Marc-145细胞微载体悬浮培养及PRRSV增殖工艺的建立

采用分批式培养方法研究了Marc-145细胞微载体悬浮培养及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖工艺。结果表明,在3 g/L的微载体用量下,采用1 ml 3×105个细胞的初始接种密度及培养至第3 d进行换液操作工艺可以获得最佳的Marc-145细胞生长效能。采用感染复数为0.05的接毒比例及接毒后48 h收获毒液可获得最高的PRRSV增殖效价。在5 L反应器中重复验证上述工艺,获得较为稳定的试验结果,最大细胞密度均可高于1 ml 2×106个细胞,PRRSV的增殖效价均高于108.0TCID50/ml。为猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。     

气动生物反应器油松胚性愈伤增殖体系的建立研究

目的大量具有活性的胚性愈伤组织的增殖可为油松体细胞胚胎发生研究和植株再生提供充足的材料,锥形瓶悬浮培养体系下胚性愈伤组织的增殖率低且易酸化坏死,建立气动生物反应器油松胚性愈伤增殖体系可促进油松胚性愈伤组织的增殖。方法本研究以油松愈伤组织为材料,利用L₉（34）正交试验设计,探究了生物反应器中愈伤接种量、新旧培养基的配比和激素浓度3个因素对愈伤组织增殖的影响,建立了增殖体系。而后在相同条件下与锥形瓶悬浮培养进行对比。结果结果表明:气动生物反应器中每100 mL液体培养基内接种胚性愈伤10 g,2,4-D 0.2 mg/L,保留20%的旧培养基时能使胚性愈伤增殖率达到最高,可达216.18%;结论与锥形瓶悬浮培养体系相比,ALB系统在一周内胚性愈伤生长速度更快,为锥形瓶悬浮培养体系的3.15倍;显微观察显示增殖的胚性愈伤组织稳定且优质。该研究为基于油松体胚体系的大规模扩繁提供技术支持。      

墨兰根状茎增殖及生物反应器培养的可行性研究

[目的]探讨6-BA浓度对墨兰根状茎增殖的影响和反应器培养墨兰根状茎的可行性,为墨兰种苗生产中大量培养繁殖材料提供理论依据。[方法]以奇花墨兰组培根状茎为外植体,研究了6-BA浓度对其根状茎增殖的影响和根状茎生长动态,比较了在固体培养基和液态培养基振荡和生物反应器培养条件下根状茎增殖效果。[结果]当培养基中6-BA浓度为2.0 mg/L时,墨兰根状茎生长良好,增殖效果显著。对根状茎的增殖生长过程进行显微镜观察,结果发现接种后10 d起可见新的根状茎分化,接种后10～20 d根状茎数增加,接种后20～40 d根状茎数不再增加,但已分化的根状茎不断增大。比较不同培养方法对根状茎增殖生长的影响发现,在生物反应器中根状茎增殖效果显著好于固态培养基培养和液态培养基振荡培养。[结论]6-BA2.0 mg/L有利于墨兰根状茎增殖,利用生物反应器大量培养根状茎是墨兰种苗工业化生产中可利用的一种有效方法。     

旋转锥反应器生物热裂解工艺过程及实验

本文介绍了旋转锥反应器工作原理及旋转锥反应器生物质闪速热裂解装置的工艺流程，并以废木屑为原料进行了热解裂试验。试验结果表明，热裂解产物为生物油、不可冷凝气体和木炭。在反应器温度６００℃条件下，生物质喂入率为２６．４２ｋｇ．ｈ时，生物油得率达５３．３７％，装置正常运转时，反应器压力小于０．１２ｂａｒ，对产物成分及性能测试表明，生物油成分复杂，热值为１６５９５ｋＪ／ｋｇ。不可冷凝气体主要由ＣＯ、ＣＨ４     

eIF5A基因敲除MARC-145多克隆细胞系的建立及其对PRRSV增殖的影响

旨在利用CRISPR/Cas9系统构建敲除真核翻译起始因子5A(Eukaryotic translation initiation factor 5A,eIF5A)的MARC-145多克隆细胞系,并验证该细胞系对PRRSV感染的影响。针对eIF5A基因构建并筛选成功获得重组慢病毒,用重组慢病毒感染MARC-145细胞,嘌呤霉素及有限稀释法进行筛选,获得敲除eIF5A的MARC-145多克隆细胞系。对构建细胞系进行活力检测,T7E1核酸内切酶、Real-time PCR以及Western blot验证eIF5A体外敲除效率,病毒增殖试验验证该细胞系对PRRSV复制的影响。结果表明：1)细胞活性检测结果显示敲除eIF5A基因对细胞活性无显著影响;2)通过T7E1核酸内切酶、Real-time PCR以及Western blot表明eIF5A表达显著降低,并将此细胞系命名为MARC-145-△eIF5A细胞系;3)使用PRRSV HN07-1感染MARC-145-△eIF5A,体外试验证明敲除eIF5A对PRRSV的增殖有抑制作用。综上,本研究成功构建eIF5A基因敲除的MARC-145多克...     

植物生物反应器的研究进展

随着分子生物学的飞速发展,利用植物生产抗原、抗体、药用蛋白和糖类物质已成为现实。就有关这一领域的的发展状况、前景及存在问题进行了简要综述。     

接种密度、培养基中蔗糖和活性炭浓度对生物反应器内大花蕙兰原球茎增殖的影响

为了探明生物反应器内大花蕙兰原球茎增殖生长的影响因素,为大花蕙兰种苗生产中大量培养繁殖材料提供理论依据,以大花蕙兰茎尖诱导的原球茎为外植体,研究了接种量、蔗糖浓度、活性碳浓度对5 L气升式反应器内原球茎增殖和生长的影响。结果表明,大花蕙兰原球茎在5 L反应器内增殖时,接种量为20 g的处理原球茎鲜重显著优于10 g和30 g接种量处理;添加蔗糖30 g/L处理对大花蕙兰增殖生长有促进作用;活性炭浓度0.25 g/L处理原球茎的生长良好,高于0.25 g/L抑制原球茎的生长,增殖系数为7.5。利用5 L气升式生物反应器培养原球茎,接种量为20 g、蔗糖浓度为30 g/L、活性炭浓度为0.25 g/L时,大花蕙兰原球茎增殖较快,生长较好。     

卡琪花蒂玛茎段增殖及生物反应器培养（英文）

[目的 ]确立卡琪花蒂玛的快速繁殖体系和探讨应用生物反应器大量生产丛生芽的可行性。[方法 ]研究茎段培养中植物细胞分裂素及细胞分裂素和生长素混合液对卡琪花蒂玛芽增殖和生长的影响。为了大规模增殖丛生芽,在MS液体培养基中进行生物反应器悬浮培养。[结果 ] TDZ表现出最高的类细胞分裂素活性,当浓度为0.1 mg/L时,卡琪花蒂玛芽增殖数最多(21.5个/外植体),但无伸长效果;而zeatin对芽伸长有明显的促进作用,当浓度为5.0 mg/L时,每个外植体均获得6.8个较长的芽。在诱导培养基中混用生长素时,增殖效果不显著。通过接种10 g/L(260个)丛芽于含有2 L MS液体培养基(含有0.1 mg/L TDZ)的3 L气升式生物反应器中进行液体培养,获得了6 100个芽,鲜重为183.13 g。在MS固体培养基中进行植物体再生,之后移栽到花盆里获得了形态正常、健康的植物体。[结论 ]生物反应器技术的开发有助于卡琪花蒂玛芽的高效率增殖。     

PRRSV血清抗体间接ELISA检测方法的建立

用亲和层析纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白GST-N作为诊断抗原,建立检测PRRS血清抗体的间接ELISA方法。抗原最佳包被量为每孔400 ng,待检血清最佳稀释度为1∶100,待检血清样品的D_(490 nm)≥0．43D_(po■) 0．57D_(neg)判为阳性,反之判为阴性。对采自14个猪场的364份猪血清样品进行检测,PRRS阳性率为51．4%,略高于HerdChek ELISA的阳性检出率49．7%。与HerdChek ELISA相比,间接ELISA的敏感性为94．5%,特异性为91．3%,总符合率为92．9%,Youden指数为0．86。同时还证明该方法具有良好的批间和批内重复性,并且不与猪瘟、猪伪狂犬病等阳性血清发生反应。该方法的成功建立将为我国PRRS的防制工作作出贡献。     

膜生物反应器在工业污水处理中的膜污染及其防治研究

针对水污染问题,我国技术、经济、行政多重措施并举,取得了显著成效。在此大背景下,膜生物反应器因其高效的处理能力、便捷的操作维护和成熟的技术手段得到了长足发展。然而,膜污染问题一直是膜生物反应器使用过程中的难题,迄今造成污染的各种影响因素得到了广泛研究,强化了人们对了膜污染机制的认识,为膜污染控制策略的开发奠定了基础。     

生物反应器中金线莲丛生芽的增殖及酚和黄酮积累的研究

利用气升式生物反应器研究了反应器培养方式和培养天数对金线莲(Anoectochilus roxburghii(Wall.)Lindl.)丛生芽增殖及总酚和总黄酮含量的影响,同时对诱导子促进酚和黄酮积累的影响也进行了调查。结果表明:在反应器内球体底部搭建载桥后进行培养的方式有利于金线莲丛生芽的增殖及酚和黄酮的积累,总酚和总黄酮的生产量最多。金线莲丛生芽在生物反应器培养30d时,酚和黄酮积累最大。因此,30d为最佳的培养周期。水杨酸、茉莉酸甲酯及酵母提取物对金线莲总酚和总黄酮含量均有提高作用,采用525μM的茉莉酸甲酯处理16d的效果最佳。     

PCL生物反应器中催化合成乙酸正戊酯

为提高脂肪酶催化合成酯类化合物的效率,优化催化条件,通过物理吸附将脂肪酶Pseudom onas cepacia lipase固定在脱脂棉上,与柱形瓶或滴定管一起形成简易的生物反应器,并用于催化乙酸乙烯酯和正戊醇反应,合成乙酸正戊酯。研究了温度、底物配比、溶剂用量等因素对转酯反应的影响,以及生物反应器的稳定性、构型和使用方法。研究发现,在静置的瓶型反应器中,37和25℃条件下,催化反应24 h,反应转化率可分别达到99%和97%。在管式反应器中,室温静置反应5 h,转化率可达77%。可见,制备的固定化酶反应器可在绿色和低碳条件下有效催化合成乙酸正戊酯。     

规模养殖场的生物安全措施

生物安全措施就是以比较经济有效的疾病预防、控制手段,防止外来致病性病原微生物侵入养殖场,降低和消除养殖场内的病原微生物,确保动物健康安全的防范措施。从临海市的动物卫生监督巡查情况来看,一些规模养殖场尽管已经认识到动物疫病＂防＂应当大于＂治＂.     

动物乳腺生物反应器的研究进展

动物乳腺生物反应器(MammaryBioreactor)是一种利用动物转基因技术在乳腺细胞中表达多肽药物、工业酶、疫苗和抗体等蛋白的技术。该技术具有低投入高产出的特点,其效率是利用以大肠杆菌和动物细胞培养技术的100倍,是一种非常有潜力的高新技术。本文综述了乳腺生物反应器的优点、发展及其分类。     

荸荠组培苗在间歇浸没式生物反应器(TIBs)中的高效增殖技术

【目的】探讨间歇浸没式生物反应器(TIBs)对荸荠(Eleocharis dulcis)组培苗快速繁殖的效果,为提高荸荠组培苗繁殖效率及其工厂化生产提供技术支撑。【方法】以初代诱导培养获得的桂蹄2号荸荠组培苗为外植体,利用TIBs系统进行组培快繁,研究荸荠组培苗不同继代代数、接种密度、激素组合及反应器间歇浸没频率等因子对荸荠组培增殖的影响。【结果】经初代诱导培养的第4、5、6代继代材料增殖倍数较高,其中第6代继代苗增殖倍数最高,达31.1倍,到第7代后随继代代数的增加增殖倍数逐渐降低。当接种密度大于15丛/瓶时,外植体污染率达16.0%;当接种密度低于10丛/瓶时,外植体的污染率为0。低于10 min/6 h的间歇浸没频率有利于降低污染率,在6 h内低于15 min的浸没时间有利于降低玻璃化苗率;当激素组合为3.0 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA时,组培苗增殖倍数达38.5倍,且组培苗生长正常。【结论】在TIBs系统中,采用经初代诱导培养的第5代荸荠继代组培苗,增殖培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA+30.0 g/L蔗糖,pH 6.0,接种密度10丛/瓶,反应器间歇浸没频率为10 min/6 h,可获得较好的培养效果。     

CSFV和PRRSV二联RT-PCR检测方法的建立

参照GenBank中猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)基因保守序列,设计2对特异引物,通过对最佳反应条件的优化,建立了CSFV和PRRSV的二联RT-PCR检测方法,该方法可同时扩增得到2条与试验设计相符的443 bp(CSFV)和246 bp(PRRSV)特异性条带。应用该二联RT-PCR方法检测猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)结果均为阴性,证明该方法有良好的特异性。将已知阳性病毒PCR模板最高稀释倍数作为PCR的敏感度,结果表明该二联RT-PCR体系扩增的敏感度为10-3,可对CSFV和PRRSV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。     

水生生物增殖放流的管理

1．什么是增殖放流？答：增殖放流就是用人工方式向海洋、江河、湖泊等公共水域放流水生生物苗种或亲体的活动。     

膜生物反应器中污泥龄对膜污染的影响

试验以跨膜压差作为宏观角度,以扫描电子显微镜和原子力显微镜作为微观角度,研究了15、30、45 d污泥龄下膜生物反应器中膜污染的情况。结果显示,SRT为30 d时,跨膜压差的平均上升速率最小,并且膜表面的粗糙度Ra和Rq值最小,且污泥龄为30 d时,膜污染最轻。同时,SRT在一定程度的改变不会对膜生物反应器的出水水质产生影响。     

膜生物反应器封闭循环系统中酿酒酵母连续发酵动力学研究

研究了酿酒酵母在封闭循环膜生物反应器中的连续发酵动力学特征。结果表明,当发酵液中乙醇浓度升高时,细胞比生长率,基质比消耗速率和细胞得率系数都呈下降趋势,当细胞得率减小时产物得率倾向于增加。基于细胞生长和基质消耗的不同的线性抑制动力学模型能较好的描述实验结果。拟合数据表明当乙醇浓度超过66 g/L时,细胞生长受到完全抑制,如果超过82 g/L,细胞不再进行代谢活动消耗基质,这与硅橡胶膜生物反应器内观察到的实验现象相似。在长时间封闭循环发酵系统内,细胞最大比生长速率仅为0.022 h^-1,这可能与长期发酵过程副产物累积对细胞的抑制有关,也说明一定时间后系统达到动态平衡状态。     

PRRSV诱导猪体内肺泡巨噬细胞炎症模型的建立

[目的]建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导体内猪肺泡巨噬细胞(PAM)炎症模型,评价PRRSV感染对仔猪免疫系统的影响,为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的临床诊断及科学防控提供参考依据.[方法]以PRRSV-GXNN1396株人工感染30日龄健康断奶仔猪,复制出PRRS病症,剖杀后采集病料,通过组织病理学和RT-PCR检测观察各免疫器官组织的病理变化及其病毒分布情况,并检测PAM细胞内的COX-1、COX-2等酶活性变化及IL-6、IL-8、IL-10、IL-1β、IFN-γ、MCP-1和TNF-α等炎性细胞因子水平变化.[结果]断奶仔猪接种PRRSV-GXNN1396株后第3d开始表现出典型的PRRS病症,PRRSV主要集中在肺脏、颌下淋巴结、血液和扁桃体等样品组织中,攻毒仔猪各主要器官的实质细胞及有关淋巴细胞均出现不同程度坏死和炎症细胞浸入现象,尤其以肺脏、肾脏、脾脏等器官受损严重,出现巨噬细胞和淋巴细胞浸润.PRRSV感染早期(第3d)仔猪PAM细胞中的ROS水平及COX-2、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α等因子水平均呈升高趋势,且COX-2、IL-6、IL-8和TNF-α因子水平极显著升高(P<0.01);随着感染天数的增加,PAM细胞内的COX-2、IL-6和IL-8因子水平呈下降趋势,TNF-α因子水平呈上升趋势.[结论]成功建立了PRRSV诱导仔猪体内PAM细胞炎症模型,进一步佐证PRRSV主要侵害猪的免疫器官组织,以达到免疫抑制的效果,并推断感染第3d是病猪炎症反应的高峰期.