高效氯氰菊酯通过ERK1/2影响小鼠睾丸睾酮合成

为了阐明氯氰菊酯（CP）影响睾酮合成的机制,本研究以成年SPF昆白小鼠为试验动物,通过连续7 d灌喂不同浓度的高效氯氰菊酯（β-CP）,采用RT-PCR、Western blot和放射免疫分析技术分析了β-CP对睾丸重量、血浆类固醇水平、类固醇合成酶、StAR蛋白以及ERK1/2活性的影响。结果显示：随着β-CP浓度的增加,小鼠睾丸的重量无明显变化,但小鼠血浆睾酮的水平逐渐降低;P450sccmRNA、3β-HSDmRNA和StAR mRNA的水平则无明显变化,而P450 c17 mRNA的表达明显下降;StAR蛋白的水平也呈下降趋势,但ERK1/2活性则逐渐升高。以上结果表明,β-CP通过激活ERK1/2而级联抑制P450 c 17 mRNA的转录和StAR前体蛋白的裂解,从而降低睾酮的合成。     

hCG通过ERK1/2调节睾丸间质细胞StAR蛋白的表达

以2—3周龄的仔猪睾丸间质细胞为试验材料，研究了hCG在快速调节期对StAR蛋白表达的调节机制。结果表明：hCG、8-Br-cAMP均能使StAR蛋白、mRNA和P-ERK1／2的水平随刺激时间的延长逐渐增加，8-Br-cAMP作用的速度较hCG更快，增幅也更明显；加入PKI，StAR蛋白、mRNA和P-ERK1／2活性明显下降，但StAR mRNA仍然可以检测到；加入MAPK的抑制剂PD98059后，StAR蛋白、mRNA的水平均降低。由此可知，hCG在诱导StAR蛋白的表达过程中，首先通过cAMP—PKA直接调节蛋白前体蛋白向成熟蛋白的转化，随着时间的延长，通过cAMP-PKA-ERK1／2级联，磷酸化转录因子，促进StAR基因的表达。     

DUSP6通过负向调控ERK1/2通路抑制IBV的增值

为了阐明ERK(extracellular signal-regulated protein kinases)1/2通路在传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)复制过程中的作用以及双特异性磷酸酶6(dual specificity phosphatase 6,DUSP6)对ERK的反馈性负向调控在IBV复制过程中的作用。本研究通过Western blot、Northern blot检测发现:IBV感染Vero和H1299细胞可导致ERK1/2的磷酸化水平和DUSP6表达均上调;利用MEK1/2特异性抑制剂U0126处理病毒感染的细胞后,可明显下调ERK1/2的磷酸化,同时抑制病毒的增殖;利用DUSP6的特异性抑制剂BCI抑制DUSP6的活性或者用siRNA阻断DUSP6的表达后,再感染IBV,发现ERK1/2的磷酸化水平增高,病毒蛋白的表达上调。综上,推测IBV感染细胞激活ERK1/2信号通路,有助于病毒的复制,同时,细胞通过诱导表达DUSP6,负向调控ERK1/2的磷酸化水平,抑制病毒增殖。     

FSH通过激活ERK1/2调节仔猪睾丸支持细胞GDNF的表达

以体外培养的仔猪睾丸支持细胞为研究对象，研究了FSH对GDNF蛋白的调节及其信号传导机制。结果显示：（1）外源性FSH以浓度和时间依赖性促进GDNF蛋白表达：FSH浓度为50ng／mL、作用1h时，GDNF水平达到最高；（2）用FSH（50ng／mL）或dbcAMP（100μmol／L）处理支持细胞，可迅速激活MEK激酶，随FSH刺激时间的延长，ERK1／2活性逐渐升高（0～2h）；（3）MEK1／2的抑制剂U0126可显著抑制FSH对GDNF的激活作用。结果表明，FSH在诱导GDNF蛋白表达的过程中，通过cAMP-PKA-ERK1／2级联通路，促进GDNF基因的表达。     

ERK1/2通路在VEGF促进绵羊卵泡颗粒细胞增殖中的作用

选取10只1.5岁成年小尾寒羊母羊,分别取卵泡颗粒细胞并进行培养。设置5个试验组和1个空白对照组,试验组采用不同质量浓度血管内皮生长因子（VEGF）刺激,空白组不添加VEGF。并用MTT检测细胞增殖情况,Western-blotting检测细胞中P-ERK1/2表达水平。MTT比色结果表明,当VEGF质量浓度为5μg/L时对细胞增殖的促进作用最大,且试验组均高于对照组;Western-blotting结果显示,P-ERK1/2表达水平随VEGF的添加而显著增加,并在5μg/L时达到最大值（P〈0.05）。但在10、15、20μg/L质量浓度下其表达量差异不显著（P〉0.05）。这说明不同质量浓度VEGF对颗粒细胞增殖的促进作用各不相同,其中以5μg/L的VEGF效果最好。当颗粒细胞培养至48h时,P-ERK1/2表达水平较24h时略有提高,并在5μg/L VEGF刺激时达到最大值。VEGF可能是通过促进P-ERK1/2的表达进而促进颗粒细胞的增殖。     

Myostatin通过ERK1/2-PPAR-γ通路抑制猪皮下脂肪前体细胞成脂分化的研究

旨在探讨细胞外信号调节激酶1/2-过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(ERK1/2-PPAR-γ)信号通路在肌肉生长抑制素(MSTN)抑制猪皮下脂肪前体细胞(PSPAs)成脂分化中的作用。PSPAs在诱导分化培养液(DIM)处理同时,随机分3组：对照组(0 ng/mL MSTN)、100 ng/mL MSTN组(100 ng/mL MSTN)以及ERK1/2特异性抑制剂PD98059和100 ng/mL MSTN联合组(PD98059+100 ng/mL MSTN)。采用细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)检测细胞增殖活力,油红O染色法及甘油三酯(TG)定量分析成脂分化,使用荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、CCAAT/增强子结合蛋白-α(C/EBP-α)、脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化ERK(p-ERK)表达。结果表明：细胞增殖活力在3组间无显著性差异(P>0.05)。与对照组相比,100 ng/mL MSTN处理48 h后细胞内脂滴沉积量、油红O阳...     

白藜芦醇通过沉默调节蛋白1-解偶联蛋白2信号通路降低小鼠睾丸间质细胞TM3的氧化损伤

本试验旨在研究白藜芦醇(RES)对氧化损伤小鼠睾丸间质细胞TM3的保护作用,并探索其可能的作用机制。首先,用不同浓度(0、150、200、250、300μmol/L)的过氧化氢(H2O2)处理小鼠睾丸间质细胞TM3 8 h,确定建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度;然后,用不同浓度(0、2.5、5.0和10.0μmol/L)的RES分别处理正常细胞24 h,确定RES安全浓度;最后,用安全浓度的RES处理氧化损伤细胞24 h。在整个培养过程中采用i CELLigence实时无标记细胞功能分析仪监测细胞的增殖情况;待安全浓度的RES处理氧化损伤细胞结束后采用2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针法检测细胞中活性氧(ROS)的含量,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和蛋白质印迹(Western blotting)法分别检测沉默调节蛋白1(SIRT1)/解偶联蛋白2(UCP2)信号通路中关键因子SIRT1和UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量。结果表明:1)用浓度为150μmol/L及以上的H2O2处理细胞8 h后,极显著降低细胞存活率(P0.01),因此确定150μmol/L为建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度。2)用10.0μmol/L及以下浓度的RES处理正常细胞24 h后,细胞存活率均无显著变化(P0.05);用2.5、5.0和10.0μmol/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞存活率均显著提高(P0.05),且各浓度RES组间无显著差异(P0.05)。因此,选用5.0μmol/L为RES的安全浓度。3)用5.0μmol/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞中ROS的含量极显著降低(P0.01);细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的相对表达量极显著增加(P0.01),而UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量则显著或极显著降低(P0.01或P0.05)。由此可见,适宜浓度的RES可激活SIRT1同时抑制UCP2的表达,UCP2通过负反馈调节方式减少细胞内ROS的生成,从而在一定程度上抑制TM 3细胞的氧化损伤。     

NOD1/NOD2介导的信号通路在小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎中的作用

为研究NOD1/NOD2介导的信号通路在金黄色葡萄球菌(S.aureus)引发小鼠乳腺炎中的作用,本实验通过人工接种不同剂量的S.aureus复制小鼠乳腺炎模型,利用组织切片法观察小鼠乳腺病理变化,采用荧光定量PCR方法检测乳腺组织中NOD1、NOD2、下游的受体作用蛋白2(RIP2)、核转录因子κB(NF-κB)以及炎性细胞因子TNF-α、IL-6的m RNA转录水平。结果显示,接种S.aureus的小鼠乳腺组织中炎性细胞增多,NOD1、NOD2、RIP2、NF-κB、IL-6、TNF-α的m RNA转录水平比未接种对照组均显著升高(p0.05),TNF-α、IL-6的m RNA转录水平变化与NOD1/NOD2相一致。以上结果表明NOD1/NOD2受体及其介导的炎性信号通路参与了S.aureus感染小鼠乳腺的免疫反应。     

红花清肝十三味丸通过抑制炎性细胞浸润改善小鼠肝损伤的研究

[目的]研究蒙药红花清肝十三味丸(HHQG)通过抑制炎性细胞浸润改善小鼠肝损伤的作用机制。[方法]选取6～8周龄的雄性C57BL/6小鼠54只,随机分为对照组、模型组和HHQG保肝组,每组18只。HHQG保肝组连续7 d每天灌胃1次HHQG,剂量为0.616 5 g/(kg·BW),对照组和模型组每天灌胃1次等体积的生理盐水;第7天灌胃4 h后,对照组腹腔注射剂量为0.1 mL/(10 g·BW)的橄榄油,模型组和HHQG保肝组均腹腔注射等剂量的CCl₄与橄榄油混合物(CCl₄∶橄榄油=1∶4,V/V)。肝损伤造模后第2、5、7天,通过检测血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活力、观察肝脏组织病理学变化(HE染色及Masson染色),评价肝损伤模型制备是否成功以及HHQG对肝损伤的缓解作用;通过免疫组织化学技术检测肝脏组织中性粒细胞和单核/巨噬细胞浸润情况;应用免疫组织化学技术和反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析肝脏组织中炎性因子TNF-α的表达情况;运用转录组测序(RNA-seq)及RT-qPCR技术分析HHQG对...     

沉默信息调节因子2相关酶1分子调控机制及其在炎性疾病中的作用

沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）依赖性脱乙酰酶Sirtuin家族成员,SIRT1与神经退行性疾病、心脑血管疾病、脂肪肝和肿瘤性疾病等炎性疾病密切相关。本文主要综述了SIRT1的分子调控机制及其在炎性疾病中的作用,具体介绍了SIRT1及其相关下游转录因子肿瘤蛋白53(p53)、核因子-κB(NF-κB)、单磷酸腺苷依赖的蛋白激酶（AMPK）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)等分子的调控机制以及SIRT1在相关疾病中的作用,以期为多种炎性疾病的治疗提供技术支撑。     

绿原酸通过Nrf2/NLRP3通路减轻LPS致大鼠急性肾损伤的作用机制

为了探究绿原酸(chlorogenic acid, CGA)对脓毒症致急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)大鼠的保护作用及相关机制,试验选取32只健康雄性SD大鼠,随机分为4组,分别为对照组(CON组)、模型组(LPS组)、CGA干预组(CGA+LPS组)和CGA组。LPS组大鼠按体重腹腔注射10 mg/kg LPS,建立大鼠脓毒症模型;CGA+LPS组大鼠按体重腹腔注射20 mg/kg CGA,1 h后腹腔注射LPS;CGA组按体重腹腔注射20 mg/kg CGA。4 h后大鼠用异氟醚麻醉,打开腹腔,分别通过膀胱采集尿液、心脏采集血液用于肾脏功能和血清炎症因子检测;H.E.染色观察肾脏组织病理学变化;Western-blot法检测肾脏组织胞核(N)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、总(T)-Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白及NOD样受体家族pyrin域3(NLRP3)炎症小体相关蛋白(NLRP3、Caspase1 p20、IL-1β和IL-18)的相对表达量。结果表明：与CON组相比,LPS组血清尿素氮(BUN)和肌...     

白头翁汤通过抑制TLR4-ERK1/2信号通路缓解LPS诱导的微血管内皮细胞炎性反应

近年来,中药复方抗炎机制的研究不断深入,白头翁汤复方(Pulsatilla decoction,PD)作为经典的清热解毒中药方剂常用于预防和治疗细菌性腹泻.然而其抗炎机制和靶细胞研究仍然不明确,本课题以大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)为模式细胞,旨在研究白头翁汤对LPS诱导的RIMVECs炎症反应的调控作用....     

青蒿琥酯通过Keap1/Nrf2通路抑制氧化应激改善犬急性肾损伤的体内外分析

本研究旨在观察青蒿琥酯对庆大霉素诱导犬急性肾损伤的抗氧化调节作用及其机制。将20只犬随机等分成4组：对照组(Control)、庆大霉素模型组(GM)、青蒿琥酯治疗组(GM+ART)、青蒿琥酯+ML385干预组(GM+ART+ML385)。除对照组,其他组犬采用注射GM建立AKI模型。成功造模后,GM+ART组给与青蒿琥酯,ART+ML385组给与ART和ML385,对照组和GM组给予生理盐水,试验期12 d。用不同浓度GM与MDCK细胞共培养,确定最佳浓度为4.0 mmol·L^-1,用相同方法确定ART最佳浓度为50.0 μmol·L^-1。将体外培养MDCK细胞、过表达Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)的MDCK细胞(M-K)和敲减核因子E2相关因子2(Nrf2)表达的MDCK细胞(M-SiNrf2)分别分成3组：健康对照组、GM对照组和GM+ART干预组,共培养24 h后用于检测。结果显示：1)在动物试验中,GM+ART组肌酐(Cr)、尿素氮(UN)及肾损伤因子1(KIM-1)水平显著低于GM组,GM+ART+ML385组Cr、UN及KIM-1水平显著高于GM+ART组。2)在动物试验中,与GM组比较,GM+ART组Nrf2和谷胱甘肽半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)蛋白表达上调,Keap1蛋白表达下调,肾组织匀浆中总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平升高,丙二醛(MDA)水平降低。与GM+ART组比较,给与ML385后Nrf2和GCLC蛋白表达下调,T-SOD和GSH水平降低。3)在细胞试验中,与4.0 mmol·L^-1 GM共培养的MDCK细胞比较,加入50.0 μmol·L^-1ART能显著提高细胞增殖率,降低ROS水平,下调Keap1表达,上调Nrf2、血红素氧合酶1(HO1)及GCLC表达。4)在细胞试验中,与MDCK细胞比较,在GM+ART相同处理下,M-K细胞和M-SiNrf2细胞Keap1蛋白表达上调,Nrf2、HO1及GCLC蛋白表达下调,细胞增殖率降低,ROS含量升高(P＜0.05或P＜0.01)。综上所述,青蒿琥酯对庆大霉素诱导犬急性肾损伤具有保护作用,其作用机制与青蒿琥酯通过Keap1/Nrf2信号通路抑制氧化应激反应有关。     

葛根素干预软骨氧化应激和Nrf2/HO-1通路改善PTOA大鼠软骨退变的机制

旨在研究葛根素干预软骨氧化应激和Nrf2/HO-1通路改善创伤后骨关节炎(post-traumatic osteoarthritis, PTOA)大鼠软骨退变的作用机制,探究葛根素对骨关节炎的治疗作用。将40只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组：对照组(n=8)、模型组(n=8)、塞来昔布组(n=8)和葛根素组(n=16)。葛根素组随机分为低剂量组(n=8)和高剂量组(n=8)。除对照组外,其余各组通过前十字韧带横断(anterior cruciate ligament transection, ACLT)建立大鼠PTOA模型。低剂量组(50 mg·kg^-1)、高剂量组(100 mg·kg^-1)和塞来昔布组(2.86 mg·kg^-1)进行灌胃给药,对照组给予等量生理盐水,连续干预5周。每周进行关节肿胀程度、冷敏感反应和膝关节伸膝发声检测,评估大鼠关节肿胀和疼痛程度。给药结束后,收集各组大鼠膝关节和血清样本。对胫骨和股骨组织进行HE染色和改良的Mankin评分,以评估病理组织学变化。检测大鼠软骨中基质金属蛋白...     

新疆野生荒漠肉苁蓉醇提物调节小鼠DCs成熟对Th1/Th2的免疫增强作用

旨在探讨新疆野生荒漠肉苁蓉醇提物(ethanol extracts of wild Cistanche deserticola,EEWCD)调节Th1/Th2免疫反应的特点及初步的作用机制.采用卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)为抗原,研究EEWCD对小鼠体液免疫,细胞免疫,细胞因子分泌,树突状细胞(dendri...     

青蒿琥酯通过激活AMPK和Nrf2/HO-1信号通路抑制PRRSV复制的研究

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的严重危害养猪业的传染病,主要以猪的呼吸道症状、新生仔猪的高死亡率以及母猪繁殖障碍等症状为主.疫苗一定程度上保护了猪群,但PRRSV易变异、临床流行的病毒基因型较多等问题导致疫苗保护效果并不理想.因此,迫切需要开发新的抗病毒策略以防控PRRS.     

植物多糖通过核因子κB及丝裂原活化蛋白激酶/核因子E2相关因子2信号通路发挥抗氧化作用的机制

植物多糖是植物提取物中重要活性成分之一,具有抗氧化、免疫增强、抗肿瘤等多种生物学作用。在抗氧化作用方面,植物多糖通过核因子κB(NF-κB)信号通路减少炎症因子的分泌,缓解氧化应激损伤;通过丝裂原活化蛋白激酶/核因子E2相关因子2(MAPK/Nrf2)信号通路清除机体或细胞内自由基,提高抗氧化酶活性或含量,增强机体或细胞对氧化应激的抗性。本文主要综述了氧化应激产生的原因及其危害,并阐述NF-κB及MAPK/Nrf2信号通路在植物多糖发挥抗氧化作用中的研究现状以及存在问题,为植物多糖作为抗氧化剂的研究与应用提供理论参考。     

长链非编码RNA NEAT1通过Wnt/β-catenin信号通路影响PRRSV复制机制的初步研究

长链非编码RNA(LncRNA)是一种长度大于200 nt的非编码RNA分子,对于调节多种生命活动发挥着重要作用.为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与LncRNA核富集转录体1(NEAT1)相互作用的分子基础,本研究将PRRSV(MOI 1)感染Marc-145细胞,分别在感染后不同时间(0、1 h、2 h、3...     

艾纳香油对NF-κB及Nrf2/HO-1信号通路的作用研究

旨在通过研究NF-κB、Nrf2/HO-1通路来揭示艾纳香油（Blumea balsamifera（L.）DC Oil,BBO）发挥抗炎效果的作用机制。本研究利用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,试验分为空白组、LPS模型组、BBO组（低、中、高剂量）、BBO阴性对照组,每组3个重复,采用Hoechst 33342和PI双染检测BBO对细胞凋亡的影响;采用ELISA和分光光度法检测BBO对LPS诱导巨噬细胞后分泌IL-1β、TNF-α、PGE₂、LTB₄、NO含量及iNOS活力的影响;采用RT-PCR检测BBO对TNF-α、IL-1β的mRNA表达水平的影响;采用Western blotting检测BBO对NF-κB及Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白水平的影响。结果显示,BBO在80 μg·mL^-1剂量范围内可以扭转LPS导致的巨噬细胞形态变化及细胞凋亡发生;与LPS模型组相比,BBO 60~80 μg·mL^-1剂量下可以极显著抑制LPS诱导的细胞炎性因子和炎症介质IL-1β、TNF-α、PGE₂、LTB₄、NO的分泌及iNOS活力（P<0.01）,并极显著抑制LPS导致的细胞IL-1β、TNF-α mRNA表达（P<0.01）;同时,BBO 60~80 μg·mL^-1剂量下极显著下调LPS导致的COX-2、5-LOX、p-IKKα、p-P65、p-IκB-α、胞质Nrf2蛋白表达（P<0.01）,极显著促进HO-1、核Nrf2蛋白表达（P<0.01）,并呈现剂量依赖性关系。结果提示,艾纳香油有良好的抑制细胞炎性和抗凋亡效果,其可能通过抑制NF-p-IκBB通路中关键蛋白磷酸化和炎症因子的产生从而促进Nrf2/HO-1通路中主要抗炎基因表达最终发挥抗炎作用。     

银杏叶提取物通过脂联素/脂联素受体1/腺苷酸激活蛋白激酶信号通路改善肥胖犬脂质代谢及脂肪沉积的研究

本试验旨在研究脂联素（APN）/脂联素受体1 (AdipoR1)/腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）信号通路在银杏叶提取物改善高脂饮食诱导的肥胖犬脂质代谢及脂肪沉积中的作用。试验选取雄性成年泰迪型贵宾犬50只,适应性饲喂2周后分成对照组（A组,n=6）和高脂饲粮组（n=44）。对照组饲喂基础饲粮,高脂饲粮组饲喂高脂饲粮（基础饲粮+25%猪油）。饲喂8周后高脂饲粮组成功建立肥胖犬模型,筛选30只肥胖犬,等分成5组：高脂饲粮对照组（B组,n=6）、银杏叶提取物组（C组,n=6）、阴性siRNA(N-siRNA)对照组（D组,n=6）、APN-siRNA组（E组,n=6）和AdipoR1-siRNA组（F组,n=6）。A组继续饲喂基础饲粮,其他各组继续饲喂高脂饲粮。C组、D组、E组和F组每天按50 mg/kg BW的剂量灌服银杏叶提取物,A组和B组灌服等量生理盐水。此外,D组、E组和F组在腹部皮下注射500μL siRNA,A组、B组和C组注射等体积生理盐水,每周3次。试验周期为4周。试验结束后,测量试验犬的体重及体脂率,测定血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C...