提莫菲维小麦与二倍体野燕麦远缘杂交后代的SRAP分析

采用SRAP技术分析了提莫菲维小麦二倍体与野燕麦远缘杂交后代的真实性及其特点.结果表明,22对SRAP引物中,20对引物在双亲间扩增出多态性条带,其多态性比率为71.76%.me4-em1、me4-em3和me3-em3 3对引物在提莫菲维与二倍体野燕麦杂交的F3株系中扩增出双亲的特异带,表明该F3株系具有双亲的遗传物质,该F3株系是提莫菲维小麦和二倍体野燕麦成功属间杂交的真实杂种后代.在该F3株系的扩增结果中部分双亲带型消失,并且提莫菲维小麦消失的带数远少于野燕麦消失的带数;同时有非父母标记新带型出现.杂种后代DNA序列的这种变化可能有利于新形成异源多倍体小麦的快速进化、遗传协调和遗传稳定性.     

基于SCoT标记的猕猴桃种质资源遗传多样性研究

利用SCoT分子标记对28份猕猴桃种质资源进行遗传多样性和UPGMA聚类关系研究。结果表明,8条引物对供试猕猴桃材料显示多态性,共扩增出75条清晰的条带,平均每条引物扩增9.1个多态性条带,多态性比率为97.3%。遗传相似系数在0.47～0.86,显示供试的猕猴桃种质资源具有丰富的遗传多样性。UPGMA聚类分析显示,在遗传相似系数0.64处可将28份猕猴桃种质划分为3个明显的聚类分支,部分中华猕猴桃、2个软枣猕猴桃与多数美味猕猴桃种质聚类,显示中华猕猴桃、软枣猕猴桃与美味猕猴桃具有较高的遗传相似性,种质亲缘关系较近;部分中华猕猴桃种质遗传变异较高,并与大籽猕猴桃有较近的遗传关系。     

软枣猕猴桃EST-SSR引物开发及通用性研究

本研究开发软枣猕猴桃EST-SSR引物196对,探究软枣猕猴桃EST-SSR引物在猕猴桃属25个品种中的通用性,并对上述25个品种进行聚类分析。结果表明,筛选得到35对EST-SSR引物,共扩增189条带,平均每对引物扩增5.40条带,条带大小为170~250bp,其中多态性条带达178条(94%),可见软枣猕猴桃EST-SSR引物在猕猴桃属中具有较高的通用性,猕猴桃属植物具有较高的遗传多样性;聚类分析表明,25个猕猴桃属品种的遗传相似系数(GS)为0.591~0.969,在相似系数0.70处,中华猕猴桃与美味猕猴桃归为一支,二者亲缘关系较近。     

SRAP构建玉米杂交种指纹图谱的研究

SRAP(相关序列扩增多态性)是近年来发展起来的一种新型的DNA标记技术,作者旨在探讨SRAP技术用于玉米品种鉴定的可行性,并建立相应技术体系.采用25个引物组合对19个玉米杂交种进行了SRAP扩增.19个引物组合扩增出了多态性条带,共扩增出152条多态性条带,平均每个引物组合产生8条多态性带,多态性频率从44.4%(meA/em3)～91.7%(me4/em1).19个引物组合检测到的平均PIC为0.879,而引物组合me4/em1可区分供试的所有19个玉米品种.进一步筛选了5对引物,构建了供试材料的指纹图谱,为SRAP用于玉米鉴定奠定了基础.SRAP具有很高的分辨率,而且操作简便、稳定可靠,具备了用于作物品种鉴定的条件,用于玉米品种鉴定是可行的,可作为SSR技术的重要补充.     

华山松SRAP引物的筛选与验证

为筛选华山松SRAP遗传多样性引物,以华山松无性系种子园6个种源的30株优良无性系幼嫩无病害针叶为实验材料,基于SRAP标记技术,选用10条正向引物、10条反向引物,随机组合成100个SRAP引物组合,对华山松DNA进行PCR扩增。结果表明:实验共筛选获得15对多态性较为丰富并且具有可重复性的有效引物;15对引物共扩增出3 767条DNA条带,其中,多态性条带有2 448条,占总条带数的64.99%,平均多态性比率为64.28%。所得15对SRAP引物适合作为华山松遗传多样性分析。     

东北原生种猕猴桃种质RAPD研究

对东北原生种猕猴桃的软枣、狗枣及葛枣猕猴桃RAPD研究结果表明:3个种DNA多态性较强。聚类分析表明:不同种间遗传距离较远,软枣与狗枣猕猴桃间亲缘相对较近,此二者与葛枣猕猴桃相对较远;种内雄株与雌株之间遗传距离相对较远,这种结果可能与花型有关;软枣猕猴桃种内和种间杂交品系分为3组,第1组为软枣雌株,第2组为软枣杂交品系(软枣雌株×美味猕猴桃),第3组为软枣雄株。3种在起源上接近,狗枣与葛枣的带型比软枣更为丰富,推测此2种可能较软枣更为进化。本研究建立的指纹图谱可用于东北原生种猕猴桃的种质鉴定和亲缘关系分析。     

软枣猕猴桃雌雄株生长过程中植株形态及主要次生代谢产物变化

软枣猕猴桃是雌雄异株植株,雌株经济效益明显大于雄株。幼苗期雌雄无法辨别给软枣猕猴桃种质资源的改良和育种带来巨大的困难。为了鉴别软枣猕猴桃植株的性别,以软枣猕猴桃成龄雌雄植株为研究对象,探究其生长过程中植株外部形态及主要次生代谢产物含量动态变化差异。结果表明:软枣猕猴桃生长过程中,物侯期出现的时间整体上差异不大;叶柄长度变化趋势基本一致,但雌株的叶柄长度显著大于雄株,叶形指数在花期之后出现显著差异,即雄株显著变宽而雌株变长;雄株的花青素、总酚和类黄酮的相对含量高于雌株,而雄株和雌株的叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素的含量和变化趋势随着生长时期的不同而有所差异,多数差异出现在展叶期、花期和坐果期。     

高山红景天雌株特异性SRAP标记发掘及其关联基因功能分析

以长白山高山红景天雌株、雄株和两性株构建的不同性别植株的DNA集团混池(BSA池),利用相关序列多态性(SRAP)标记技术,发掘雌雄植株特异性SRAP标记,并通过生物信息学分析,阐明与其相关联基因的功能。结果表明:用228个SRAP引物组合在7个BSA池中所检出的1 044条SRAP条带中,仅Me03-Em02SRAP引物组合在雌株BSA池中获得1条DNA序列长度为678bp的雌株特异性Me03-Em02SRAPDNA片段;该片段属于叶绿体基因组的核骨架scaffold-ZJUL-2062946。Me03-Em02,SRAP-DNA片段作为高山红景天雌株特异性Me03-Em02SRAP标记与叶绿体基因组上光合代谢途径中的psbE基因相关联;该基因编码的蛋白为细胞色素b559蛋白的α亚基,是一种叶绿体跨膜蛋白。     

不同猕猴桃品种雌雄植株的AFLP分析

以猕猴桃(Actinidiaspp.)幼叶为材料提取基因组DNA,从64个引物组合中选取12对引物进行雌、雄集群DNA样品的扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)扩增,再从中选取4对引物进行6对雌、雄DNA样品的AFLP扩增.4对引物共扩增出74个AFLP标记,其中多态性标记为58,多态性标记百分比为78.4%.遗传相似性分析表明,同一品种雌雄样品之间的AFLP电泳图谱表现出一定的差异,但小于不同品种间的差异,而品种间的差异又小于不同种间的差异.同时AFLP多态性初步检测出猕猴桃不同性别在DNA水平上的差异.     

4个白杨新品种和父母本及近缘种的SRAP遗传分析与指纹图谱构建

【目的】对外观相近、较难区分的4个白杨新品种及其父母本和3个近缘种进行遗传分析并构建指纹图谱,为这些品种在生产应用中的分子鉴定提供技术依据。【方法】采用SRAP分子标记技术,对03-4-9、03-4-22、03-5-17和03-6-11 4个白杨新品种及I-101杨、截叶毛白杨、84K、毛白杨30号、银毛杨共9个白杨品种开展遗传分析及指纹图谱构建。【结果】14对多态性高的SRAP引物对9个白杨品种共扩增出167条条带,平均每对引物扩增条带为11.93条。其中多态性条带143条,多态性比率为85.63%,多态性高。聚类分析表明,9个白杨品种之间的遗传相似系数为0.40~0.76,其中4个白杨新品种与父本截叶毛白杨和毛白杨30号亲缘关系较近,遗传相似系数平均值分别为0.65和0.63,与母本I-101亲缘关系稍远,遗传相似系数平均值为0.49。利用重复性好的3对引物(me5/em10、me7/em2和me7/em3)扩增图谱构建了9个白杨品种的指纹图谱,每对引物均可将9个白杨品种单独区分开。【结论】9个白杨品种在SRAP位点有较高的多态性,SRAP分子标记能很好地用于杨树品种的鉴定及指纹图谱构建。     

大兴安岭地区野生黑木耳菌株SRAP的遗传多样性分析

 【目的】对大兴安岭地区野生黑木耳菌株进行遗传多样性分析。【方法】利用PCR-SRAP体系,选出9对SRAP引物对18个野生菌株和6个栽培菌株DNA进行扩增,通过NTSYSpc软件对遗传多样性进行分析。【结果】通过PCR扩增,9对引物共扩增到90条条带,其中78条多态性条带,多态性比率为87.0%。平均每条引物扩增的条带数和多态性条带数分别为10.00条和8.67条。多态性信息含量(PIC)变化在0.051—0.918,平均为0.683,所揭示的基因型数平均为15.78个。聚类分析结果表明,遗传相似系数在0.63水平上,可分为5个类群。【结论】SRAP标记技术在栽培与野生菌株间都表现出明显的遗传差异性,此技术可用于遗传多样性的分析研究。     

山桐子性别分子标记的通用性验证

采用已知性别的120份山桐子（Idesia polycarpa Maxim.）样品，检验了2个已报道UBC841和STZ分子标记在山桐子性别鉴定中的通用性。同时，分析了大量简单重复序列间区扩增多态性（ISSR）和相关序列扩增多态性（SRAP）标记在山桐子雌雄株中的多态性。结果表明，UBC841标记在24份山桐子样品中可检测到多态性条带，但未检测到雌雄性别特异性条带；STZ标记可在部分样本中扩增出目的条带，但未表现出雌雄株性别特异性；说明这2组标记均未表现出良好的通用性，雌雄性别鉴别准确率较低。此外，筛选了26条ISSR引物和780对SRAP引物组，也未能获得雌雄性别特异标记，说明采用通用型分子标记ISSR和SRAP在山桐子中较难筛选到稳定、可靠的性别特异的标记。     

基于分子标记技术的苦瓜育种材料遗传多样性快速分析

为了进一步缩短苦瓜分子标记技术的操作流程,最大限度促进其在分子标记辅助选择育种中的应用,利用一管式植物DNAout试剂盒法,从苦瓜种子中快速提取基因组DNA,采用11对SSR引物和13对SRAP引物分别对10份苦瓜材料基因组进行PCR扩增,并对苦瓜材料的遗传多样性进行分析。结果发现,建立的SSR和SRAP快速扩增反应体系可以获得清晰、数量稳定以及多态性丰富的条带,11对SSR引物共扩增出195条条带,其中多态性带164条,多态性条带比率85.7%。UPMGA聚类分析表明,10份材料的遗传相似系数介于0.533～0.845,平均值为0.690,在阈值0.69处,可将供试苦瓜分为2大类群。13对SRAP引物共扩增出231条条带,其中多样性条带201条,多态性条带比率87.5%。UPMGA聚类分析表明,遗传相似系数介于0.554～0.775,平均值0.662,在阈值0.66处可将供试苦瓜分为2大类群。综合2种分子标记技术的分类结果更具有说服力。     

基于SRAP分子标记的石斛兰种质资源遗传多样性分析

为合理利用石斛兰种质资源,用SRAP分子标记技术对48份石斛兰种质资源的遗传多样性进行分析。结果显示:筛选得到的14对石斛兰SRAP引物共扩增出159个条带,其中多态性条带数为155个,各引物的多态性比率为90.00%~100.00%,多态性信息含量为0.718~0.903,表明石斛兰SRAP的多态性信息含量较为丰富。聚类分析结果发现48个石斛兰品种间的遗传距离在0.15~0.97,在遗传距离为0.83处可将48个石斛兰品种分为7大聚类群,说明供试的石斛兰品种间具有十分丰富的遗传多样性。     

白及种质资源遗传多样性分析

【目的】采用简单重复序列间扩增(ISSR)和相关序列扩增多态性(SRAP)等2种标记技术分析不同种源白及Bletilla striata样本的遗传多样性水平和遗传关系,为白及种质的鉴定、分类、保护和开发提供理论依据。【方法】从100个ISSR引物和238对SRAP引物组合中筛选出多态性高、扩增条带清晰、重复性好的引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,用Popgene 32.0计算来自浙江、云南、贵州和四川等省32个不同种源白及的遗传多样性参数和遗传距离,用NTSYS-pc 2.10e进行聚类分析。【结果】从100个ISSR引物中筛选出11个多态性较好的引物,共扩增出188个条带,平均每个引物扩增出17.09个条带,其中多态性位点174个,占总扩增片段的92.20%;从238对SRAP引物组合中筛选出11对多态性较好的引物组合,共扩增出216个条带,平均每个引物扩增出19.64个条带,其中多态性位点202个,占总扩增片段的93.52%。综合ISSR和SRAP的标记结果发现：四川白及种源的遗传多样性水平最高,贵州最低;非加权组平均法(UPGMA聚类)和主坐标分析(PCoA分析)结果显示：聚...     

古银杏雄株的ISSR遗传多样性分析

应用ISSR分析技术对19个省市的97株古银杏雄株进行遗传多样性分析,并对它们的亲缘关系进行分析鉴定。结果表明:银杏雄株具有丰富的基因多样性和遗传多样性,选用的13个引物共扩增出114条DNA条带,其中多态性DNA条带83条,占72.8%;有效等位基因数为1.8117,基因多样度为0.4374,Shannon信息指数为0.6253;利用UPGMA法对扩增结果进行聚类分析,把97株古银杏雄株分为2大类,一类表现出较强的地理相关性,另一大类结果表明遗传距离与地理位置远近不完全相关。     

黑龙江省主栽马铃薯品种遗传多样性的SRAP分析

利用SRAP分子标记技术,对黑龙江省34份马铃薯主栽品种遗传多样性进行分析。结果显示,从45对引物中筛选出20对引物能在34份马铃薯品种间扩增出较好多态性片段,共扩增出DNA条带170条,多态性条带84条,多态性比率为49.4%,每对引物平均可扩增出4.2条多态性条带。聚类分析表明,34份马铃薯品种间相似系数为0.514~0.903,平均相似系数为0.671;供试材料可分为3大类7亚类。研究表明,黑龙江省主栽马铃薯品种的遗传相似性较高,遗传多样性程度较低。     

苦荞SRAP分子标记体系优化与遗传多样性分析

通过正交试验设计,比较苦荞序列相关多态性-聚合酶链式反应(Sequence related amplified polymorphism-polymerase chain reaction,SRAP-PCR)扩增反应体系的组合,选出最佳扩增体系用于苦荞SRAP分子标记进行遗传多样性分析。其中最佳SRAP-PCR反应扩增体系为Taq DNA聚合酶2 U、Mg2+1.5 mmol/L、DNA模板75ng、引物0.5μmol/L。从238对SRAP引物组合中筛选出20对多态性较高的引物组合,并对15个苦荞品种进行遗传多样性分析。结果表明:20对引物组合共扩增出128个位点,其多态性信息量(Polymorphism information content,PIC)值在0.66~0.95,每对引物组合扩增位点为7~13个,多态性比率平均值为81.6%,其中多态性信息量值为0.95的引物组合为me7em11、me9em4和me12em8。基于UPGMA法聚类(GS=0.78)可将15个苦荞品种划分为3大类,但这3类划分的品种没有明显的地域分布特征。     

色素腺体性状不同棉花近等基因系的遗传分析

采用SRAP标记对色素腺体性状不同棉花近等基因系进行分析。结果表明,39对SRAP引物组合对2对近等基因系材料共扩增出304条带,每对引物组合可以扩增出5.69条多态性带,多态性条带比率达到73%;共扩增出57条特异条带,特异条带比例达到18.9%。遗传相似度分析结果表明,W1与Y1遗传相似系数为0.740 3;Y2与W2的遗传相似系数为0.763 6。聚类分析结果表明,在GS为0.85处,将参试材料分为2个类群,W1与Y1的遗传相似系数比较大,归为一类;W2与Y2的亲缘关系比较近,归为另一类。研究结果可为近等基因系亲缘关系的鉴定以及为腺体基因的进一步研究提供依据。     

银杏雄株ISSR分子标记及亲缘关系分析

采用ISSR分子标记对42个银杏雄株进行亲缘关系分析。从100条引物中筛选出12条多态性引物,共扩增得到94条带,多态性条带56条,平均每个引物扩增的多态性带数为7.83条,多态性百分率为59.57%,表明银杏雄株的遗传多样性较高。用UPGMA方法进行聚类分析,在遗传相似系数为0.51水平上将42个银杏雄株分为3个类群。用EIGEN方法进行主坐标分析,建立亲缘关系的三维图。两种分类方法所获结果基本一致,雄株的亲缘关系与地区分布不完全相关,山东与江苏的部分银杏雄株试材亲缘关系较近。