗传转化的若干因素。结果表明:子叶节对Kan较为敏感,适宜筛选质量浓度为250 mg/L;外植体预培养2～3 d,侵染用农杆菌菌液OD600=0.8,侵染时间10 min,共培养3 d,可获得较高的遗传转化效率。再生植株经PCR和Southern Blot检测,证明为转基因植株。     

大豆子叶节植株再生体系的优化及转EPSPS基因的研究

为提高农杆菌介导转化大豆子叶节再生体系的遗传转化效率,优化了激素水平、基因型、抗生素及筛选压力等影响植株再生的多个因素,并用EPSPS基因转化大豆子叶节。结果表明,不定芽诱导培养基中6-苄氨基嘌呤(6-BA)浓度为1.6mg/L时,不定芽诱导率最高,黑农37和合丰35的不定芽诱导率较吉育91高,吲哚丁酸(IBA)诱导生根的适宜浓度为0.5~1.0mg/L。头孢霉素的最适抑菌浓度为500mg/L,草甘膦有效筛选压力为8mg/L,并获得转EPSPS基因的抗性植株。     

杜梨子叶离体再生体系的建立

为梨树品种改良、遗传转化及功能验证奠定基础,以杜梨(Pyrus betulaefolia)子叶外植体为试验材料,研究了基本培养基、植物生长调节剂、暗培养时间、碳源、外植体等因素对其再生能力的影响,筛选出适合杜梨不定芽分化的培养及生根培养条件,建立杜梨子叶的再生体系。结果表明,子叶诱导不定芽生长最佳培养基为NN69+6-BA5mg/L+IBA0.05mg/L+蔗糖35g/L,再生频率为100%;出芽后最佳继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,平均再生芽数4.84;诱导不定芽生根最佳培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+蔗糖30g/L,生根率为80%。通过上述条件的优化,建立了杜梨子叶高效的再生体系。     

甘蓝型油菜带节子叶再生体系的建立及遗传转化应用

优良再生体系的建立是农杆菌介导植物遗传转化的基础。本研究建立以甘蓝型油菜含部分子叶节的子叶为外植体的再生体系,该再生体系为:切取5日苗龄甘蓝型油菜含部分子叶节的带柄子叶为外植体,置于添加3 mg/L6-BA的MS基本培养基中培养5天,外植体再生出丛生不定芽,不定芽再生率为100%。基于新建立的带节子叶再生体系,通过农杆菌介导,成功地将用p FGC5941载体构建的Bn TFL1基因干扰载体转入甘蓝型油菜中,从播种到得到生根抗性苗,整个转化周期只需要60~70天,较传统甘蓝型油菜以不带节子叶为外植体100~130天的转化周期大大缩短。     

番茄子叶和下胚轴离体再生体系建立

以番茄无菌苗子叶和下胚轴为外植体,研究其在MS附加不同浓度6－BA和NAA的培养基上的分化情况。结果表明：在不同培养基上,番茄子叶和下胚轴均能诱导出淡绿色的愈伤组织和分化形成不定芽,但在不同的培养基上,番茄子叶和下胚轴的出愈率和不定芽诱导存在明显差别。诱导番茄愈伤组织形成和芽分化的最佳培养基分别为：MS+6-BA 2 mg/L+IAA 0.2 mg/L和MS+6-BA 2 mg/L+IAA 0.02 mg/L,番茄不定芽生根培养基为：MS+IAA0.2 mg/L。     

章丘大葱子叶再生体系建立及再生株倍性鉴定

以章丘大葱子叶为材料,研究了不同激素配比对愈伤组织诱导和继代、芽分化、芽点的伸长及根诱导的影响,并对获得的再生植株进行了鉴定。结果表明,诱导章丘大葱子叶产生愈伤组织、愈伤组织的继代培养、愈伤组织芽分化、芽点的伸长及诱导生根的最佳培养基及激素配比分别为：MS+2,4-D 2.0mg/L+KT 0.5mg/L、MS＋2,4-D 2.5mg/L＋KT 0.5mg/L、MS+2,4-D 0+KT 1.0mg/L、MS+KT 0.5mg/L和MS基本培养基;试管苗经驯化移栽后,共有22株成活,成活率为92%,对成活的再生植株进行形态学、叶片气孔及根尖染色体鉴定表明,共有3株发生变异,其中2株为外部形态上的变异,而另一株为染色体的加倍变异。     

盐胁迫对大豆幼苗子叶各细胞器超氧化物歧化酶(SOD)的影响

大豆幼苗子叶各细胞器的SOD活性以细胞溶质为最高,约占80％;线粒体次之,为11％;叶绿体部分最少,9.0％左右。各细胞器的SOD对盐胁迫反应敏感程度不同,依次为叶绿体>线粒体>细胞溶质。品种间,各细胞器之间以及对照和处理间差异均达到显著水平,10ds/m和15ds/m差异不显著。电泳酶谱的扫描结果表明,在盐胁迫条件下SOD_a(Mn SOD)最为稳定,SODb_1b_2b_3、SODc_1c_2c_3(Cu—Zn—SOD)将随盐胁迫增强依次从叶绿体到线粒体,从SODc_3、SODc_2到SODc_1、SODb_3逐渐减弱或消失。耐盐品种和敏感品种的主要差异集中在叶绿体SOD酶谱上,推断SODc_1c_2c_3与大豆耐盐性有关。     

大豆组织培养再生系统的研究进展

大豆因其愈伤组织难以分化、原生质体再生困难等因素,其再生体系一直不够完善。直到20世纪80年代初期,才成功建立了大豆的体细胞胚胎发生和器官发生再生系统。80年代末期原生质体培养获得突破。介绍了大豆器官发生再生系统、体细胞胚胎再生系统和原生质体再生系统的研究进展;对这3种再生系统进行遗传转化的优缺点作了比较;并提出了关于大豆遗传转化再生系统的几点展望。     

大豆体细胞胚胎发生再生体系的建立与优化

以耐干旱、增产潜力大、抗病毒病、品质优良的晋豆19号大豆为材料,以子叶节、下胚轴、上胚轴、子叶、真叶为外植体,研究外植体类型、激素配比、接种方式等对再生频率的影响。结果显示:无菌苗刚转绿的下胚轴是诱导愈伤组织的最适外植体;诱导愈伤的最适培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D;诱导芽分化的最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA;诱导根分化的最适培养基为MS+0.25 mg/L NAA。各种外植体中,诱导频率高低依次为下胚轴、上胚轴、子叶节、子叶、真叶。     

无籽西瓜子叶离体培养及植株再生研究

以无籽西瓜黑蜜5号无菌苗子叶为材料,对组织培养植株再生的条件进行了详细的研究。研究结果表明：子叶芽诱导的最佳培养基配方为MS＋6-BA3.0mg/L＋NAA0.1mg/L。芽的诱导需要先在黑暗条件下启动,生长分化则须在光下进行。适宜的生根培养基配方为1/2MS＋IAA0.4mg/L和1/2MS＋IBA0.3mg/L。试验初步建立了适用于无籽西瓜遗传转化和快速繁育的子叶再生系统。