玉米蛋白多肽对鹅不同组织脂肪酸合成酶定位表达的影响

选用免疫组化技术,探讨玉米蛋白多肽对鹅不同组织脂肪酸合成酶（fatty acid synthase,FAS）定位表达的影响。选取1日龄昌图豁鹅240只,公母各半,随机分为4组,每组设6个重复,每个重复10只。对照组饲喂基础日粮低、中、高剂量组分别于基础日粮中添加玉米蛋白多肽100、300、500 mg/kg。于30和60日龄分别采集动物肝脏和皮下脂肪组织,运用免疫组化法分析两种组织中FAS的表达量及分布。结果表明,鹅两种组织中FAS的表达主要分布在肝脏内皮细胞胞质和胞核及脂肪细胞膜上,且随着鹅日龄增加,FAS含量均增加;玉米蛋白多肽的添加可促进鹅肝脏中FAS的表达,抑制脂肪组织中FAS的表达;高、中、低3个剂量组肝脏中FAS含量,鹅60日龄时分别比30日龄升高47.75%、36.21%、158.74%,增幅均高于对照组（11.00%）;而60日龄时,3个剂量组脂肪组织中FAS含量分别比30日龄降低22.34%、46.43%、49.17%。结果提示,玉米蛋白多肽呈现双重作用,在鹅日粮中较长时间低剂量水平（100 mg/kg日粮）添加,可有效促进肝脏中FAS表达,降低脂肪组织中FAS含量,从而有利于调控机体脂类代谢,提高动物胴体品质。     

葛根素对性未成熟小鼠乳腺发育的影响

用电子天平称小鼠体重,电子分析天平称乳腺重量,以纸片比值重量法称乳腺轮廓和实质重量,H·E染色法制作组织切片计数乳腺导管横切面数目,比较试验组与对照组的差异。结果:试验1组和2组小鼠42～49日龄体重增重显著(P<0.05),试验3组差异不显著(P>0.05),其他日龄段的增重差异不显著(P>0.05);试验组对乳腺重量增重无显著性差异(P>0.05);乳腺轮廓和实质的纸片比值重量法中,试验组无显著性差异(P>0.05);试验1组和2组乳腺导管的增殖极显著(P<0.01),试验3组有显著性差异(P<0.05)。试验结果说明,葛根素对性未成熟小鼠乳腺发育有显著的促进作用,其中试验2组的促进作用最显著。     

小鼠NIS蛋白的生物信息学特征及其在乳腺中的表达分析

为探究小鼠钠碘转运体（Na⁺/I^- symporter,NIS）蛋白的结构、功能及其在乳腺组织的表达特征,本研究扩增小鼠乳腺NIS基因编码区,测序鉴定后采用结构预测软件对NIS蛋白进行生物信息学分析,同时采用Western blotting、免疫组织化学技术和半定量PCR技术对NIS基因在不同乳腺发育时期的转录和表达水平进行分析。结果显示,小鼠NIS基因编码区全长1 857 bp,与人NIS的同源性为80.40%,保守性较强。NIS蛋白含有618个氨基酸残基,分子质量约为65.7 ku,分子式为C₂₉₉₆H₄₇₀₁N₇₄₉O₈₃₃S₃₂,理论等电点为7.44,半衰期为30 h,消光系数为102 510,不稳定系数为29.31,脂溶系数为105.91,富含疏水性氨基酸,为稳定的疏水蛋白。NIS蛋白二级结构含有α-螺旋（41.42%）、延伸链（18.28%）、β-转角（4.05%）和无规则卷曲（36.25%）,三级结构与之相一致。Western blotting结果显示,4个时期均出现特异性杂交带,大小为65.7 ku,与预期结果相符。免疫组织化学结果表明,NIS蛋白在小鼠的青春期、妊娠期到泌乳期的乳腺组织中表达量逐渐增加,在泌乳期达到高峰,存在显著差异（P<0.05）,在退化期逐渐恢复到类似青春期状态;NIS基因mRNA的变化规律与蛋白表达一致。本研究结果为进一步探究NIS蛋白在乳腺发育和泌乳调控中的作用提供了参考依据。     

家兔消化道胃泌素细胞的免疫组织化学定位

为了研究家兔(Oryctolagus cunieulus Rabbits)消化道胃泌素(Gas)免疫活性细胞的分布及形态,试验采用免疫组织化学ABC(avidin-biotin-peroxidase complex,ABC)法。结果表明:Gas细胞在家兔消化道中除食管、结肠、盲肠外均有分布,其中以胃体数量最多,直肠次之,回肠最少,其形态多样,有锥体形、圆形、椭圆形和梭形等,以锥体形和椭圆形为主;Gas细胞大多分布于上皮细胞之间、腺泡上皮细胞之间及固有膜内,上述Gas细胞的形态特点与内分泌、外分泌功能有关,分布型与消化道各部位功能有关。     

牛磺酸对青春期小鼠乳腺发育的影响

在体外使用不同浓度的牛磺酸刺激小鼠乳腺上皮细胞(mMECs)24 h,通过Western blot、CCK-8和EDU等方法检测牛磺酸对mMECs增殖的影响,在体内对4周龄小鼠饮用含0.025%、0.005%、0.100%牛磺酸饮用水4周,分别检测乳腺中乳导管及终末端数量,并检测乳腺中增殖相关蛋白的表达情况。结果显示,0.2、0.4 mmol/L牛磺酸能显著促进mMECs的增殖,可显著增加mMECs中Cyclin D1、Cyclin D3和PCNA的表达量,而mTOR抑制剂雷帕霉素(Rapa)可消除牛磺酸对mMECs增殖的促进作用;摄入水中含有0.025%、0.050%、0.100%牛磺酸能显著提升乳腺内乳导管和终末端的数量,显著促进青春期乳腺中Cyclin D1、Cyclin D3和PCNA的表达。结果表明,牛磺酸能显著促进mMECs增殖和青春期小鼠乳腺发育。     

不同给食方式对昆明小鼠繁殖性能的影响

在昆明小鼠繁殖群中,随机抽取180只21日龄小鼠,雌雄各半。根据采食量把繁殖、非繁殖分成6个组,测其增重、胎间隔、总胎次数、平均产仔数、分仔成活率、初生重、21日龄分仔重等生物学特性。结果显示:90只(雌雄各半)不繁殖小鼠从21日龄至死亡的体重,雌雄间差异显著(<0.05);繁殖组中限食与正常喂食间上述生物学指标差异显著(<0.05)。同时,限食与自由采食间的上述指标差异极显著(<0.001),而正常喂食与自由采食间各项指标差异不显著(>0.05)。结果表明:在生产繁殖中应采取只喂颗粒料的自由采食方式,既能满足营养需要、降低成本,又符合昆明小鼠标准化和上等级的要求。     

地锦草水煎液对昆明小鼠非特异性免疫功能的影响

地锦草为常用中药材,我国各地均有分布,资源十分丰富,也称地锦、血见愁、红茎草、铺地锦、奶汁草、斑鸠窝、地瓣草、血筋草.地锦草系大戟科植物,一年生匍匐小草本,有白色乳汁,生于田野、路旁.地锦草在医学临床上主要用于治疗菌痢腹泻,其针剂则用于治疗急性支气管炎和慢性支气管炎,其单方用于治疗急慢性肝炎效果显著.     

预消化蛋白对小鼠免疫性能的影响

试验研究预消化蛋白对小鼠免疫性能的影响,将240只小鼠随机分成3组,分别饲喂基础日粮及添加2.5%预消化蛋白和5%预消化蛋白的日粮,试验进行6周后,采用酶联免疫法检测小鼠肠黏膜中SIg A的表达水平;通过小鼠腹腔吞噬试验测定吞噬率和吞噬指数;用石蜡切片技术观察肠道形态学变化。试验结果表明:预消化蛋白可以提高小鼠肠绒毛长度和绒毛长度/隐窝深度(V/C),有降低隐窝深度的趋势;显著提高小鼠对鸡红细胞的吞噬能力;饲喂6周后,2.5%预消化蛋白组显著提高小鼠脾脏指数、胸腺指数;预消化蛋白提高十二指肠、空肠、回肠黏膜SIg A的表达水平。     

人c-myc乳腺定位表达转基因小鼠的建立

以含有 1.6 kb的小鼠乳清酸蛋白 (WAP)上游调序列的 p CAT- WAP和含有人 c- myc c DNA的 p WM为原始质粒 ,构建了 WAP启动子调控下的 c- myc乳腺定位表达载体 p WCS。载体用 Bgl Bam H 酶切 ,回收 3.5 kb的基因片段 WAP- c- myc- SV40 Poly A,通过显微注射方法导入 C5 7BL/ 6 J× DBA/ 2 JF1 代小鼠受精卵的雄原核内。共注射10 0 0枚卵 ,将存活的约 6 0 0枚卵分别移植至 2 9只假孕母鼠输卵管内 ,获得仔鼠 45只。PCR检测 ,阳性鼠 9只 ,South-ern blot检测 ,阳性鼠 3只 ,其中 1只母鼠 ,2只公鼠 ,在饲养过程中 ,1只母鼠意外死亡。对 2只转基因公鼠的 F1代PCR检测表明 ,仅 1只公鼠具有遗传性 ,在所生的 2 7只 F1代小鼠中有 13只为 PCR阳性。     

葛根素对去卵巢小鼠乳腺及子宫发育的影响

目的：观察葛根素对去卵巢小鼠乳腺及子宫的影响,研究其雌激素样作用。方法：将21日龄昆明系雌性小白鼠50只随机分成5组,每组10只。①正常对照组,正常＋蒸馏水;②阴性对照组,去势＋蒸馏水;③阳性对照组Ⅰ,去势＋己烯雌酚;④阳性对照组Ⅱ,去势＋己烯雌酚＋黄体酮;⑤试验组,去势＋葛根素。做乳腺标本和乳腺及子宫的常规切片,光镜观察。结果：摘除卵巢后的小鼠乳腺及子宫发育停止,乳腺导管和腺泡数（P〈0.01）、子宫系数（P〈0.01）、子宫壁腺体数（P〈0.05）与正常对照组比较差异显著或极显著。试验组的各项指标与阴性对照组比较差异不显著（P〉0.05）,但高于阴性对照组。结论：葛根素有微弱的雌激素样作用,对去卵巢小鼠乳腺和子宫发育有显著的影响。     

猪附红细胞体eno基因重组蛋白的制备及免疫效果研究

为了研究猪附红细胞体eno基因重组蛋白的免疫效果,本试验将猪附红细胞体eno基因与pET-15b载体进行连接,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。对表达菌株进行诱导表达、纯化,利用纯化后的猪附红细胞体eno重组蛋白（命名为rMseno）对小鼠进行免疫,从而评价该重组蛋白在小鼠体内产生的免疫应答水平。试验将20只4周龄的雄性昆明小鼠随机分为A、B、C、D 4个组。免疫A组接种纯化后的重组蛋白rMseno;免疫B组接种经IPTG诱导表达后的重组菌E.coli-Mseno;对照C组接种等量PBS;对照D组接种未经过诱导表达的重组菌E.coli-Mseno。通过ELISA检测方法分别测定血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平及γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素4（IL-4）细胞因子水平,最后通过脾脏淋巴细胞增殖试验来反映小鼠体内T淋巴细胞的增殖情况。结果显示,构建的重组pET-15b-eno质粒目的基因片段大小为1 632 bp,与预期大小相同;纯化的重组蛋白rMseno大小为61 ku,并能够被鼠抗猪附红细胞体血清所识别;免疫A组和免疫B组小鼠血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平,IFN-γ、IL-4细胞因子水平以及T淋巴细胞增殖指数均显著或极显著高于对照组（P<0.05;P<0.01）。结果表明,猪附红细胞体eno基因重组蛋白能够诱导小鼠产生较高的体液免疫水平以及细胞免疫应答水平。     

猪丹毒丝菌CbpB蛋白对小鼠的免疫效果分析

探究猪丹毒丝菌(ER)CbpB蛋白的免疫原性和保护作用,为深入研制ER基因工程亚单位疫苗提供新的思路和技术储备.以表达的ER重组蛋白CbpB、SpaA、CbpB+SpaA以及ER灭活全菌体(V-AEr21)、商品化弱毒疫苗、商品化灭活疫苗分别免疫小鼠.利用间接ELISA检测小鼠血清中IgG抗体,血清杀菌试验测定功能性抗...     

猪链球菌2型感染昆明小鼠模型的建立及评价

为建立稳定的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)人工发病模型,本试验以天津某发病猪场分离的SS2 Y15293株为研究对象,经腹腔注射感染昆明小鼠,测定其LD₅₀,确定造模感染剂量,通过观察感染后小鼠的临床症状和病理变化,测定试验期间各组小鼠体重和采食量的变化及细菌回归等试验对模型进行评估。结果显示,SS2 Y15293株致昆明小鼠的LD₅₀为6.7×10~7 CFU/mL。以1个LD₅₀的剂量攻毒,与对照组相比,试验小鼠主要发病表现为攻菌后24 h出现精神沉郁、被毛逆立、眼睛有分泌物,72～96 h出现头颈歪斜、翻滚、震颤等神经症状,死亡高峰在48～72 h。3次重复试验中,试验组小鼠的发病率均为100%,死亡率为50%～70%,神经症状小鼠出现比率20%～30%。与对照组相比,试验组小鼠采食量和体重显著下降(P<0.05),临床症状分值显著升高(P<0.05)。组织病理检查发现,试验组小鼠心脏、肺脏组织均有不同程度出血、炎性细胞浸润;脑膜炎,脑室出血,充满炎性细胞。细菌回归试验结果表明,试验组死亡小鼠脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均有细菌定植,且形态、染色和分子生物学特性与攻毒菌一致。以上结果证实,SS2 Y15293株能感染昆明小鼠并致其发病,感染动物发病规律性强,重复性好,临床症状典型,说明SS2 Y15293株感染昆明小鼠可作为SS2的候选人工感染模型。     

排卵不同阶段氯胺酮麻醉对昆明小鼠卵母细胞和早期胚胎的影响

主要研究排卵不同阶段氯胺酮III期麻醉深度对昆明小鼠卵母细胞和早期胚胎的影响。结果表明:排卵前麻醉(150mg/kg体重)造成卵母细胞和早期胚胎数量的极显著下降(P<0.01),而排卵期间麻醉及排卵后麻醉对排卵及早期胚胎数量影响不显著(P>0.05),排卵不同阶段麻醉均造成一定数量异常卵母细胞和非正常胚胎出现。因此,排卵期间麻醉小鼠相比排卵前及排卵后麻醉小鼠对卵母细胞和早期胚胎的影响最小,但仍有可能造成卵母细胞异常、胚胎畸形的发生。     

表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的重组乳酸菌口服免疫小鼠特异性免疫应答分析

将表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的重组乳酸乳球菌pNZ8112-Sa/NZ9000经口服免疫BALB/c小鼠,在免疫后的不同时间收集免疫鼠粪便样品,断尾采血收集血液样品并分离血清,用间接ELISA技术检测血清中的IgG抗体及血清和粪便中的IgA抗体的动态产生规律;在加强免疫后流式细胞仪检测分析外周血T细胞的变化情况及无菌收集免疫鼠的肠黏液,经中和试验检测其抗体的中和能力。结果表明重组菌株口服免疫小鼠后血清中的IgG和IgA抗体产生能力由于非特异性干扰不能确定,外周血中T细胞百分数在实验组和对照组间变化不显著;粪便中的IgA抗体水平产生效果明显;黏液的抗体具有一定的中和能力,其效价检测结果为1:36。     

平衡蛋白对小鼠免疫活性模型的建立

平衡蛋白是根据猪的生理习性研制出的添加剂饲料，内含有猪最喜欢吃的食物和十几种保健物质（菌体蛋白、益生素、谷氨酰胺、亚油酸、生物蛋白、动物蛋白、植物蛋白、小肽、各种必需氨基酸、中草药、抗病因子等），能提高猪的非特异性免疫力，增强抗病力，使用后能防病治病，对目前流行的猪病毒病（圆环病毒、猪流感、伪狂犬及腹泻疾病）具有良好的效果。本试验基于平衡蛋白的免疫效果，对小白鼠免疫活性模型进行建立，以期在理论上进行证明。     

蛋氨酸对青春期小鼠乳腺发育的影响及机制

为了探索蛋氨酸对青春期小鼠乳腺发育的影响,将出生4周的雌鼠分为对照组和蛋氨酸试验组(饮用水中分别含有0.025%,0.05%,0.1%蛋氨酸),使用全组织染色方法观察蛋氨酸对乳腺导管分支的影响,通过Western blot检测乳腺组织中增殖标志蛋白水平的变化。使用不同浓度的蛋氨酸(0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mmol/L)处理小鼠乳腺上皮细胞(mouse mammary epithelial cells, mMECs),分别使用CCK-8法和Western blot检测蛋氨酸对mMECs增殖活性及增殖标志蛋白水平的影响。结果显示,蛋氨酸显著促进小鼠乳腺导管分支,并显著提高乳腺组织中Cyclin D1和PCNA的蛋白水平。蛋氨酸呈浓度依赖方式促进mMECs的增殖活性,显著增强mTOR-4EBP1信号轴的活性,提高Cyclin D1和PCNA的蛋白水平及Rb的磷酸化水平。结果表明蛋氨酸可以通过激活mTOR-4EBP1信号轴上调Cyclin D1和PCNA的蛋白水平,促进Rb磷酸化,继而增强mMECs增殖活性,最终促进青春期小鼠乳腺发育。     

小鼠乳清酸蛋白上游调控序列的克隆及其指导下CAT基因在家兔乳腺中的表达

应用PCR技术，从小鼠基因组中克隆了1．6kb乳清酸蛋白(WAP)基因5’上游调控序列，经酶切和测序证实与已知序列基本一致。为了证实此调控序列能否指导外源基因在乳腺中的表达，将此序列与报告基因CAT融合，构建了pWAP—CAT—polyA乳腺定位表达载体，脂质体包裹后，经乳导管将其注入到妊娠中后期家兔乳腺中进行暂时表达。分别于家兔分娩后1—10d采奶，用ELISA检测乳汁中CAT含量。结果表明，所构建的载体在家兔乳腺中能够表达，表达水平在家兔分娩后1—5d较高。     

卡拉库尔羊卵巢中促性腺激素受体蛋白的分布

在自然发情情况下,取10只卡拉库尔羊卵巢,采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP)方法观察卡拉库尔羊卵巢中促卵泡素受体(FSHR)、促黄体素受体(LHR)分布情况。分别选取连续的5张阳性切片,图像分析。结果显示:FSHR、LHR阳性细胞主要分布于卵泡颗粒细胞、膜细胞和卵母细胞。卡拉库尔羊原始卵泡卵母细胞中便有2种受体阳性细胞分布,在各级卵泡中2种受体阳性细胞数量随卵泡发育水平呈正向增加趋势。