应用电镜与PCR技术检测王官溪蜜柚黄龙病病原

 福建省产区发生王官溪蜜柚叶片斑驳、果实变小及全株矮化的病树是柑桔黄龙病引起的。采用电镜技术与PCR技术研究,证明其病原BLO在形态、大小与构造上和柑桔黄龙病病原(BLO)相同,其病原DNA、PCR扩增及Southern Blot分子杂交的结果,证明它与柑桔黄龙病病原PCR的产物具有很高的同源性。本病具有传染性,能通过病梢嫁接传染给王官溪蜜柚的健苗。     

应用多聚酶链式反应(PCR)技术检测和定量分析柑桔黄龙病病原

 应用多聚酶链式反应(PCR)技术对柑桔黄龙病病原进行检测和定量分析。研究结果表明:PCR技术能准确、快速地检测出田间和温室内罹病的柑桔、长春花以及带菌柑桔木虱样本中的柑桔黄龙病病原(BLO),而健康植株和柑桔木虱样本则呈阴性反应。采用的PCR引物(Primers)是根据柑桔黄龙病病原亚洲株系的DNA序列(In-2.6,基因库号码:M9491)设计的。应用竞争性定量多聚酶链式反应(Q-PCR)方法能测定病原在不同样品中的含量。该技术关键在于:病原DNA和浓度系列稀释后的竞争物DNA,在同一试管中进行DNA扩增反应时,共用相同的引物。由于彼此互相竞争反应引物的结果,病原的PCR产物和竞争物的PCR产物在数量上呈反向线性相关。因竞争物的浓度为已知,便可从线性关系中推算出病原的含量。     

琯溪蜜柚病虫害绿色防控技术应用的成效与经验总结

琯溪蜜柚是平和县重要的农业支柱产业,传统的病虫害防治主要依赖化学防治,使得农药使用量偏大,影响了琯溪蜜柚品质及当地的环境生态安全。为了降低蜜柚果实农药残留量、提升琯溪蜜柚品质品牌和减少农药污染对环境造成的影响,近几年平和县在琯溪蜜柚病虫害防治上大力推广应用绿色防控技术,采取农业防治、物理防治与生物防治措施,结合科学合理的化学用药,实现了琯溪蜜柚产业高质量、可持续发展。     

平和琯溪蜜柚锈壁虱发生特点与防控对策

[目的]为掌握平和琯溪蜜柚锈壁虱发生规律,了解其消长因素,总结研究防控对策,以科学指导综合防治工作.[方法]采取定点观察法、巡回踏查法、抽样法对琯溪蜜柚锈壁虱发生世代、发生盛期、生活习性等进行调查、观察.[结果]锈壁虱在平和县一年发生20～24代,世代重叠,繁殖力特别强.生活周期短,平均一代历期10～19 d.成螨、若...     

柑橘黄龙病PCR检测技术研究

以柑橘黄龙病病原亚洲菌系β-操纵子的特异引物fA2/rJ5进行PCR扩增,依据是否有目标DNA片段的产生来检测柑橘黄龙病菌的存在与否。该检测技术,具有快速、简便、灵敏等特点,可用于柑橘黄龙病的早期诊断,对控制该病害的传播具有重要意义。     

柑橘黄龙病常规PCR检测技术研究与初步应用

柑橘黄龙病是世界范围具有毁灭性危害的柑橘细菌性病害,在我国大部分柑橘产区发生,严重制约了我国柑橘产业的发展。本文根据黄龙病病原物亚洲韧皮杆菌核糖体16SrRNA基因设计了1对PCR引物HLBF468/HLBR877,并以此为基础建立了常规PCR反应体系,确定了检测体系的特异性和灵敏度。结果表明该体系的检测灵敏度比先前报道的常规PCR方法有了明显提高。利用建立的PCR体系完成了对广东和广西两省区果园柑橘黄龙病的抽样检测。本研究建立的常规PCR方法可以作为一种简便、准确、灵敏的检测技术应用于柑橘黄龙病的早期诊断。     

江西省大余县柑橘黄龙病菌PCR检测

采用PCR扩增和核苷酸序列测定技术,对分别采自江西省大余县青龙镇郭屋坝果园和丰顺果园的各5份疑似柑橘黄龙病样品进行病原检测。结果表明:2个青龙郭屋坝果园样品中检测到柑橘黄龙病菌,分别命名为DY-LAS01和DY-LAS02,其他8份样品中则未检测到该病菌。此结果表明大余县已有柑橘黄龙病发生,希望引起当地有关部门的高度重视。     

浙江柑橘黄龙病病原β-操纵子核糖体蛋白基因的PCR检测及其序列比对

长期的观察发现,不同柑橘品种感染黄龙病后出现的病症也不尽相同,针对这种现象本文检测了浙江柑橘黄龙病病原β-操纵子核糖体蛋白基因并进行了序列比对,BLAST比对结果说明所扩增的基因序列之间差异性为0,与基因库(NCBI)中黄龙病亚洲韧皮杆菌DNA序列相似性为100％,由此说明浙江柑橘黄龙病病原β-操纵子核糖体蛋白基因并未发生变异,出现上述现象可能是其他基因发生变异或者与品种的抗病性有关。     

柑橘黄龙病nested-PCR检测技术在柑橘苗木生产中的应用

柑橘黄龙病(huanglongbing, HLB)是柑橘生产上的一种毁灭性病害。本研究以柑橘叶脉为材料,采用nested-PCR技术对广西部分柑橘苗圃苗木进行了黄龙病检测。结果表明,nested-PCR技术不仅可以检测已经表现症状的苗木样品,还可以检测出带病但不显症的苗木样品。2007年共检测柑橘苗木样品1 950个,2008年共检测样品1 480个,黄龙病苗木检出率分别为10.31％和6.22％。本研究对及早控制带病苗木的传播,繁育柑橘无病毒苗木具有重要的意义。     

柑桔黄龙病病原DNA片段的克隆及序列分析

 本研究利用聚合酶链式反应技术(PCR),合成了中国柑桔黄龙病病原的一段DNA片段。将此片段插入到pUC18的EcoRI位点,并转化进大肠杆菌(Escherichia coli)的DH5α菌株中。通过PCR鉴定,限制性内切酶(EcoRI)酶切分析及核苷酸序列分析,均表明克隆成功。序列分析结果显示,克隆片段与已知相应序列间同源性达98.6%。该研究为制备柑桔黄龙病病原DNA分子探针奠定了基础。     

胶体金免疫电镜技术检测和鉴定病汁液中不同形态的植物病毒

 本文报道胶体金免疫电镜技术的建立:铜网捕获病毒后,用其稀释约200倍的同源抗血清修饰处理3~5分钟,羊抗兔IgG-金复合物标记3~5分钟,经磷钨酸负染,电镜下可见病毒粒子周围金颗粒特异性吸附,而背景上非特异性吸附很少。用此技术成功地快速检测和鉴定了病汁液中线状病毒(大麦黄花叶病毒,大麦温和花叶病毒,小麦梭条斑花叶病毒,芜菁花叶病连和马铃薯Y病毒)、棒状病毒(烟草花叶病毒、长叶车前草花叶病毒和土传小麦花叶病毒)以及球状病毒(水稻矮缩病毒、黄瓜花叶病毒和大麦黄矮病毒)。用0.5M PBSpH7.0制备病汁液,可大幅度提高同源抗血清对黄瓜花叶病毒的捕获能力。     

粉虱传双生病毒的TAS-ELISA及PCR快速检测

 利用粉虱传双生病毒(WTGs)多克隆抗体及单克隆抗体,建立了三抗体夹心ELISA (TAS-ELISA)检测WTGs的方法,并发现了单克隆抗体SCR18可广泛用于我国WTGs的检测。利用根据WTGs基因组上基因间隔区及外壳蛋白基因保守序列设计的引物,建立了PCR特异检测WTGs的方法。对田间病样的TAS-ELISA和PCR检测表明,粉虱传双生病毒在云南省烟草、番茄和南瓜上均存在,2种方法的测定结果是一致的。     

侧沟茧蜂触角感觉器的扫描电镜观察

扫描电镜观察表明：侧沟茧蜂Microplitis sp．的触角上存在5种感觉器，分别为毛状感觉器A型、B型、C型，槽状感觉器，锥形乳头状感觉器，刺形感觉器和钟形感觉器。对触角感觉器的形态和分布进行了描述，并对两性间的差别进行了讨论，为研究该蜂寻找生境和寄生行为提供依据。     

仙人掌丛枝病植原体检测和16S rDNA片段序列分析

 对仙人掌丛生幼嫩组织进行超薄切片电镜观察,在韧皮部筛管中存在大量植原体;根据植原体16S rRNA基因保守序列设计的通用引物对R16 F₂/R₂,应用PCR技术对仙人掌丛枝病进行分子检测,结果扩增到约1.2 kb的特异性片段,而在健康组织中却没有此特异片段;通过16S rDNA片段核酸序列同源性比较,结果表明仙人掌丛枝病植原体与花生丛枝病植原体亲缘关系最近,据此可初步判断仙人掌丛枝病植原体是一种属于16Sr Ⅱ组的植原体,基本确定了其分类地位。     

应用dot-ELISA和RT-PCR法检测玉米花粉中玉米矮花叶病毒的研究

 首次采用dot-ELISA和RT-PCR 2种方法对受玉米矮花叶病毒(MDMV)侵染的玉米品种330、478、黄早四、获白及M o17病株上采得的花粉进行了检测,结果表明2种方法在供试玉米病株花粉中均检测不到MDMV,证明玉米花粉中带或存在玉米矮花叶病毒的可能性很小     

六斑月瓢虫模板DNA的制备及16SrDNA序列扩增

本文对酒精浸泡的六斑月瓢虫Menochilus sexmaculata(Fabricius）标本进行基因组DNA的提取，用线粒体16SrDNA引物扩增出长度约为500bp的PCR产物，为进一步开展瓢虫的分子系统学研究打下基础。     

昆虫病原线虫和共生细菌培养系统中噬菌体的检测

本文利用紫外照射、温度、pH、盐度诱导五株溶源性共生菌株Xenorhabdus和Photorhabdus同时测定斯氏和异小杆属线虫Steinernema carpocapsae A24,S.carpacapsae ALL,S.feltiae English,S.feltiae SN,Heterorhabditis bacterophora H06在体外培养过程中是否存在感染共生细菌的噬菌体。结果未发现噬菌斑，说明实验菌株在实验诱导条件下以及昆虫病原线虫固体培养系统中不可能诱发噬菌体的危害。