牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞EP_2受体mRNA表达的影响

为探讨TCDCA对佐剂性关节炎(AA)模型大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)EP2受体mRNA表达的影响,采用Elisa法测定AA模型大鼠FLS内cAMP的含量,以确定TCDCA作用于FLS的最佳药物浓度;采用RT-PCR法测定最佳TCDCA药物浓度对FLS中EP2受体mRNA的表达量。结果表明,PGE2刺激FLS后,FLS内cAMP的浓度和EP2受体mRNA的表达量均显著升高(P0.05),而TCDCA(10-4~10-7 mol/L)能够显著降低PGE2(10-6mol/L)刺激的FLS内cAMP浓度(P0.05),且存在剂量依赖性;TCDCA(10-5~10-7 mol/L)还能够显著降低EP2受体mRNA的表达量(P0.05)。这表明TCDCA对PGE2-EP受体-cAMP信号通路产生影响,是其发挥抗关节炎作用的重要分子机制之一。     

牛磺鹅去氧胆酸对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞脂皮素-1基因表达的影响

观察牛磺鹅去氧胆酸 (taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)模型成纤维样滑膜(fibroblast-like synoviocytes,FLS)细胞脂皮素-1(lipocortin 1,LC-1)基因表达的影响,并探讨TCDCA对AA大鼠FLS的作用机制。 制备AA大鼠模型,采用组织块培养法分离培养AA大鼠FLS,应用荧光定量RT-PCR技术检测TCDCA对AA大鼠FLS细胞LC-1 mRNA表达的影响。与模型组相比,TCDCA作用组AA大鼠FLS细胞LC-1 mRNA的表达显著高于模型组(P<0.05)。说明TCDCA能显著促进AA大鼠FLS细胞LC-1 mRNA的表达。     

牛磺鹅去氧胆酸对AA大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴分泌激素的影响

旨在探讨牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid, TCDCA)对佐剂性关节炎(AA)大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)轴的影响。试验采用完全弗氏佐剂(CFA)法制备了AA大鼠,并将其分为5组,即模型组、TCDCA低剂量(0.1 g/kg)预防组和治疗组、TCDCA高剂量(0.2 g/kg)预防组和治疗组,并以正常的Wistar大鼠作为对照组,每组8只。给药方案：预防组于致炎前3 d,按照相应的药物剂量进行灌胃给药,1次/d,连续31 d。治疗组于致炎后第14天,按照相应的药物剂量进行灌胃给药,1次/d,连续14 d。通过外观观察对AA大鼠模型进行评价,并采用ELISA法检测大鼠血清中促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(CORT)的含量。结果显示：与正常组大鼠相比较,造模后14 d左右,模型组大鼠对侧足跖肿胀,造模后18～21 d,模型组大鼠尾部出现明显结节,提示AA大鼠模型制备成功。与正常对照组相比,模型组大鼠血清中ACTH、CORT含量显著升高(P<0.05),TCDCA低剂量治疗组可显著提高AA大鼠血清中C...     

牛磺鹅去氧胆酸对糖皮质激素受体激活效应

探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对糖皮质激素受体(GR)的激活效应,采用免疫荧光术检测NR8383细胞内GR的表达及不同浓度TCDCA对NR8383细胞核移位的影响,采用实时荧光定量PCR法分析了TCDCA对AA大鼠FLS细胞中由GR产生的VCAM-1和COX-2mRNA表达的影响,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分析了TCDCA对AA大鼠FLS细胞中由GR介导的VCAM-1蛋白表达的影响。结果表明,TCDCA可以极显著性(P<0.01)的激活NR8383细胞内的GR受体,且在加入GR的特异性抑制剂RU486之后,GR受体的荧光值显著下降,表明RU486阻断了TCDCA对GR受体的激活作用。而TCDCA组和DEX组间无显著性差异(P>0.05);TCDCA可以抑制VCAM-1及COX-2的表达量。由此进一步证明TCDCA是通过GR受体发挥抗炎和免疫调节作用。     

牛磺鹅去氧胆酸对大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α和IgG的影响

研究牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对佐剂性关节炎大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α和IgG含量的影响。用弗氏完全佐剂诱导大鼠关节炎模型,采用重量法测定AA大鼠胸腺指数、脾指数;采用ELISA双抗夹心法和免疫比浊法测定AA大鼠外周血中IL-1β、IL-6、TNF-α和IgG的含量。结果显示,与模型组比较,TCDCA可抑制AA大鼠胸腺指数,提高AA大鼠外周血中IL-1β、IL-6、TNF-α含量,降低AA大鼠外周血中IgG含量。     

牛磺鹅去氧胆酸的抗炎作用机理

运用大鼠佐剂性关节炎(AA)模型,牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)按0.2g/kg剂量,经灌胃给药后,测量致炎前和致炎后不同时期大鼠足跖肿胀度,并采用荧光分光光度法和ELISA双抗夹心法分别测定AA大鼠外周血中NO、LTB4含量。结果:TCDCA连续给药21d,可显著抑制AA大鼠不同时期的足跖肿胀,显著降低血清中NO水平;TCDCA连续给药4d,可显著降低AA大鼠外周血中LTB4含量。结论:TCDCA的抗炎作用与其抑制LTB4和NO产生有关。     

TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞中PGE2分泌的影响

[目的]进一步探讨牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)在抗炎免疫方面的潜在调节作用。[方法]以AA大鼠成纤维样滑膜细胞作为研究对象,采用ELISA方法检测TCDCA和IL-1β作用下AA大鼠成纤维样滑膜细胞上清液中PGE_2的含量,分析TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞中PGE_2分泌情况的影响。[结果]TCDCA能够对IL-1β刺激下AA大鼠纤维样滑膜细胞PGE_2的分泌产生下调作用(P0.05)。[结论]TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞中PGE_2的分泌具有抑制作用,为TCDCA在兽医临床应用提供依据。     

牛磺鹅去氧胆酸对FLS细胞中GR介导的HSP 90基因表达的影响

采用实时荧光定量PCR法分析了牛磺鹅去氧胆酸（taurochenodeoxycholic acid，TCDCA）对佐剂性关节炎模型（adjuvant arthritis，AA）大鼠成纤维滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes，FLS）中由糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）介导的热休克蛋白90基因（heat shock protein 90 gene，HSP90）mRNA表达的影响。结果表明，TCDCA可以极显著性（P〈0.01）下调FLS细胞内HSP 90 mRNA的表达，同时加入GR的特异性抑制剂RU486后可抑制TCDCA对HSP 90 mRNA的作用。由此证明了TCDCA是通过GR受体发挥抗炎和免疫调节作用的。     

牛磺鹅去氧胆酸对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞ICAM-1表达的影响

为了研究牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对佐剂性关节炎模型大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)中细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响,采用qPCR与ELISA法检测了FLS中ICAM-1的表达量,结果表明,1×10~(-6)~1×10~(-4) mol/L TCDCA在基因与蛋白水平均能够显著或极显著抑制IL-1β刺激下FLS中ICAM-1的表达(P<0.05或P<0.01),且该抑制作用可被糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)阻断剂米非司酮(RU486)拮抗,提示TCDCA对佐剂性关节炎的治疗作用与抑制GR活性进而抑制ICAM-1表达有关。     

牛磺鹅去氧胆酸对家禽和小鼠抗热应激作用研究

为探讨牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对热应激条件下AA肉鸡、海兰褐仔鸡及昆明种小白鼠的抗热应激作用,试验检测了TCDCA对热应激条件下AA肉鸡死亡率、海兰褐仔鸡体增重及对热应激小鼠采食量、饮水量、增重、血清中皮质醇和甲状腺素(T3)含量、肝脏组织中热休克蛋白70(HSP70) mRNA表达的影响。结果表明,0.1和0.2 g/kg TCDCA可显著降低热应激AA肉鸡死亡率(P<0.05);0.05、0.1和0.2 g/kg TCDCA可极显著增加热应激海兰褐仔鸡的体增重(P<0.01);0.1 g/kg TCDCA能显著提高热应激小鼠的采食量和饮水量(P<0.05),而对其体增重无显著影响(P>0.05);0.05、0.1和0.2 g/kg TCDCA可使热应激小鼠血清T3含量显著降低(P<0.05);0.1和0.2 g/kg TCDCA可使热应激小鼠血清皮质醇含量显著升高(P<0.05);0.05、0.1和0.2 g/kg TCDCA可显著抑制热应激小鼠肝脏中HSP70 mRNA的表达(P<0.05)。综上所述,TCDCA具有抗热应激作用。     

DNMT1对RA模型大鼠FLS凋亡的影响

[目的]研究DNA甲基转移酶1(DNMT1)对类风湿性关节炎(RA)模型大鼠关节滑膜成纤维样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响。[方法]采用Real-time qPCR检测对照大鼠和RA模型大鼠FLS中DNMT1表达,检测DNMT1 siRNA转染对抗凋亡基因Bcl-2表达的影响;采用MTT检测DNMT1 siRNA转染对FLS增殖的影响。[结果]与对照组相比,RA模型大鼠FLS中DNMT1表达显著升高,DNMT1表达抑制后,Bcl-2表达显著降低;MTT检测发现,DNMT1表达抑制后,FLS增殖活力显著减弱。[结论]DNMT1表达抑制可能引发RA模型大鼠FLS凋亡。     

佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞的体外培养与鉴定

探讨佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)的体外培养及鉴定方法,制备AA大鼠模型,采用组织块培养法培养AA大鼠FLS,并通过形态学、透射电镜及RT-PCR方法对FLS进行鉴定.结果表明,培养的滑膜细胞具有成纤维细胞的形态和特征,呈长梭形板向生长,RT-PCR方法检测波形蛋白表达较高.本研究成功地培养出了AA...     

TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞中PGE2分泌的影响

[目的] 进一步探讨牛磺鹅去氧胆酸（taurochenodeoxycholic acid,TCDCA）在抗炎免疫方面的潜在调节作用。[方法] 以AA大鼠成纤维样滑膜细胞作为研究对象,采用ELISA方法检测TCDCA和IL-1β作用下AA大鼠成纤维样滑膜细胞上清液中PGE₂的含量,分析TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞中PGE₂分泌情况的影响。[结果] TCDCA能够对IL-1β刺激下AA大鼠纤维样滑膜细胞PGE₂的分泌产生下调作用（P<0.05）。[结论] TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞中PGE₂的分泌具有抑制作用,为TCDCA在兽医临床应用提供依据。     

TCDCA对大鼠脂肪代谢影响的初步研究

[目的]探讨TCDCA对大鼠脂肪代谢的影响。[方法]将36只雄性大鼠随机分为4组,即阴性对照组、TCDCA低剂量组、中剂量组及高剂量组,各组连续给药21 d后,分别测定每组大鼠的试验末体重、增重、料肉比,血清总胆固醇(TC)、血清总甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C),肝体比、肾体比、脂肪含量、体脂肪率及血常规等指标。[结果]TCDCA中剂量组的大鼠试验末体重及增重均显著低于阴性对照组(P<0.05);TCDCA低、中、高3个剂量组肝体比显著或极显著大于阴性对照组(P<0.05或P<0.01);总体来看,与阴性对照组相比,TCDCA低、中、高3个剂量组的料肉比,TC、TG、HDL-C、LDL-C水平,肾体比、脂肪含量、体脂肪率,以及血常规指标均无显著性差异(P>0.05)。[结论]中剂量TCDCA能够显著降低大鼠体重,显著抑制大鼠的增重;低、中、高剂量的TCDCA对大鼠的料肉比、脂肪代谢相关指标及血常规指标均无显著影响。     

TCDCA对大鼠脂肪代谢及其相关受体FXR表达量的影响

为了探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对大鼠脂肪代谢相关受体FXR表达量的影响,初步分析TCDCA对脂肪代谢的调节作用。将36只雄性Wistar大鼠,随机分成4组:阴性对照组、低剂量组(3mg/kg)、中剂量组(9 mg/kg)及高剂量组(27mg/kg),给药持续21d后,收集肝脏。采用HE染色和免疫组化方法检测FXR是否在大鼠肝脏组织中的表达及其表达位置,以及TCDCA对大鼠肝脏组织结构的影响;采用qPCR和Western blot的方法测定大鼠肝脏FXR mRNA以及相应蛋白的表达量。结果表明,阴性对照组与TCDCA各给药组大鼠肝脏细胞核上的FXR均有表达,但TCDCA处理组的表达量明显高于阴性对照组;TCDCA对大鼠肝脏组织结构物无显著影响;低剂量组大鼠肝脏中FXR mRNA表达量极显著高于阴性对照组(P0.01),低剂量组FXR蛋白表达量显著高于阴性对照组(P0.05)。TCDCA对大鼠脂肪代谢相关受体FXR的表达量呈上调作用。     

鸡胆汁有效成分CDCA和TCDCA的抗炎作用研究

采用比较药理学研究方法对鸡胆汁的有效成分鹅去氧胆酸 (CDCA)和牛磺酸鹅去氧胆酸 (TCDCA)进行了抗炎作用研究。结果显示 ,CDCA和 TCDCA均能极显著地抑制二甲苯所致小鼠耳壳炎症及小鼠皮肤毛细血管通透性增强。对小鼠棉球肉芽肿、大鼠角叉菜胶性足跖肿胀、大鼠甲醛性足跖肿胀以及炎性组织中 PGE2 含量具有明显抑制作用。对大鼠角叉菜胶性足跖肿胀和甲醛性足跖肿胀 ,CDCA和 TCDCA的作用与其剂量呈明显的正相关 ,且 TCDCA的抗肿胀率作用比 CDCA强。因而表明鸡胆汁的有效成分 CDCA和 TCDCA对急慢性炎症均有很强的抑制作用     

牛磺鹅去氧胆酸对小鼠机体cAMP和cGMP含量的影响

为了研究牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠机体环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)含量的影响,试验用环孢菌素A诱导特异性免疫低下模型,按相应组别对应的剂量对小鼠灌胃给药7 d,获取血清;体外培养正常小鼠腹腔巨噬细胞,用MTT方法筛选TCDCA作用于腹腔巨噬细胞的最佳药物浓度;用最佳药物浓度作用于巨噬细胞后超声破碎,获取上清液;ELISA方法测定血清和上清液中cAMP和cGMP的含量。结果表明:在TCDCA高剂量(0.2 g/kg)组小鼠血清中,cAMP含量极显著高于环孢菌素A组(P<0.01);各组小鼠血清cGMP含量差异不显著(P>0.05);TCDCA促进小鼠腹腔巨噬细胞增殖的体外浓度为1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL;1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL的TCDCA均能显著或极显著提高细胞内cAMP含量(P<0.05或P<0.01),对cGMP含量均没有显著影响。说明TC-DCA能够显著提高正常和免疫抑制小鼠血清中和正常腹腔巨噬细胞内cAMP含量。     

牛磺鹅去氧胆酸对热应激小鼠免疫功能的调节作用

为探讨牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对热应激小鼠免疫功能的调节作用,试验将50只小鼠随机分成5组,分别为对照组、热应激组和低、中、高剂量TCDCA组(剂量分别为50、100、200 mg/kg)。热应激组和低、中、高剂量TCDCA组小鼠置于(35.5±0.5) ℃、相对湿度60%环境下连续热应激7 d。结束后分别检测小鼠脾脏指数、血清IgG、小肠sIgA的含量及外周血T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞的变化。结果表明,热应激引起小鼠脾脏指数显著下降(P＜0.05),血清IgG、肠sIgA显著升高(P＜0.05),外周血CD8⁺、CD19⁺百分率显著下降(P＜0.05),CD4⁺百分率下降不显著(P＞0.05),CD4⁺/CD8⁺比值显著升高(P＜0.05),表明热应激导致小鼠机体免疫功能发生紊乱。TCDCA对热应激小鼠脾脏指数无显著影响;但能显著抑制热应激引起的血清IgG含量、小肠sIgA含量升高(P＜0.05)和显著提高外周血CD8⁺、CD19⁺百分率(P＜0.05),同时能够调节CD4⁺/CD8⁺ 比值到正常水平。因此,TCDCA对热应激导致的小鼠免疫功能紊乱具有显著的改善作用。     

牛磺鹅去氧胆酸对糖皮质激素引起小鼠免疫抑制的影响

采用80 mg/kg剂量的地塞米松对小鼠进行腹腔注射制备免疫抑制小鼠模型;牛磺鹅去氧胆酸(Taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)设计了0.05、0.10、0.20 g/kg低、中、高3个给药剂量对小鼠灌胃给药;检测免疫器官质量,碳粒廓清法检测单核-巨噬细胞吞噬功能,流式细胞术检测外周血CD4+和CD8+细胞亚群百分率及CD4+与CD8+的比值,ELISA检测血清中IgG的含量.结果显示:模型小鼠和正常小鼠相比较,脾指数、单核-巨噬细胞吞噬功能、CD4+和CD8+亚群百分率及血清IgG含量均极显著降低(P＜0.01),说明地基米松制备的小鼠模型免疫功能极显著低下.给药组与模型组相比较,TCDCA的3个剂量组对小鼠脾指数均无显著影响(P＞0.05);低剂量组和中剂量组极显著增强单核-巨噬细胞系统吞噬功能(P＜0.01);3个剂量组均显著提高外周血中CD4+细胞百分率(P＜0.05),中剂量组显著提高CD4-与CD8-的比值(P＜0.05);低剂量纽和中剂量组显著提高小鼠血清中IgG含量(P＜0.05).结果表明,TCDCA对糖皮质激素免疫抑制小鼠的非特异性免疫和特异性细胞免疫、体液免疫功能具有恢复作用,但对脾脏萎缩无恢复作用.     

大鼠急性冷应激模型的建立

通过分析冷刺激对大鼠血清中细胞因子、皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量以及外周血淋巴细胞中热休克蛋白70(Hsp70)表达量的影响,构建大鼠急性冷应激模型,旨在为其相关研究提供研究基础。本试验急性冷刺激时间为12h。利用ELISA方法检测各组大鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、CORT、ACTH的含量;采用Western blot和qRT-PCR方法检测各组大鼠外周血淋巴细胞中HSP70及mRNA表达量。结果表明,与对照组相比,急性冷刺激组大鼠血清中IL-2和ACTH的含量显著升高(P0.05),IL-4、IL-6、TNF-α和CORT的含量极显著升高(P0.01),IL-10无显著变化(P0.05);外周血淋巴细胞内HSP70及其mRNA表达量呈显著升高水平(P0.05)。成功构建大鼠急性冷应激模型。