犬附红细胞体病PCR检测方法的建立及与应用

根据Genbank中已经发表的犬附红细胞体16sRNA基因序列设计合成一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出一条与目的片段大小一致,约630 bp的基因片段,建立了PCR快速检测方法。以PCR检测方法及瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法为基础对20例犬附红细胞体病例进行检测,比较四种方法的检出率。结果表明,建立的PCR检测方法的检出率略高于吖啶橙染色,明显高于瑞氏、姬姆萨染色,可用于犬附红细胞体的快速诊断和流行病学调查。     

猪附红细胞体三种染色方法的比较

分别利用姬姆萨氏、瑞氏、吖啶橙3种方法对猪附红细胞体进行染色,结果表明:3种染色法大多数可见星红细胞体,吖淀橙染色可在90%以上出现星红细胞的样本中检出附红细胞体。     

猪附红细胞体染色方法的研究

应用姬姆萨氏、瑞氏以及吖啶橙染色液对13例疑似附红细胞体病猪的血涂片进行染色检测,比较其优缺点。结果表明,3种方法均可检测出附红细胞体,但吖啶橙染色法的检出率更高,是一种更有效的染色方法。     

猪附红细胞体PCR与光镜检测方法的比较研究

应用鲜血压片、姬姆萨染色、吖啶橙染色三种光镜检测方法以及PCR法检测猪附红细胞体,对临床20例疑似病例进行检测,比较其检出率,结果表明,鲜血压片、姬姆萨染色、吖啶橙染色以及PCR法临床检测率分别为20%、35%、50%、70%。证实PCR检测方法明显优于其它光镜检测方法。     

猪嗜血支原体病原染色检测法的比较研究

为检测猪嗜血支原体(M.suis)感染,本研究对传统血涂片吖啶橙染色方法进行改良,建立了快速检测M.suis的血液吖啶橙染色方法。结果显示,血液吖啶橙染色法的染色时间比传统血涂片吖啶橙染色法和姬姆萨染色法分别节省约30 min和1 h。利用血液吖啶橙染色法、血涂片吖啶橙染色法、姬姆萨染色法及PCR法对200份临床血液样品进行检测,结果显示,阳性检出率依次为64.5%、59.5%、48%及68.5%。3种染色方法与PCR的符合率分别为87%、77%、59.5%;与PCR结果相比,前两种染色方法差异不显著(p0.05),后者差异极显著(p0.01)。结果表明,血液吖啶橙染色法优于其他两种染色方法,具有操作简单快速、准确度高、检出率高等优点,适用于临床上对M.suis感染快速定性检测和流行病学调查研究。     

猪附红细胞体DnaJ基因PCR诊断方法的建立及应用

为建立一种特异、敏感、准确的猪附红细胞体诊断技术,本试验根据GenBank上发表的猪附红细胞体全基因组(NC-015153.1)中的DnaJ基因序列设计合成了一对特异性引物,建立了猪附红细胞体DnaJ基因PCR诊断方法,进行了特异性和敏感性试验,并与姬姆萨染色镜检方法进行了临床应用比较.结果,猪附红细胞体DnaJ基因PCR诊断方法扩增片段大小为868 bp(GenBank登录号为;JN247670),与GenBank中(NC_015153.1)同源性为99％,该方法扩增不出犬新孢子虫、牛附红细胞体、犬附红细胞体等基因片段,最低检测猪附红细胞体DNA量为124 fg/μL,通过对53份猪血液样本的检测,并与血液涂片姬姆萨染色镜检比较,说明建立的PCR诊断方法具有特异、敏感、准确等优点,完全适用于猪附红细胞体的诊断.     

犬附红细胞体PCR检测方法的建立及应用

通过将GenBank上报道的犬附红细胞体16S rRNA基因序列与其他物种同源序列进行比对,取其种间特异性和种内保守性较高区域设计1对引物,以吉林省延边地区犬附红细胞体基因组DNA为模板进行PCR扩增,并进行特异性、敏感性试验验证,建立犬附红细胞体PCR诊断方法,应用于临床检测。结果表明:该方法可成功扩增出大小为529 bp的犬附红细胞体片段,与GenBank中German no.1(AY150973.1)序列同源性为98.5%。其最低DNA检测量为25 fg/μL,不与犬巴贝斯虫、犬弓形虫及猪附红细胞体等病原体基因组产生交叉反应。同时通过对57份犬血液样本的检测结果说明,该方法检出率明显高于姬姆萨染色镜检法,且避免了假阳性。本试验所建立的PCR检测方法具有特异、敏感、准确等优点,为犬附红细胞体病的诊断提供了一种可靠的方法。     

犬附红细胞体PCR检测方法的建立与应用

根据Genbank中已经发表的犬附红细胞体基因序列设计合成一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出一条与目的片段大小一致,约630bp的基因片段,建立了犬附红细胞体PCR快速检测方法。研究结果表明该方法只能从犬附红细胞体中扩增出约630bp的基因片段。敏感性试验表明该方法最低可检测到10pg的DNA。利用该方法对临床上12例疑似犬附红细胞体血样进行检测,检出率75%,而直接镜检的阳性检出率仅为66.7%。     

猪附红细胞体生物学特性的实验室研究

文为进一步研究附红细胞体的形态结构、生殖方式与致病机理提供理论依据,有利于深入理解附红细胞体病的发病机制,也有利于附红细胞体病的治疗,特做此研究。1材料血液采自猪场附红细胞体病临床症状明显的患猪,从血液中提取猪附红细胞体。主要试剂有胰酶、链霉素、青霉素均为当地兽医站提供;瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色液均为畜牧局     

单克隆抗体间接免疫荧光(IFA)检测猪附红细胞体

为建立利用单克隆抗体检测猪附红细胞体病的间接免疫荧光(IFA)方法,用抗猪附红细胞体的单克隆抗体,对48份疑似猪附红细胞体感染的病猪猪血进行免疫荧光检测,并与血涂片镜检及PCR检测方法进行比较,结果显示IFA检测的阳性率为68.75%,与PCR检测阳性率为77.08%符合率较高,比血涂片的瑞氏和姬姆萨染色镜检阳性率高出近30个百分点;而用猪肺炎支原体、猪链球菌和猪巴氏杆菌作对照,结果均呈阴性。建立的用抗猪附红细胞体的单克隆抗体检测猪附红细胞体病的IFA特异性强,敏感性高;检测临床样品的结果准确可靠。