原花青素和茶多酚对兔精子获能的影响

为探究原花青素和茶多酚对新西兰大白兔精子获能效果及其获能相关基因在获能前后表达差异的影响,在获能液中加入不同浓度(分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0 mg·mL~(-1))的原花青素或茶多酚,与精液悬浮培养,以孕酮诱导顶体反应,并采用实时荧光定量PCR技术检测获能相关基因——蛋白激酶A催化亚单位β(PRKACB)和酸性磷酸酶6 (ACP6)在获能前后的表达差异。结果表明:兔精子获能液中原花青素的最适添加量为1.0 mg·mL~(-1),在此浓度下精子顶体反应率显著高于其他处理,以对照组获能后相关基因ACP6和PRKACB的表达量为1,则原花青素最佳处理组ACP6和PRKACB的相对表达量分别为1.41和3.12,显著高于对照组;茶多酚的最适添加量为1.0 mg·mL~(-1),在此浓度下精子顶体反应率显著高于其他处理组,以对照组获能后相关基因ACP6和PRKACB的表达量为1,则茶多酚最佳处理组ACP6和PRKACB的相对表达量分别为1.81和1.88,显著高于对照组。综合而言,兔精子获能液中原花青素或茶多酚的适宜添加量均为1.0 mg·mL~(-1)时,在此浓度下,精子顶体反应率较高, ACP和PKA活性增强。     

藏红花素对冻融牛精子获能参数、抗氧化及抗凋亡的影响

本研究的主要目的是评估藏红花素(crocin)对冻融牛精子获能参数、抗氧化及抗凋亡的影响。试验分对照组和藏红花素处理组(浓度分别为0.5、1、1.5和2 mmol/L),样本冻融处理后分别检测了获能参数、抗氧化相关基因及抗凋亡相关基因mRNA的表达。结果显示:1)0.5 mmol/L处理组冻融牛精子质量较佳,与对照组无显著差异而与其他处理组相比差异显著;(2)0.5 mmol/L处理组冻融牛精子获能处理后蛋白磷酸化水平显著高于其他处组(P0.05);3)0.5 mmol/L处理组冻融牛精子抗氧化相关基因CAT与GPX基因mRNA的表达量显著高于其它组(P0.05);4)0.5 mmol/L处理组冻融牛精子凋亡相关基因Caspase-3,TNF-α基因mRNA表达量显著低于其他组(P0.05)。结论:牛精子冻融前藏红花素处理显著改善冻融牛精子获能参数、抗氧化及抗凋亡能力,添加量0.5 mmol/L藏红花素效果最佳。     

不同获能液对猪精子获能效果的初步观察

为了探讨不同获能液对猪精子获能效果的影响,以新鲜猪精液为材料,进行mTBM＋咖啡因、mTBM＋咖啡因＋BSA,mTBM＋肝素三种获能液获能效果的比较。利用金霉素荧光染色法对其获能效果进行检验。结果表明,mTBM＋肝素组诱发B型（获能）精子率极显著高于mTBM＋咖啡因组（P〈0.01）,显著高于mTBM＋咖啡因＋BSA组（P〈0.05）;三种获能液诱发的AR型（顶体反应）精子率差异不显著（P〉0.05）。说明,添加肝素更有助于提高猪精子获能效果。     

维生素E对陕西地区夏季新西兰兔精液品质的影响

以新西兰兔为试验对象,在其日粮中添加0,5,10,15,20 mg/d维生素E,研究维生素E对西北地区夏季新西兰兔子精液品质的影响。结果表明,在兔子日粮中添加10~15 mg/d微生素E可以有效提高精子活力、活率和精子顶体完整率(P0.05),显著提高A,B级精子百分率(P0.05);以及显著提高精子的前向性及精子曲线运动速度、直线运动速度(P0.05)。说明在兔子日粮中添加维生素E为10~15 mg/d时,可以有效提高新西兰兔精液品质。     

金雀异黄酮对冻融猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及获能相关基因表达的影响

【目的】探究金雀异黄酮对冻融猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及获能相关基因的影响,为丰富猪精子冷冻保存技术的理论基础及后续开展蛋白酪氨酸激酶抑制剂对冻融猪精子获能影响研究提供参考依据。【方法】采集猪精液后,设精液冷冻对照组(CK组)、100.0μmol/L金雀异黄酮冷冻处理组(G组)和鲜精组(F组),使用Western blotting、SDS-PAGE、免疫荧光、ELISA和实时荧光定量PCR等检测各组精子的蛋白酪氨酸磷酸化水平、精子不同部位蛋白酪氨酸磷酸化位点变化情况、蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶G(PKG)活性及黏附蛋白家族基因(AQN1、AQN3、AWN、PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ)和精子运动抑制因子(SPMI)基因mRNA的表达水平,分析金雀异黄酮对冻融猪精子的保护机制。【结果】与CK组相比,G组的32和69 kD蛋白酪氨酸磷酸化水平、顶体+顶体后区磷酸化位点、PKA活性显著降低(P0.05,下同);AWN基因相对表达量极显著升高(P0.01,下同),PSP-Ⅰ基因相对表达量显著降低,PSP-Ⅱ和SPMI基因相对表达量极显著降低。F组中未检测到32和69 kD蛋白酪氨酸磷酸化,而37和58 kD蛋白酪氨酸磷酸化水平和PKA活性显著降低;AQN1、AQN3和AWN基因相对表达量极显著升高,PSP-Ⅱ基因相对表达量显著降低,SPMI基因相对表达量极显著降低。【结论】金雀异黄酮既能降低冻融猪精子顶体+顶体后区蛋白酪氨酸磷酸化水平,且PKA活性降低可能与p32和p69蛋白表达量降低有关,又可有效提高冻融猪精子中AWN基因及有效降低PSP-Ⅰ、PSP-Ⅱ和SPMI基因的表达量,在一定程度上提高冻融猪精子质量。     

稀释液中添加L-半胱氨酸对鸡精液室温保存的影响

利用安卡红种公鸡新鲜精液,在A、B等2种稀释液稀释后分别添加不同浓度的L-半胱氨酸,测定精子活率和精子畸形率,比较不同浓度的半胱氨酸对鸡精液在常温保存下的效果。结果表明,在常温下保存,在A稀释液中添加1.0 mmol/L L-半胱氨酸的鸡精液的各项指标值均比不添加和添加5.0 mmol/L L-半胱氨酸的好(P0.05),且保存效果较为理想。在B稀释液中添加1.0、5.0 mmol/L L-半胱氨酸的精子有效存活时间极显著高于对照组(P0.01);随着L-半胱氨酸添加量的增多,生存指数值变大,且以添加5.0mmol/L L-半胱氨酸最高,但与添加1.0 mmol/L L-半胱氨酸间差异不显著(P0.05)。但是,2种稀释液中是否添加L-半胱氨酸对精子畸形率影响不大(P0.05)。     

维生素C对亚硝酸盐胁迫下匙吻鲟仔鱼非特异性免疫及抗氧化能力的影响

为初步探究水体中添加不同剂量维生素C对匙吻鲟内源营养期及混合营养期仔鱼抗亚硝酸盐胁迫能力的影响,采用生化方法测定不同条件下仔鱼溶菌酶(LZM)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性,丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力(T-AOC)在内源营养期及混合营养期的动态变化。结果显示:以卵黄为营养的内源营养期,LZM、AKP、ACP活性和T-AOC随维生素C质量浓度的增加呈现升高趋势,且90 mg/L和120 mg/L维生素C组显著高于对照组和胁迫组;以卵黄和外源饵料作营养的混合营养期,LZM、AKP、ACP活性随维生素C质量浓度的增加呈现"升高—降低"趋势。90 mg/L维生素C组LZM、AKP、ACP活性和T-AOC从内源营养期到混合营养期显著上升,上升率分别为71.8%、33.7%、48.4%和61.1%。MDA含量随维生素C质量浓度的增加而降低,且在同一取样时间下显著低于胁迫组,维生素C添加组MDA含量从内源营养期到混合营养期无显著变化。综上,在亚硝酸盐胁迫下,90 mg/L维生素C浸泡对匙吻鲟仔鱼内源营养期及混合营养期保护效果较好;亚硝酸盐胁迫可导致匙吻鲟内源营养期及混合营养期仔鱼机体的氧化损伤及抗氧化能力的不平衡,但不同质量浓度维生素C浸泡可以在一定程度上缓解亚硝酸盐胁迫的负面影响。     

孕酮诱发马鹿精子顶体反应的研究

以马鹿为试验对象,采用上浮法诱导马鹿精子体外获能,以孕酮(P4)诱导顶体反应,旨在摸索出P4诱发马鹿精子顶体反应的最适宜体系.研究结果表明:0.5～1000μmol/L的P4可提高获能马鹿精子的顶体反应率;其中,1μmol/L与10μmol/L的P4可显著(P<0.05)促进马鹿精子发生顶体反应,并以10μmol/L的P4处理组的顶体反应率最高(74.44±0.71)%.10μmol/L的P4诱导获能马鹿精子顶体反应在10～20min的处理时间内均获得了较高的顶体反应率(均72.41%以上),并以处理10min的顶体反应率最高(78.40%).P4能促进获能马鹿精子的顶体反应,但不能显著(P>0.05)促进未获能马鹿精子的顶体反应.     

不同培养体系及肝素剂量对Boer山羊精子体外获能的研究

用S ,D ,B 3种培养体系对Boer山羊精子进行体外获能 ,肝素添加剂量设 5个水平 .获能处理前先进行活精子分离 ,然后按试验之需 ,用含有肝素的培养液获能处理 ,获能后用溶血磷脂酰胆碱 (LC)诱导顶体反应 (AR) ,TG染色法测得有顶体反应的活精子作为评价精子获能的指标 .试验结果表明 ,(1)S培养液效果最好 ,4h的顶体反应率达 6 0 .88% ,与D ,B培养液的获能效果相比 ,差异极显著 (P <0 0 1) .(2 )肝素的添加剂量以 15mg·L-1和 2 0mg·L-1的效果最好 ,与其它处理组的效果相比差异显著 (P <0 0 5 ) ,但这 2个水平间的效果差异不显著 (P >0 0 5 ) .     

药物对多子小瓜虫感染的草鱼体表黏液及酶活的影响

为探究草鱼(Ctenopharyngodon idella)感染多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)体表黏液的分泌及调控机制,设计了3个预防组,分别对健康草鱼投喂添加维生素C 500 mg/kg饲料15 d,水体泼洒五倍子2 mg/L、硫酸铜1 mg/L连续预防5 d后再感染多子小瓜虫5 d;以及3个治疗组,对健康草鱼感染多子小瓜虫5 d后再分别按上述药物进行内服或外用治疗5 d。定期测定草鱼体表黏液中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)的酶活、黏液细胞密度和Muc5B基因的相对表达量。结果表明,3个预防组的草鱼黏液中的ACP、AKP酶活普遍显著上升(P<0.05),五倍子和硫酸铜组的LZM酶活显著上升(P<0.05)。除五倍子组外,其余预防组Muc5B基因表达量均显著上升(P<0.05)。维生素C治疗组的草鱼黏液ACP、AKP酶活均显著上升,硫酸铜治疗组的草鱼体表黏液中仅AKP酶活显著上升(P<0.05)。饲料中添加维生素C显著提高草鱼体表黏液中的酶活、黏液细胞密度和Muc5B基因的相对表达量,有效促...     

PTD-FNK蛋白对猪精子的冷冻保护作用及其机制

为评估PTD-FNK蛋白对猪精子冻后质量的影响,以探讨其可能的作用机制。在猪精液冷冻稀释液中添加不同浓度(0、0.1、1、10、100 nmol/L)的PTD-FNK蛋白,采用精子图像分析仪分析冻后猪精子的质量,使用流式细胞仪检测冻后精子Annexin V-FITC/PI染色后的凋亡情况,利用相对荧光定量PCR和多功能酶标仪检测不同凋亡途径中精子相关基因的表达量变化或含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)的活性和染色后线粒体mPTP开放性。结果表明,与对照组相比,10 nmol/L PTD-FNK蛋白试验组猪精子冻后活性、活率和顶体完整率均显著升高(P0.05,P0.01),凋亡率和Bax、caspase-3、caspase-9基因表达量、caspase-9蛋白酶活性、mPTP开放性均显著降低(P0.05)。说明PTD-FNK可能通过线粒体内源性凋亡途径抑制冻融猪精子的凋亡。     

重金属铬对体外培养猪精子活力及蛋白磷酸化水平的影响

为探究铬元素在猪精子体外获能培养过程中,对猪精子活力、蛋白磷酸化信号通路的影响,研究采取八头杜洛克猪新鲜精液,分别在体外获能培养液中添加不同浓度的6价铬离子(0、0.1、0.5、1、2、10、100μmol/mL)以及双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)、异丁基黄嘌呤(IBMX)、PKA抑制剂(H-89)等cAMP-PKAs信号通路调节因子进行调控培养2h。利用精子活力计算机检测(CASA)、蛋白质免疫印迹(WB)技术,分析测定猪精子体外铬暴露获能培养过程中精子活力、蛋白磷酸化水平,并用相应试剂盒检测细胞中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性、腺苷-3′,5′-环化一磷酸(cAMP)及ATP水平。结果表明:铬离子对猪精子活力、蛋白磷酸化水平有抑制作用,且随铬离子浓度增加抑制作用增强。当铬浓度达到2μmol/mL时精子活力MOT(58.4%)显著低于获能培养组(73.6%)(P0.05);10μmol/mL铬处理明显抑制蛋白磷酸化水平,且细胞内GAPDH活性、cAMP及ATP水平显著降低(P0.05)。而10μmol/mL铬处理中分别添加葡萄糖(5.0μmol/mL)及dbcAMP(1.0 mmol/L)和IBMX(0.1 mmol/L),能缓解铬对蛋白酪氨酸磷酸化(PTP)、蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸化(P-PKAs)及GAPDH活性的抑制作用。结果提示铬可能是通过干扰糖代谢及cAMP/PKA信号通路影响猪精子活力及蛋白磷酸化水平。本研究首次探究了体外培养过程中铬离子对家畜精子活力的影响,并初步探究了其作用机理,为进一步研究铬离子引起繁殖毒性的分子机制及家畜繁育提供一定的理论基础。     

茶多酚对猪精液低温保存的影响

为了寻找一种可较好保护精子的低温保护剂,改善猪精液低温保存方法,通过在改进的猪精液低温稀释液中添加0、0.50、1.00、1.50、2.00 mg/m L茶多酚,对比7 d内4℃下低温保存猪精子的活率、活力、畸形率、质膜和顶体完整性等参数,探讨茶多酚在猪精液低温保存中应用的效果。结果表明,在猪精液低温保存后7 d,仅0.50、1.00 mg/m L组5个质量指标均显著好于对照组(P0.05),其中1.00 mg/m L组效果最好。总之,在本试验条件下,适宜浓度的茶多酚可以明显改善4℃低温条件下猪精液的保存效果,其中最佳添加浓度是1.00 mg/m L。     

猪卵母细胞体外受精影响因素的研究

探讨了m TBM中咖啡因浓度、精子上浮时间和精卵孵育时间对猪卵母细胞体外受精胚胎早期发育的影响。结果表明:咖啡因的添加浓度对猪卵母细胞体外受精胚胎的囊胚率无显著影响,但添加3 mmol/L咖啡因组的精子入卵率显著高于添加5 mmol/L咖啡因组和未添加咖啡因组的(P0.05);随着精子上浮时间的延长,受精卵卵裂率和囊胚率均呈先上升后下降的趋势,上浮1.0 h组的卵裂率和囊胚率显著高于上浮1.5 h组和2.0 h组的(P0.05);精卵共孵育时间对精子入卵率无显著影响,但受精9 h处理组的囊胚率显著低于受精3 h组和6 h组的。     

添加V_(B_(12))、V_E、V_C对无角道塞特绵羊精液冷冻效果的影响

探讨在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加VB12、VE、VC对精子冷冻品质的影响。在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加不同质量浓度的VB12、VE、VC制作细管冻精,解冻后观察精子的成活率和顶体完整率等指标。结果显示,VB12添加0.003 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05)和精子顶体完整率(P0.05);VE添加2.5 g/L时,能够极显著提高解冻后的精子活率(P0.01)和顶体完整率(P0.01);VC的添加4.4 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05),但对冷冻后精子的顶体完整率无影响。在稀释液中添加VB12、VE和VC能使解冻后精子品质得到提高。VE添加后能够极显著提高冷冻精子的顶体完整率,应该优先考虑添加。     

日粮维生素E水平对肉鸡生长性能和免疫器官发育的影响

为了探讨日粮维生素E水平对肉鸡生长性能和免疫器官发育的影响,试验选取1日龄体重相近的健康AA肉鸡母鸡160羽,随机分为5组,每组4个重复,每个重复8羽。分别在玉米-豆粕型基础日粮中添加0、25、50、75和100 mg/kg维生素E,试验期为42 d。结果表明,日粮添加维生素E具有提高肉鸡生长性能的趋势,其中日粮添加50 mg/kg维生素E使22~42 d和0~42 d肉鸡平均日增重分别提高了4.23%和2.90%(P0.05);添加75 mg/kg维生素E使22~42 d和0~42 d肉鸡平均日采食量分别降低了6.75%和6.92%(P0.05),使0~21 d和0~42 d肉鸡料肉比分别降低了7.78%和7.04%(P0.05);日粮添加维生素E对3周龄肉鸡免疫器官重和免疫器官指数无显著影响;添加25和100 mg/kg维生素E提高了6周龄肉鸡胸腺重(P0.05)和胸腺指数(P0.05)。肉鸡日粮中添加维生素E具有提高肉鸡生长性能趋势,可改善肉鸡胸腺发育水平。     

猪精子获能期间蛋白质磷酸化时间依赖性的上调

通过获能猪精子酪氨酸磷酸化蛋白分离和表达,来确定精子获能的最佳状态.将猪精子悬浮于改良的Tris缓冲液(mTBM)获能培养基中,在体积分数为5% CO2孵箱37 ℃培养,以考马斯亮蓝染液染色的方法来评价精子获能状态, 经过SDS-PAGE分离后,进行Western免疫印迹分析,检测获能猪精子间酪氨酸磷酸化蛋白的分布.有27,47 ku的2种蛋白发生酪氨酸磷酸化,其中27 ku的蛋白酪氨酸磷酸化水平自精子体外培养后呈递增趋势,而 47 ku的蛋白酪氨酸磷酸化水平在精子培养1.5 h时最高,后呈递减趋势,1.5 h时获能状态最佳.     

乙酰甲喹对刺参幼参非特异性免疫、生长及抗应激能力的影响

选用初始体重为0.6 g左右的幼参,水体中分别添加0(对照组)、0.5、1.0、2.0、4.0和6.0 mg/L的乙酰甲喹。前69天每两天全部换水后,按照用药浓度泼洒药物一次。停药两周后经长途运输,考察其抗应激能力。实验结果表明:前30 d,各组刺参体壁中SOD酶活性都呈现增高趋势,2.0 mg/L组SOD活性达到最高,之后又呈现降低趋势;随着乙酰甲喹浓度的增加,各实验组刺参体壁中AKP和ACP酶活性呈现先增加后降低的趋势,2.0 mg/L和4.0mg/L组刺参酶活性最高;40 d后各实验组刺参体壁酶活性逐渐与对照组持平。所有实验组刺参的末体重、增重率和特定生长率均显著高于对照组(P0.05),4.0 mg/L组刺参末体重、增重率和特定生长率最高,显著高于其他各组(P0.05);4.0 mg/L组成活率为90.6%,显著高于其他各组(P0.05)。高浓度(6.0 mg/L)的乙酰甲喹导致幼参抗应激能力差。综合以上分析,认为刺参保苗期间,乙酰甲喹的适宜添加量为2.0~4.0 mg/L。     

日粮维生素E水平对肉鸡屠宰性能和血脂代谢的影响

为研究日粮维生素E水平对肉鸡屠宰性能和血脂代谢的影响,试验选取1日龄体重相近的健康AA肉鸡母鸡160羽,随机分为5组,每组4个重复,每个重复8羽。日粮中分别添加0、25、50、75和100 mg/kg维生素E,试验期为42 d。试验结束后,每个重复随机选2羽鸡进行屠宰和收集血清,测定肉鸡的屠宰性能和血清维生素E含量、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的含量。结果表明,日粮中添加维生素E,具有提高肉鸡屠宰性能的趋势(P0.05)。日粮中添加维生素E后,显著或极显著地提高了血清中维生素E含量(P0.05或P0.01);添加50 mg/kg维生素E使血清甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇含量分别降低了34.15%和10.00%(P0.05),添加75 mg/kg维生素E使血清总胆固醇含量降低了12.40%,高密度脂蛋白胆固醇含量提高了5.33%(P0.05)。日粮中添加不同水平的维生素E,能够不同程度地提高肉鸡屠宰性能,改善血脂代谢。     

不同抗氧化剂对马鹿精液冷冻保存效果和抗氧化指标的影响

本研究旨在分析不同抗氧化剂(海藻糖、维生素E、半胱氨酸)对马鹿精液冷冻保存效果和抗氧化指标的影响。选取健康成年伊河马鹿公鹿15头、采用电刺激采精法采集精液,分别使用含不同浓度的海藻糖(0、25、30、35、40 mg/mL)、维生素E(0、0.2、0.4、0.6、0.8 mg/mL)和半胱氨酸(0、1、2、3、4 mg/mL)的冷冻保存稀释液按1∶5比例(精液与含有抗氧化剂的稀释液之比为1∶5)稀释精液后,经过降温平衡-冷冻-解冻后,检测冻精样品中的精子活力、顶体完整率、质膜完整率以及精液中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性。结果表明,与对照组相比,海藻糖浓度为35 mg/mL,维生素E浓度为0.6 mg/mL,半胱氨酸浓度为3 mg/mL时,精液中的精子活力、质膜完整率、SOD活性显著提高(P<0.05),通过提高SOD酶活性,对精子氧化应激产生保护作用,提高马鹿精液冷冻-解冻后质量。