犬瘟热病毒分离技术研究进展

由犬瘟热病毒感染引发的犬瘟热是多种动物共患的重要传染疾病。病毒分离技术是对该疾病诊断和病原研究方面的必要手段和基础。目前,多种不同动物来源的原代细胞、传代细胞及稳定表达犬瘟热病毒受体——信号淋巴细胞激活因子的细胞系在犬瘟热病毒分离研究中均得到广泛应用。综述当前犬瘟热病毒分离技术的研究进展,并对不同分离方法优缺点进行比较分析。     

犬瘟热病毒株的分离鉴定及遗传变异分析

[目的]分离鉴定吉林地区一株犬瘟热病毒,为犬瘟热的防治提供依据。[方法]应用Vero细胞从疑是患犬瘟热藏獒脏器组织中分离病毒,并进行分子病毒学鉴定,进一步对该犬瘟热病毒株的血凝素蛋白（H）基因序列进行分析。[结果]确定该犬瘟热分离株为A-sia-Ⅰ型犬瘟热,命名为ZA10-JL。[结论]对进一步研究犬瘟热,预防以及流行病学调查都有重要的参考作用。     

犬瘟热病毒贵州株CDV-GZ1的分离与鉴定

为丰富我国犬瘟热病(CD)的流行病学资料,同时为CDV贵州分离株主要抗原基因及结构研究奠定基础,对贵阳市某宠物医院犬瘟热病毒金标卡检测呈阳性病死犬的肝脏、肺脏、淋巴结等组织,取适量经混合研磨过滤后,同步接种于Vero传代细胞上进行病毒分离培养,并对该分离毒株进行理化特性、电镜形态、血清学和核酸检测等系列鉴定。结果表明:在Vero细胞上盲传至第6代时稳定出现特征性的CPE,该毒株为RNA囊膜病毒,电镜下可见胞浆包涵体、病毒粒子呈晶格状排列,病毒可被犬瘟热阳性血清中和,分离病毒为犬瘟热病毒并被命名为CDV-GZ1株。     

狐源犬瘟热病毒泰安株(CDV-FOX-TA)的分离与鉴定

从具有疑似犬瘟热症状的病狐血液中分离到1株病毒,该病毒在MDCK细胞上生长良好,并能形成稳定的CPE。经电镜观察、理化特性、滴度测定、动物回归试验、RT-PCR和荧光定量RT-PCR鉴定,证实分离到的病毒为1株犬瘟热病毒强毒株,命名为CDV-FOX-TA。     

犬瘟热诊断方法研究进展

概述了犬瘟热的细胞生物学与分子生物学诊断方法。在细胞生物学方面，对犬瘟热的诊断主要依靠病毒分离培养、动物回归实验、病毒电镜形态检查、病毒特异性抗原及其抗体的检查、包涵体检查等。随着分子生物学的发展，对犬瘟热的诊断从细胞水平发展到分子水平，国内外相继建立起CDV核酸杂交和RT-PCR诊断法，这些方法比传统诊断法具有更高的敏感性和特异性，尤其在犬瘟热的发病早期，机体尚未产生免疫应答时RT—PCR诊断法便能够作出早期诊断。     

世界范围的犬瘟热流行概述

犬瘟热病毒引起多种动物的烈性瘟热病,遍及全世界,从最初的瘟热病毒的分离,到现在犬瘟热经历了近4个世纪的传播衍化过程。了解该病的流行趋势和特点,有利于建立健全的预防免疫体系和方法,防止该病的大型流行暴发。     

浅谈犬瘟热的诊断与治疗

犬瘟热具有较高的传染率和死亡率,对宠物养殖业和宠物饲养者有巨大威胁。本文首先介绍了犬瘟热的症状,包涵体检查、病毒分离、试纸诊断3种诊断方法,然后提出相应的治疗方法和预防措施。对于加深对犬瘟热的了解,及时采取诊断和治疗措施有重要的意义。     

我国犬瘟热病毒强毒株培育取得新突破

犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的，包括犬科、鼬科、猫科、熊科等十几个科属、70多种动物共患的烈性传染病。在犬瘟热病毒的研究中，由于缺乏毒力稳定的犬瘟热病毒强毒株，使国内犬瘟热研究一直无法深入。     

嵌合犬瘟热病毒rHBF-vacH株的构建及鉴定

为了明确我国犬瘟热病毒流行毒株的关键毒力基因及其致病机制,本研究构建了一株表达疫苗毒株H基因的嵌合犬瘟热病毒rHBF-vacH.犬瘟热病毒的囊膜蛋白H和F,决定着犬瘟热病毒宿主嗜性和致病性,也是产生免疫保护的关键抗原.因此,本研究以GenBank中公布的犬瘟热病毒疫苗毒株Onderstepoort序列(AF378705...     

狐犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑炎免疫研究进展

综述了狐犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑炎病毒的分离鉴定及生物学特性，以及建立的免疫抗体检测方法，疫苗研制及免疫研究进展。     

抗犬瘟热病毒荧光标记单抗的制备和初步鉴定

1材料与方法 1．1材料 1．1．1病毒与细胞。犬瘟热病毒（CDV）、狂犬病毒（RV）、犬细小病毒（CPV）、犬副流感病毒（CPIV）、犬腺病毒（CAV）,非洲绿猴肾细胞（Vero）、犬肾细胞（MDCK）、猫肾细胞（F81）,犬瘟热病毒单克隆抗体CE3由军事医学科学院军事兽医研究所犬病研究中心提供。     

犬瘟热病毒感染的诊断方法比较

采用犬瘟热病毒抗原快速检测试纸和RT-PCR方法,对2008～2009年在兰州市和乌鲁木齐市的50份疑似犬瘟热患病犬样品进行检测对比,结果发现这2种方法的符合率达96%。犬瘟热病毒抗原快速检测试纸是一种比较可靠的临床检测犬瘟热病毒感染的方法,而敏感性和特异性很高的RT-PCR方法更适合研究领域。     

表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究

[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得On-derstepoort株H基因,插入pcDNA3.1（＋）建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Western blot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下了基础。     

表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究

[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得Onderstepoort株H基因,插入pcDNA3.1（＋）建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Westernblot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下基础。     

犬瘟热临床表现类型调查及其治疗方法

采取流行病学调查、临床检查、犬瘟热病毒抗原检测试纸方法,对528例确诊为犬瘟热的犬病进行统计分析。结果:肺炎型犬瘟热占59.1%(312/528),肠炎型犬瘟热占37.5%(198/528),脓疱型犬瘟热占1.9%(10/528),神经型犬瘟热占1.5%(8/528)。针对不同临床表现类型,采取犬瘟热单克隆抗体,中西结合疗法、支持疗法和对症治疗,治愈率达96.5%以上。     

犬瘟热病毒水貂株的分离与鉴定

从疑似犬瘟热病死水貂的肝脏中分离出1株病毒,并进行了系统的鉴定。结果表明:该毒株接种于Vero传代细胞后,出现了典型而有规律的病变;其病毒理化特性与犬瘟热病毒相同;致细胞病变作用可被兔抗CDV阳性血清阻断;间接免疫荧光试验表明接种病毒的BHK-21细胞出现特异性的亮绿色荧光,而正常细胞则未见绿色荧光;对提取接种病料后的Vero细胞培养物中的总RNA进行RT-PCR扩增,得到了324bp和1053bp的目的片段,证明该毒株为CDV。     

RT-PCR检测CPIV方法的建立与应用

【目的】建立CPIV的RT-PCR检测方法。【方法】从临床上疑似犬副流感(CPI)的犬鼻腔分泌物中提取CPIV总RNA。根据Genebank中收录的CPIV(序列号AY581307)中NP基因保守序列,设计一对特异性引物,扩增出667 bp片段,以此建立CPIV的RT-PCR检测方法。【结果】特异性试验表明该引物不能扩增犬其它常见的传染病病毒基因。敏感性试验表明该引物能检测到10~(-6)的CPIV总RNA量。重复性试验表明该引物具有良好的稳定性和重复性。对临床采集的32份样品进行RT-PCR检测时,阳性率为53.12%。【结论】实验建立了CPI的RT-PCR检测方法,可适合于临床CPIV的早期快速诊断和小规模的分子流行病学调查。