皱纹盘鲍淀粉酶和褐藻酸酶的研究

利用分光光度计比色法测定了２～３ｃｍ的皱纹盘鲍（ＨａｌｉｏｔｉｓｄｉｓｃｕｓｈａｎｎａｉＩｎｏ）的淀粉酶和褐藻酸酶的最适温度和最适ｐＨ以及１１种金属离子对其的影响。结果表明：最适温度分别为３０℃、３５℃,最适ｐＨ分别为６．２４、７．１９,在最适温度下的活化能分别为５．０３×１０４Ｊ／ｍｏｌ和１．３３×１０４Ｊ／ｍｏｌ;皱纹盘鲍的三种主要消化酶的活性依次为：褐藻酸酶＞蛋白酶＞淀粉酶。Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋、Ａｇ＋、Ｐｂ２＋对淀粉酶活性具有显著的抑制作用,其他离子则具有促进作用,其中又以Ｍｎ２＋、Ｂａ２＋、Ｃａ２＋三种金属离子尤为突出,其促进作用比对照组高一倍以上。而对褐藻酸酶,Ｚｎ２＋、Ａｇ＋、Ｈｇ２＋、Ｌｉ２＋、Ｂａ２＋具显著的抑制作用,其他离子则没有作用。     

壳聚糖固定化海洋微生物YS2071脂肪酶及其酶学性质

采用壳聚糖为载体,优化了海洋微生物YS2071脂肪酶的壳聚糖固定化条件。结果显示,在壳聚糖浓度为2% (m/v)、氢氧化钠浓度为12% (m/v)、乙酸浓度为1% (v/v)、戊二醛浓度为0.25% (v/v)、与戊二醛交联的时间为12 h及添加2 ml (1120 U)的游离脂肪酶时,固定化脂肪酶的活力最高,其活力回收率达到69.4%。对游离脂肪酶与固定化脂肪酶的酶学性质进行比较,结果显示,游离脂肪酶的最适反应温度为40℃,而固定化脂肪酶的最适反应温度为45℃,固定化脂肪酶的温度稳定性明显优于游离脂肪酶。最适反应pH均为8.0,脂肪酶经过固定化之后,酸碱耐受性增大。重复利用10次的固定化脂肪酶的酶活力保留率仍高于65%。固定化脂肪酶贮藏半衰期为96 d,而游离脂肪酶的贮藏半衰期是33 d。固定化脂肪酶与游离脂肪酶的酶活力保留率在不同有机试剂中表现出不同的稳定性。     

九孔鲍褐藻酸酶降解褐藻胶的反应条件与酶解产物的分析

以九孔鲍(Haliotis diversicoloeaquatilis)为原料制备一定纯度的褐藻酸酶,并对影响其降解褐藻胶的条件和产物的性质进行分析。该酶的最适温度和pH分别为45℃和7.0;与磷酸盐缓冲液相比,其在Tris-HCl缓冲液中与底物的亲和力相对较高。动力学曲线表明酶解反应主要发生在1 h之内,在2 h之内达到平衡,酶的剂量和底物的浓度对该平衡起到一定的影响作用。反应2 h之后,添加同数量的酶或者底物发现,产物的反馈抑制只是反应达到平衡的一个影响因素,而酶的变性失活也起到了重要的作用。金属离子对酶的活性具有明显的影响,Co2 、Mg2 对酶的活性具有较强的促进作用,而Cu2 、Ag 和Zn2 则具有较强的抑制作用。产物特性黏度的变化主要是在1 h内,2 h后基本不再改变。1HNMR图谱分析发现随着聚甘露糖片段,特别是M-M二聚体的降解,MG二聚体、GGM和MGM三聚体的量相应增多,表明该酶属于甘露糖裂解酶(EC 4.2.2.3)。     

褐藻酸酶的制备及对海带细胞解离的应用研究

褐藻中富含褐藻酸,应用酶解法制备褐藻单细胞和原生质体时,高活性的褐藻酸酶是所用工具酶中的主要组分。文中介绍了用硫酸铵二级盐析和透析袋脱盐从鲍鱼的消化腺中提取褐藻酸酶的方法,测定酶活力及蛋白含量,检测该褐藻酸酶对海带细胞的解离效果。结果显示,该褐藻酸酶比活力为12 U/mg,酶活力单位为34 U/m L,得率为1.4%。用含此褐藻酸酶的酶解液解离海带细胞,酶解3~6 h内可得到游离单细胞及原生质体的数量在3×105~6×105个/g。该褐藻酸酶解离海带细胞效果显著,且本方法简单、快捷且经济。     

壳聚糖固定化胰蛋白酶制备牡蛎肽的研究

以壳聚糖为载体固定化胰蛋白酶,制备牡蛎肽,然后以肽得率为指标,分别研究了pH值,酶加量,酶解时间和温度等单因子对固定化胰蛋白酶酶解牡蛎蛋白质的影响。实验结果表明,酶解牡蛎蛋白的最佳工艺条件是:底物浓度为200μg/mL,加固定化胰蛋白酶量7mg/3mL,酶解时间3h,pH 8.0,温度40℃。在此条件下水解牡蛎蛋白,肽得率可达到20.39%。     

壳聚糖固定化胰蛋白酶制备魁蚶肽的研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂固定化胰蛋白酶,制备魁蚶肽.以肽得率为指标,研究了固定化胰蛋白酶量、时间、pH、温度和底物浓度等单因子对固定化胰蛋白酶酶解魁蚶蛋白质的影响.结果表明,酶解魁蚶蛋白的最佳工艺条件:固定化胰蛋白酶6 mg,水解反应时间4 h,温度50 ℃,pH 8.0,底物质量浓度98 μg/ml.在此条件下,魁蚶肽得率为23.93%.     

壳聚糖固定化海洋低温碱性蛋白酶YS-80-122的研究

以壳聚糖为固定化载体,采用吸附交联法,以戊二醛为交联剂,对海洋低温碱性蛋白酶YS-80-122进行固定化。通过单因素和正交试验优化得到最佳固定化条件为pH7·0,戊二醛终浓度0·2%,吸附时间50min,酶载体比例40mg/g,交联时间16h,交联温度10℃,固定化酶酶活回收可达47·52%。固定化酶和游离酶的最适作用温度均为30℃,最适作用pH分别为9·0和10·0,相比游离酶,固定化酶可在更宽的温度和pH范围内发挥高活性,且其温度和pH稳定性得到显著提高。室温下经冷冻干燥的固定化酶贮存90d后活性基本保持不变,贮藏半衰期约为190d。以酪蛋白为底物,重复使用7次后酶活仍保留有79·2%,操作半衰期约为21次使用率。     

鱼肉酶解物及壳聚糖对鲤鱼涂膜保鲜效果的研究

以感官评分、挥发性盐基氮、菌落总数、K值为指标,研究比较了鱼肉酶解物和壳聚糖为原料的涂膜液对鲤(Cyprinus carpio)(4℃)冷藏过程中品质变化的影响。结果显示:贮藏期间,对照组的感官评分显著低于各涂膜组(P<0.05)。贮藏前8 d,涂膜组能够显著抑制K值的升高(P<0.05)。鱼肉酶解物和壳聚糖涂膜组均能够显著抑制细菌的生长,而贮藏2～6 d内鱼肉酶解物涂膜鲤鱼的菌落总数显著低于壳聚糖涂膜组(P<0.05)。贮藏后期,鱼肉酶解物组能延缓TVB-N值的升高,壳聚糖涂膜组能够显著抑制TVB-N值的升高(P<0.05)。鱼肉酶解物可作为一种新的可食性涂膜材料,用于延长鲤鱼的贮藏期。     

固定化木瓜蛋白酶水解甲壳胺的研究

木瓜蛋白酶经戊二醛固定于自制的甲壳质上制成固定化木瓜蛋白酶，其水解甲壳胺的最佳条件是：45℃，pH4.0的1％的甲壳胺溶液（醋酸缓冲液配置），酶／底物比1：3．5（质量比）。震荡反应24h后，用超滤器分离不同分子量的甲壳胺低聚糖产物，结果产物中分子量小于10000的甲壳胺低聚糖得率约为45．55％，分子量小于5000的约为34．0％，优于游离木瓜蛋白酶水解甲壳胺的效果。此固定化酶可反复使用至少10次以上，总反应时间达192h，提高了酶的使用效率和酶解效果。     

微生物固定化载体筛选及其水质处理效果研究

为得到吸附能力强、水质处理效果良好的微生物固定化载体,本实验沸石、火山石、陶环、核桃壳、牡蛎壳五种不同载体对蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus,NY5株)的负载性能,以及在以养殖废水作为空白对照,游离NY5作为阳性对照的条件下,不同载体固定NY5对养殖的处理效果,并利用主成分分析法对水质处理效果进行综合评价。结果显示:沸石和牡蛎壳对NY5的负载性能较好,载菌量分别达1.25×10~9、9.0×10~8CFU/g;在养殖废水处理方面,火山石NY5组第7天、牡蛎壳NY5组第21天时NH_4~+-N浓度与空白对照相比分别降低53.4%、56.6%;火山石NY5组第7天时NO_3~--N浓度与空白对照相比降低87.9%;第28天时火山石NY5组、牡蛎壳NY5组NO_2~--N浓度与空白对照相比分别降低90.1%、80.2%;第14天时火山石NY5组TN浓度与空白对照相比降低51.6%。从主成分分析的结果也可以看出,火山石NY5组和牡蛎壳NY5组对养殖废水综合处理效果较好。     

锈凹螺褐藻胶裂解酶的分离纯化及性质研究

采用硫酸铵沉淀、离心超滤、DEAE-Sephadex A25、Sephadex G-100和Sephacryl S-300 HR 柱层析等方法从海洋食藻性锈凹螺(Chlorostoma rustica)消化腺中分离纯化出一种褐藻胶裂解酶(Alginate lyase),得到电泳纯酶制品,并对此酶的酶学性质进行了研究.结果表明:此褐藻胶裂解酶的分子量为28 kD,反应的最适温度为40 ℃,具有热不稳定性,最适pH为7.0;酶的反应受多种离子的影响,Mn2 、Co2 和Cd2 对此褐藻胶裂解酶活性具有明显的抑制作用,而Mg2 、Zn2 、Na 和K 则具有促进作用;采用透明圈法和底物法验证了此裂解酶对聚甘露糖醛酸和聚古洛糖醛酸的特异性,实验表明,此酶对聚古罗糖醛酸(Polyguluronate,PG)有特异性.     

基于酶技术生产低黏度及超低黏度褐藻胶的工艺

为解决当前低黏度及超低黏度褐藻胶生产工艺中存在的不足,本实验以海带为原料,利用褐藻胶裂解酶降解制备低黏度及超低黏度褐藻胶,研究了分子量、p H、温度对黏度的影响,确定了碱消化的最佳条件,探究了酶解工艺中加酶量、酶解时间及原料的初始黏度对褐藻胶产品的影响。结果显示,通过控制加酶量(100~500 U/g),酶解30 min即可得到低黏度及超低黏度褐藻胶,其中加酶量为100~330 U/g时可得到低黏度褐藻胶,加酶量增加至330~500 U/g时,可得到超低黏度褐藻胶,且酶解法得到的褐藻胶样品分子量均一度高,工艺节水率高达10%~50%;同时研究发现酶解样品黏度与原料初始黏度相关性不大,只在较短时间内表现出相关性,该工艺具有较高的原料适用性。     

皱纹盘鲍内脏酶的酶学性质及褐藻胶裂解酶的分离纯化

采用(NH4)2SO4分段盐析、透析、阴离子(DEAE-52)交换柱层析、SephadexG-200凝胶柱层析等分离纯化技术,通过SDS-PAGE电泳分析了皱纹盘鲍内脏酶的组成,结果表明鲍内脏酶主要含有两种褐藻胶裂解酶Ⅰ, Ⅱ,一种纤维素酶,一种琼脂酶。对酶的酶学性质分析结果表明两种褐藻胶裂解酶Ⅰ, Ⅱ的最适pH分别为8.6, 7.2,最适温度为35 ℃,分子量分别为35.2 ku, 67 ku;两种褐藻胶裂解酶的热稳定性比较差,且易受金属离子影响;纤维素酶的最适pH为5.0,最适温度为40 ℃。并确定了皱纹盘鲍内脏酶分离纯化的方法及参数,为进一步研究鲍内脏复合酶的性能提供了基础参数。图14表3参12 关键词：皱纹盘鲍; 褐藻胶裂解酶; 纤维素酶; 纯化 E-mail：wqk320@dlfu.edu.cn     

Isolation of alginate lyase‐producing bacteria and screening for their potential characteristics as abalone probionts.

This study is aimed at the isolation and screening of alginate lyase‐producing bacteria from the gastrointestinal tracts of hybrid abalone, Haliotis rubra x H. laevigata, as probiotic candidates. Six bacterial isolates were detected to produce alginate lyase. Of these, the isolate with the highest alginate‐lyase activity was identified as Enterobacter ludwigii strain EN‐119, displaying 99% similarity of 16S rDNA sequence. Further assays indicated that E. ludwigii showed good viability and stability when it was incorporated into manufactured pellets and stored at 4°C for 7 days. The isolate also had high tolerance of high salinity (35 mg/L), low pH in simulated stomach juice (5) and to simulated intestinal juice containing surfactants such as bile salts and gastric enzymes (pepsin and trypsin). Additionally, a short, preliminary study indicated that supplementation of E. ludwigii via manufactured pellets improved the total weight gain and specific growth rate of hybrid abalone. These results suggest that E. ludwigii is a potential probiont for shortening the culture period of hybrid abalone.     

抗菌性海藻酸钠涂膜在罗非鱼片保鲜中的应用

采用测定涂膜抑菌性能、缓释效果来探讨抗菌性海藻酸钠涂膜的抑菌机理并将其应用在罗非鱼片的涂膜保鲜中。实验结果表明,抗菌膜是一种具有缓释效果的保鲜膜,对大肠杆菌Esche-richia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、腐败希瓦氏菌Shewanella putrefaciens及鱼片表面其他杂菌均有较好的抑制效果,保鲜剂在40h内可从涂膜中完全释放;与未经涂膜处理的对照组相比,抗菌膜可以明显控制鱼片细菌总数的增长、维持较低的挥发性盐基氮值和改善鱼片的感官质量,综合考虑鲜度指标并本着以感官评分为基础的原则,抗菌涂膜处理可以将罗非鱼片的保鲜期延长约5.5d。     

壳聚糖对鲢鱼糜凝胶特性的影响

将壳聚糖添加到鲢鱼糜制品中,测定鱼糜制品的凝胶强度、全质构(TPA)、失水率和色泽,研究壳聚糖的脱乙酰度(DD)、分子量(MW)以及添加量对鲢鱼糜凝胶特性的影响,采用电镜扫描观察凝胶的微观结构,结果表明,壳聚糖DD对鱼糜制品凝胶特性影响较大,DD为64%时,凝胶强度提高了约34%,失水率减少了29.1%;壳聚糖MW对鱼糜制品的凝胶强度影响小;随着壳聚糖添加量的增加,鱼糜凝胶强度、TPA都有明显的增加,失水率减少(P<0.05),添加1.0%壳聚糖的鱼糜凝胶强度与添加4.0%淀粉的鱼糜凝胶强度相当;微观结构可看出壳聚糖与鱼糜形成网络结构。结果说明壳聚糖是鱼糜制品良好的品质改良剂。     

强力霉素壳聚糖纳米粒冻干粉的制备及其稳定性研究

采用离子交联法和冷冻干燥法制备强力霉素壳聚糖纳米粒冻干粉,并以包封率为评价指标,正交试验优化处方与工艺,用透射电镜观测其形态,纳米粒度及电位分析仪测定其粒径大小、分布和电位,并考察其热、光和高湿稳定性.结果显示,按壳聚糖浓度为2.5 mg/mL、三聚磷酸钠浓度为1.2 mg/mL、强力霉素用量为8.0mg、pH值为5....     

壳聚糖对异育银鲫生长和消化酶的影响

以基础饲料为对照,以在基础饲料中分别添加0.125%、0.25%、0.5%、0.75%、1%的壳聚糖为实验饲料,饲养异育银鲫（Carassius auratus gibelio）60 d,与对照组比较生长、成活、饲料系数、蛋白质效率、鱼体营养成分、白肌RNA/DNA比值及肝胰脏、肠道的蛋白酶、淀粉酶活性.结果表明,本次实验所添加壳聚糖对异育银鲫的成活率、鱼体营养成分和白肌的RNA/DNA比值均无显著影响（P＞0.05）.添加0.5%、0.75%和1%壳聚糖可以显著提高异育银鲫的特定生长率和蛋白质效率,显著降低异育银鲫的饲料系数.添加0.5%壳聚糖可以显著提高异育银鲫肠道的淀粉酶活性;添加0.75%和1%壳聚糖可以显著提高肠道和肝胰脏的蛋白酶活性和肠道的淀粉酶活性.[中国水产科学,2006,13（3）：440-445]