节杆菌基因组DNA提取方法的改良

[目的]研究比较了节杆菌的不同DNA提取方法,以获得高质量的基因组DNA。[方法]采用反复冷冻研磨、甲苯处理对细胞进行预处理,随后进行CTAB抽提,并与细菌基因组提取试剂盒进行比较。[结果]改良的CTAB法提取的DNA,纯化之后经电泳检测表明,基因组DNA条带清晰,量度均一,DNA片断大小一致;以上述DNA为模板进行PCR扩增,条带单一、特异性强,其中利用经甲苯方法提取的DNA快速、简便、经济实用,可作为PCR扩增的模板进行后续的基因操作和分子生物学研究。[结论]改良的CTAB法能够有效地提取节杆菌基因组DNA,纯度达到要求。     

林麝粪便基因组DNA的提取及PCR扩增

【目的】探索从林麝粪便中提取基因组DNA并进行物种鉴定的可行性,为林麝野外调查工作以及分子粪便学在林麝保护中的应用提供科学依据。【方法】采集林麝粪便,采用改良的CTAB抽提基因组DNA;按常规PCR法对mtDNA D-loop区和Cyt b基因进行扩增测序后,用DNAMAN 6.0软件进行系统发育分析;在不同温度存放不同时间,研究林麝粪便基因组DNA的提取与mtDNA D-loop区和Cyt b基因PCR扩增的时效性。【结果】以提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增均能特异性地扩增出mtDNA D-loop区和Cyt b基因。系统发育分析结果表明:所扩增产物为林麝的mtDNA D-loop区和Cyt b基因。时效性分析结果显示:常温和4℃条件下保存96h以内的林麝粪便所提取的基因组DNA能有效扩增出mtDNA D-loop区和Cyt b基因。【结论】自然条件下林麝粪便中林麝自身体细胞DNA保存时间较长,通过在野外采集林麝粪便提取基因组DNA并进行物种鉴定是可行的。     

羌活基因组DNA提取方法

[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。     

一种改良的苏云金芽孢杆菌质粒DNA提取方法

以Sambrook的碱裂解法为基础,通过控制菌体培养时间,适当调整提取过程中3种溶液的比例及作用时间,摸索出一种适合于提取苏云金芽孢杆菌质粒DNA的方法.该法与常规碱裂解法相比具有重复性好、质粒DNA质量高等优点.     

天牛基因组DNA的提取方法

通过试验探索出3种可以快速、简便地从天牛干标本、液浸标本和新鲜标本中提取DNA模板的方法。对所获得的基因组扩增分析表明,经过PCR之后的DNA能呈现明显的多态性,同种天牛用同一引物扩增幼虫和成虫所获得的结果相同,可以认为,RAPD技术可以应用于天牛成虫干标本及幼虫浸渍标本的鉴定及系统发育研究中,也证明了这3种方法用于提取不同保存时间、不同种天牛基因组的DNA是切实可行的。     

木香基因组DNA的提取方法

以木香作为实验材料,利用简单提取法、改良CTAB法、改良SDS法、改良CTAB-SDS法和高盐低pH值法对木香基因组DNA进行提取,并对其基因组DNA的纯度和含量进行测定。结果表明:利用以上5种方法提取的木香基因组DNA,在纯度和含量上以改良CTAB法效果最好,其它依次是改良SDS法、简单法、高盐低pH法和改良CTAB-SDS法。     

曲霉基因组DNA提取方法研究

利用SDS法、CTAB法和氯化苄法提取曲霉基因组DNA.结果表明: 这几种方法都不能有效提取曲霉基因组DNA,在总结前人方法的基础上摸索出一种提取曲霉基因组DNA的有效方法.用此方法所得的曲霉DNA质量和数量均理想,每克曲霉菌丝体能提取60μgDNA,样品的O.D260/280在1.7～2.0之间,分子量均在23 kb以上,一级结构完整.对提取的DNA作RAPD扩增取得了令人满意的结果.     

蚂蚁基因组DNA提取方法比较

对蚁科3种蚂蚁分别用SDS-蛋白酶K消化法和2种改进的盐提取法进行基因组总DNA的提取。结果表明,SDS-蛋白酶K消化法和饱和氯化钠提取法均能从标本获得基因组DNA;而乙酸钾提取法获得的DNA太少且纯度低,琼脂糖凝胶电泳DNA条带弥散现象严重。通过比较综合分析,蚂蚁DNA提取的最优方法是SDS-蛋白酶K消化法。     

甘薯叶片基因组DNA提取方法

针对甘薯叶片富含多糖、多酚、色素等物质的特点,以新鲜幼嫩甘薯叶片为材料,采用改良CTAB法提取基因组DNA,并对DNA进行电泳检测和AFLP分析.结果表明:使用改良CTAB法从32份甘薯叶片中提取基因组DNA,其纯度高、质量好、相对分子量大,多糖和多酚类等杂质去除比较完全,且OD<,260>/OD<,230>值>2.0...     

蓖麻基因组DNA提取方法研究进展

目前,基因组DNA的提取已有多种方法,但是不同的方法具有各自的优缺点。本文介绍了蓖麻基因组DNA提取原理,并叙述了近年来提取蓖麻基因组DNA的主要方法,如CTAB法、SDS法、试剂盒法、磁性微球法,通过比较这些不同提取方法的优缺点,分析了影响DNA纯度的因素,如样本的采集与保存、提取缓冲液成分的作用、DNA提取纯化方法等,以期为蓖麻相关研究提供理论基础。     

玉米基因组DNA快速提取方法

探讨了用NaOH裂解法从玉米单子粒胚乳中和用十二烷基肌氨酸钠法从玉米叶片中快速提取基因组DNA的方法,分析了2种方法提取的基因组DNA的效果及应用价值.结果表明,虽然得到的DNA质量基本一致,都可用于玉米品种纯度检验和分子标记辅助选择,但优化的、从叶片中快速提取的基因组DNA可长期保存,并用于多种后续序列分析工作.     

噬菌体基因组DNA快速提取方法

针对传统噬菌体基因组DNA的提取方法缺乏广泛适用性,并且提取中用到酚/氯仿抽提,操作步骤繁琐,会对操作人员身体造成一定程度的损伤等不足,笔者建立了1种噬菌体基因组DNA快速提取方法。其提取的主要步骤包括宿主核酸降解、噬菌体粒子沉淀、噬菌体DNA释放、杂质去除、DNA吸附、DNA清洗和DNA洗脱等。结果表明,通过此法能快速提取以溶藻弧菌、大肠杆菌和阴沟肠杆菌为宿主菌的多种噬菌体基因组DNA,最快可以在2 h内完成,而且提取的产量和纯度均较高,DNA浓度超过100 ng·μL~(-1),OD_(260/280)达到1.8以上,提取产物不受宿主菌基因组DNA污染,可用于下游的实验分析。     

烟叶基因组DNA提取方法研究

为探索适宜烟草叶片DNA提取的方法,对提取植物DNA的CTAB法和SDS法进行了优化,主要是在提取液的种类和浓度上做改进.以烟草叶片为材料,采用4种方法从烟草叶片中提取基因组DNA.结果发现,采用1%CTAB法可从烟草叶片中提取质量较高的基因组DNA,其分子量大于23 kb,以此方法提取的DNA为模板进行随机引物的PCR扩增,可获得清晰的RAPD条带,该研究初步建立了适合烟草叶片的RAPD技术体系.     

枸杞基因组DNA提取方法比较

以拘杞叶片为材料,分别采用优化后CTAB法、KI法、尿素法、高盐低pH法以及SDS法提取拘杞基因组DNA,分别进行琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计以及PCR扩增进行检测.研究结果表明,5种方法均能从枸杞叶片中提取到基因组DNA,但不同方法在提取时间和提取得到的基因组DNA的纯度和浓度上存在明显的差异.优化后CTAB法提取...     

水稻基因组DNA提取方法的研究

为探索分子标记辅助选择育种中快速有效的DNA提取方法,以水稻新鲜叶片、衰老叶片、水稻种子为材料,以CTAB法和SDS法为提取方法,利用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳进行DNA纯度检测,对水稻基因组DNA提取方法和实验体系进行了优化和摸索。结果表明:新鲜叶片提取效果最好,其次是种子,再次是衰老叶片;CTAB法和SDS法差别不大;为避免酚类物质氧化污染,可在提取液中添加β-巯基乙醇。     

糯玉米基因组DNA提取方法的比较

以糯玉米的胚为材料,采用SDS法、CTAB法和碱煮法提取糯玉米基因组DNA,样品经紫外分光光谱吸收、琼脂糖电泳、PCR扩增和酶切试验检测,表明SDS法所提DNA浓度较高,质量较好;CTAB法提取的DNA中氯仿等残留量少,安全、经济,具有较强的实用性;而碱煮法提取的DNA浓度较低,但提取过程简单,使用的药品少,快速,适合用于PCR快速检测所需DNA。     

槟榔基因组DNA的高效提取方法

以槟榔叶片为植物材料,采用改良的SDS-CTAB方法提取其基因组DNA。结果表明,以水饱和酚代替Tris饱和酚对样品进行抽提的SDS-CTAB法可以获得纯度高(OD260/OD280在1.7~1.9、OD260/OD230大于2)、一级结构完整、分子量大于23 kb的DNA,产率在50~120μg/g。该法所提DNA成功用于后续的分子生物学研究,并在花生、香蕉等植物上得到应用。     

稻飞虱基因组DNA提取方法的比较

 以褐飞虱（Nilaparvata lugens Stal）为材料,分别采用SDS法,CTAB法,冰KAc法和饱和NaCl法提取褐飞虱的基因组DNA。通过电泳、紫外光谱分析和ISSR-PCR扩增等检测手段,比较分析了DNA数量与质量。结果表明： CTAB法和SDS法提取的DNA质量明显优于冰KAc法和饱和NaCl法,适于PCR扩增。并且SDS法提取的DNA经过PCR扩增后得到较多的多态性位点。因此,SDS法是实验室提取稻飞虱基因组有效,经济实用的方法。     

茶树基因组DNA的高效提取方法

为了从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的茶树叶片中分离出高质量的基因组DNA，对4种植物DNA提取方法进行改良后，以茶树春梢为材料，对提取效果进行了比较，并首次采用CTAB区室法提取茶树基因组DNA。结果表明，用该4种方法提取的DNA，其OD260／OD280都在1．8以上，相对分子质量均大于21kb，能完全被EcoRI酶切消化，也能获得清晰的PCR扩增图谱。因此，只要操作合理，4种方法均能提取出高质量的DNA。     

野牛草基因组DNA提取方法的筛选

采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、十二烷基磺酸钠(SDS)法以及高盐法3种方法对野牛草叶片的基因组DNA进行提取,并利用分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测比较3种方法提取DNA的纯度与浓度。结果表明,3种方法提取到的野牛草叶片DNA的纯度、完整性都较好,质量从高到低依次为CTAB法高盐法SDS法,产率依次为SDS法CTAB法高盐法,综合来看CTAB法是提取野牛草基因组DNA的最佳方法。