猪伪狂犬病毒C株的分离鉴定

在流行病学调查中分离到的1株伪狂犬病毒,命名为猪伪狂犬病毒C株,并对其进行鉴定、纯化。在gE和gI基因段上设计特异性引物进行PCR检测,闽A株在5 000 bp处出现目的条带,该毒株在1 500 bp附近出现目的条带,对目的条带测序,扩增产物大小为1 538 bp,在第989—4 468位基因缺失,缺失片段大小为3 570 bp,该缺失片段包含了伪狂犬病病毒的主要毒力基因(gE基因),除此缺失片段外,分别在第873、4 665、4 666、4 950位发生了碱基突变,同猪伪狂犬病病毒Bartha K61同源性为95.0%—96.0%,与PRV Bartha K61不是同一个毒株。用该毒株对部分省市分离到的伪狂犬毒株和标准毒株闽A株进行中和试验,中和指数为708—6 761,该毒株可完全中和临床分离的伪狂犬病毒株,故可用作候选疫苗毒株。     

伪狂犬病毒HuB2020株的分离与鉴定

从临床病料中分离纯化1株猪伪狂犬病毒——HuB2020,并对其毒力、培养特性及遗传变异开展了一系列研究。结果表明,该毒株gE基因核苷酸序列与国内PRV毒株的核苷酸序列同源性在98.9%～99.9%。纯化后的病毒经测定其在PK15细胞上的TCID50为107.5/mL;对6周龄昆明小鼠的LD₅₀为1×10^5.7。组织嗜性分布显示,10^6.0TCID₅₀/0.1 mL、10^5.0TCID50/0.1 mL攻毒组对小鼠的神经嗜性均高达100%,且病毒在脑和心脏中的检出率均高于其他组织。     

猪伪狂犬病毒河南株的分离与鉴定

从疑似猪伪狂犬病的病料中分离到 1株病毒 ,通过电镜观察、免疫荧光检查、PCR方法检查 ,证明该分离株为猪伪狂犬病毒 ;用分离株研制出油乳剂灭活苗预防猪伪狂犬病 ,预防效果良好。     

猪伪狂犬病毒HX14株的分离与鉴定

采集临床疑似伪狂犬病例病料并分离到1株病毒。PCR鉴定仅能扩增出伪狂犬病毒特异性条带,其他常见的7种猪群疫病病毒为阴性。家兔接种试验能引起典型的神经症状,最终衰竭死亡,证实所分离病毒为强毒株,将分离到的伪狂犬病毒命名为HX14株。选取我国不同时期分离的伪狂犬野毒gE基因进行序列比对分析,结果显示,HX14株与参比序列同源性在93.8%~97.2%之间,同源性最高的是Min-A株,最低的是GZ-Z1株。氨基酸序列比较,HX14株和Ea、GDSH、HB-HS、HB-LF、HBJZ、LXB6、LXB88、Min-A、P-PrV、Yangsan株的同源性均为93.2%,与89V87同源性最低,为88.1%。HX14株在8个氨基酸位点上和参考毒株明显不同,分别是P~(12)→M~(12)、~(14)LRREPP19→~(14)CSARAA19、T~(115)→R~(115)。研究表明HX14株为gE基因变异较为明显的伪狂犬野毒强毒株。     

上海地区一株猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

上海地区某猪场发生疑似伪狂犬病毒感染,采集其内脏样品进行伪狂犬病毒的分离,并采用细胞病变观察和荧光PCR方法进行鉴定。结果表明采用BHK-21细胞能够从该发病猪体内分离到猪伪狂犬病毒,其分离株能够引起BHK-21细胞产生典型的细胞病变。该猪场发生猪伪狂犬后,已连续造成2头成年猪的死亡,全群发病率高达50%,这与以往伪狂犬病并不造成成年猪的死亡不同,需要对该分离株进行进一步病原特性的研究。     

猪伪狂犬病毒的分离鉴定及其gE、TK 全基因序列遗传变异分析

将分离到的8种PRV分离株的g E、TK基因与国内外的毒株进行核苷酸及氨基酸的序列同源性分析,结果发现,分离毒株的gE、TK基因与15株国内外已发表的代表毒株核苷酸及氨基酸的序列同源性分别为97.3%~99.9%、98.7%~99.9%;遗传进化分析结果表明,分离毒株与国内近年分离自不同省份的代表毒株亲缘关系较近,与国外分离的代表毒株亲缘关系较远;而对gE、TK基因氨基酸主要变异位点分析表明,gE和TK基因都有一些位点已经发生突变。结果表明猪PRV广东部分地区分离毒株已发生变异,为规模化猪场对猪伪狂犬病的净化以及疫苗的选择提供参考。     

南京地区1株猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

于2013年从南京某猪场送检发病仔猪脏器中分离获得1株病毒。病样组织液上清经BHK细胞分离培养后,利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,PCR可以扩增出PRV gE基因的全长片段,且在间接免疫荧光检测中呈现阳性荧光反应。将命名为NJ株的分离病毒接种家兔,被接种的家兔很快出现瘙痒、死亡等伪狂犬病症状。与以往发表的伪狂犬病毒gE基因序列比对及进化树分析结果显示,分离株属于一个相对独立的分支。由中国兽药监察所提供的伪狂犬病阳性血清对分离株有一定的中和能力。根据实验结果推测,南京某猪场流行的伪狂犬病毒存在一定的抗原变异。     

猪伪狂犬病毒HN-LD株分离鉴定及部分毒力基因遗传进化分析

为了解湖南省伪狂犬病毒（PRV）病原特征及遗传变异情况,从湖南娄底某猪场采集疑似感染伪狂犬病（PR）病料,通过细胞传代、PCR鉴定、间接免疫荧光试验（IFA）等进行病毒分离鉴定;对该毒株的gC、TK和gE基因进行PCR扩增及测序,分析其变异情况。结果表明,临床病料接种PK15细胞后有1份样品出现细胞病变,经过PCR和IFA鉴定结果表明分离的毒株为PRV（命名为HuN-LD株）,盲传第6代病毒的滴度为10^7.5 TCID₅₀/mL。与参考PRV毒株相比,该毒株gE、TK和gC基因序列与国内流行变异株对应序列同源性最高,与其他毒株同源性相对较低。基于gC基因序列构建的系统进化数分析结果表明,该毒株与国内2011年后流行变异株亲缘关系最近,属于同一分支,但与国外流行的毒株（NIA3和Becker等）相隔较远,属于不同分支。提示成功分离得到1株PRV变异株,该结果可为湖南省PRV流行病学研究及疫苗研发等提供科学依据。     

南京地区1株猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

于2013年从南京某猪场送检发病仔猪脏器中分离获得1株病毒。病样组织液上清经BHK细胞分离培养后,利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,PCR可以扩增出PRV gE基因的全长片段,且在间接免疫荧光检测中呈现阳性荧光反应。将命名为NJ株的分离病毒接种家兔,被接种的家兔很快出现瘙痒、死亡等伪狂犬病症状。与以往发表的伪狂犬病毒gE基因序列比对及进化树分析结果显示,分离株属于一个相对独立的分支。由中国兽药监察所提供的伪狂犬病阳性血清对分离株有一定的中和能力。根据实验结果推测,南京某猪场流行的伪狂犬病毒存在一定的抗原变异。     

猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

从河南某发病猪场大批死亡仔猪的脾、肾及脑组织中分离到1株猪伪狂犬病毒(PRV)毒株,该毒株经细胞连续传代培养后,接种PK-15细胞能够产生明显的细胞病变(CPE),且能被PRV阳性血清中和.病毒对氯仿、乙醚敏感,56℃水浴30 min能使其灭活.将所分离的病毒接种家兔和小鼠,均出现明显的伪狂犬病临床症状.PCR鉴定结果表明,用gp50基因序列引物能够从该毒株上扩增出目的条带,将测序结果与GenBank中的5株PRV毒株进行比对分析,同源性达99％.证实所分离病毒为猪伪狂犬病毒.     

广西猪伪狂犬病病毒GXA株的分离鉴定

从广西某猪场大批死亡的新生仔猪分离1株病毒，该病毒株在PK-15出现细胞病变，在电镜下可见到典型的伪狂犬病病毒粒子，细胞培养物接种家兔出现伪狂犬病症状。进而用所分离病毒的DNA作为模板，应用特异性引物，通过聚合酶链式反应扩增出伪狂犬病病毒gp50基因中433-651之间217bp长的特异性片段。分离的病毒为猪伪狂犬病病毒，并将其命名为猪伪狂犬病病毒GXA株。     

猪伪狂犬病毒贵州分离株gE基因的克隆及遗传信息分析

为了解贵州地区猪伪狂犬病毒的分子流行现状,本研究提取实验室分离并保存的PRV GZJS2017株病毒核酸作为PCR扩增模板,并对其进行TA克隆、序列测定和用生物学软件进行遗传信息分析。结果表明:本次分离得到的GZJS2017株gE基因所测长度1740 bp,GC含量为73.97%,通过系统进化树分析结果显示PRV不同地域毒株之间同源率达98.8%~99.9%,说明该毒株gE基因具有高度的保守性。本研究可为今后深入开展PRV gE基因的功能研究提供一些依据。     

一株新分离的猪伪狂犬病毒的评估

为了对一株经过鉴定、纯化的猪伪狂犬病毒(PRV)黑龙江省现地分离株进行评估,对现地分离株进行了继代培养和分离,以经典PRV Ra株为对照,测定不同培养时间的病毒含量,绘制毒株的生长曲线,同时利用分离株的细胞培养物对家兔、小鼠和分离动物进行致病力试验。结果显示:分离株比Ra株病毒含量先达到峰值,并且相同培养时间时病毒含量高于Ra株,同时确定其最佳培养时间为42 h;致病力试验中攻毒组动物均出现了不同程度的典型临床症状。说明PRV现地分离株致病性能良好。     

一株新分离的猪伪狂犬病毒的评估

为了对一株经过鉴定、纯化的猪伪狂犬病毒(PRV)黑龙江省现地分离株进行评估,对现地分离株进行了继代培养和分离,以经典PRV Ra株为对照,测定不同培养时间的病毒含量,绘制毒株的生长曲线,同时利用分离株的细胞培养物对家兔、小鼠和分离动物进行致病力试验。结果显示:分离株比Ra株病毒含量先达到峰值,并且相同培养时间时病毒含量高于Ra株,同时确定其最佳培养时间为42 h;致病力试验中攻毒组动物均出现了不同程度的典型临床症状。说明PRV现地分离株致病性能良好。     

狂犬病毒分离株N基因的分析

运用RT-PCR和动物接种的方法从广东省东莞市正常犬只的唾液中分离获得1株狂犬病毒,编号为GD33.为了解析该毒株与兽用狂犬病弱毒疫苗的关系,对该分离株的N基因进行了克隆和测序,并将N基因的序列与GeneBank上已发表的狂犬病毒N基因核苷酸和推导的氨基酸序列进行比较.结果发现:该分离株仅能引起乳鼠发病,对6周龄成鼠无致病性,说明该毒株不是强毒.该分离株N基因与弱毒疫苗HEP-Flury N基因的相似性最高,达99.7%,并且同处系统发育树的最近分枝.因此,推测该分离株源自接种的弱毒疫苗.     

陕西省猪伪狂犬病流行病学调查和WG株的分离鉴定

应用gE-EL ISA法对陕西省部分地区6个集约化猪场的187份猪血清进行了伪狂犬病毒(P seu-dorab ies v irus,PRV)野毒感染检测,并对疑似伪狂犬病发病仔猪的内脏及脑组织进行了病毒分离鉴定。结果显示,陕西省猪PRV野毒抗体平均阳性率为28.76%,最高为48.98%,最低为0;分离毒株可致PK-15细胞出现典型的圆缩、集聚,脱落等细胞病变,连续传代后,CPE出现的时间稳定在20 h左右;细胞培养物和病料混悬液接种家兔均出现典型奇痒症状,PCR反应扩增出PRV gE基因中长度为612 bp的特异性片段。表明本试验分离的病毒为PRV,并将其命名为PRV W G株。     

动物伪狂犬病毒在我国的流行

伪狂犬病(pr)又称为aujeszky病,是一种由伪狂犬病毒引起的传染病.在没有特定宿主嗜性的情况下,病毒可感染多种哺乳动物,包括猪、羊、牛等,引致严重的临床症状和急性死亡.20世纪50年代,伪狂犬病毒(prv)首次在我国报道,2011年以来,部分地区出现prv变异,导致养猪业遭受重大经济损失.尽管过去几年,科学家们一...     

广西流行狂犬病毒糖蛋白基因的遗传性分析

[目的]通过测定广西流行狂犬病毒糖蛋白(G)基因的全序列,了解广西狂犬病的流行趋势和遗传变异规律,为制定广西狂犬病的防控策略提供科学依据.[方法]2000年10月~2007年10月,从广西14个市采集1569份动物脑组织,经RT-PCR检测及小白鼠脑内接种试验分离狂犬病毒,然后对狂犬病毒G基因进行测序分析.[结果]从广西各地共分离获得26株狂犬病毒野毒株,其中犬23份,牛、猪、猫各1份.狂犬病毒G基因核苷酸全长2067 bp,开放阅读框1575bp,编码524个氨基酸.根据G基因核苷酸同源性及遗传进化树分析结果,可将广西流行的狂犬病毒株分成3个群,Ⅰ群15株,其核苷酸同源性为97.7%~99.9%; Ⅱ群10株,其核苷酸同源性为98.0%~99.9%; Ⅲ群只有1株.通过氨基酸变异分析,了解了26株野毒株G基因编码蛋白的氨基酸突变位点.[结论]广西存在3个群的狂犬病毒野毒株,且以Ⅰ群和Ⅱ群流行为主,3个群的氨基酸变异均呈现明显的特异性.