七种常用渔药及组合对罗非鱼致病性海豚链球菌的体外抗菌试验

探讨了7种常用抗菌渔药对罗非鱼致病性海豚链球菌的体内外抗菌作用。采用二倍稀释法测定了7种渔药对致病菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）;在初筛基础上以MIC为单位,1×MIC、5×MIC、10×MIC和20×MIC下平板抑菌圈直径为参数,分别比较所筛选5种药物抗菌效果并优化最佳参数;利用优化的最佳参数比较5种药物单独用药与联合用药对海豚链球菌的抑菌效果;并通过拌饵投喂给药方式对罗非鱼进行5种药物治疗性给药试验。结果表明,抗菌先锋对海豚链球菌的MIC和MBC最小,分别为6.4、12.8μg/mL,其次是伯乐立康,均为12.8μg/mL;而鱼康和肠炎烂鳃灵即使在1638.4μg/mL下也无抗菌效果。5倍MIC下抑菌圈直径为本试验筛选抗菌药物的最佳参数。5 MIC时,海豚链球菌对伯乐立康和抗菌先锋敏感,对菌必清、菌毒康和海鱼安中度敏感。菌毒康与海鱼安的联合抗菌效果最佳。鱼体内抗菌试验结果表明,抗菌先锋和伯乐立康的治疗有效率超过75%,达到了理想的治疗效果,是防治罗非鱼海豚链球菌病的首选药物。     

柳州地区罗非鱼无乳链球菌与海豚链球菌分离株药敏性分析

为了解柳州地区罗非鱼链球菌的耐药性情况,本研究对从柳州地区分离得到无乳链球菌和海豚链球菌分离株进行药敏试验。结果显示,无乳链球菌与海豚链球菌之间的药敏结果有较大差异,而同一种细菌的不同菌株对药物的敏感性却较为一致。总体来说,两种菌对青霉素、头孢类药物均具有很高的敏感性,对喹诺酮类药物敏感性不高;无乳链球菌对多粘菌素B、复方新诺明、卡那霉素、磺胺异噁唑4种药物完全耐药,但海豚链球菌却对这些药物呈现不同程度的敏感性。     

10种复方中草药对鲟源海豚链球菌的体外抑菌效果研究

为筛选对鲟源海豚链球菌(Streptococcus iniae)有较好抑菌作用的复方中草药。采用牛津杯对九味羌活汤、桑菊饮等10种具有抑菌效果的复方中草药进行海豚链球菌体外抑菌试验,并通过二倍稀释法测定了10种复方中草药对海豚链球菌的最小抑菌质量浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC)。结果表明:鲟源海豚链球对九味羌活汤和桑菊饮高度敏感,抑菌圈直径分别为(24.08±3.92)、(23.92±2.34) mm,其MIC值均为62.5 mg/ml,MBC值均为125 mg/ml。鲟源海豚链球菌对养阴清肺汤、八正散、五苓散和大青龙汤4种复方中草药中度敏感,而对槐花散、藿香正气散、麻黄杏仁甘草石膏汤和痰饮丸4种复方中草药低度敏感。九味羌活汤和桑菊饮对鲟源海豚链球菌具有较好的抑菌、杀菌效果。     

饲料中添加几丁聚糖对吉富罗非鱼幼鱼生长性能、免疫调控与抗海豚链球菌感染的影响

本试验旨在探讨饲料中添加几丁聚糖对吉富罗非鱼幼鱼生长性能、免疫调控与抗海豚链球菌感染的影响。选择健康、均重为(2.97±0.02)g的吉富罗非鱼375尾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复25尾鱼。5组试验鱼分别饲喂在基础饲料中添加0(对照)、10、20、30和40 m L/kg几丁聚糖溶液(几丁聚糖的有效浓度为0.6%)的试验饲料。饲喂63 d后,测定各组试验鱼的生长性能指标、血常规指标、血清生化指标、头肾免疫相关基因的表达量以及海豚链球菌感染192 h后的累计死亡率。结果表明:与对照组相比,饲料中添加几丁聚糖对吉富罗非鱼幼鱼的特定生长率、存活率及血清总蛋白与甘油三酯含量无显著影响(P0.05),但是添加量为10和20 m L/kg时可显著降低肝体比和血清皮质醇含量,提高血液红细胞数目、白细胞数目和血红蛋白浓度、红细胞压积以及血清溶菌酶和超氧化物歧化酶活力,促进头肾白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α和干扰素基因的表达(P0.05);同时,添加量为20 m L/kg时还可显著增加饲料效率,降低血清葡萄糖、胆固醇与低密度脂蛋白胆固醇含量,提高高密度脂蛋白胆固醇含量(P0.05)。海豚链球菌感染192 h后,10和20 m L/kg添加组的累计死亡率分别为30.06%和32.38%,显著低于对照组的51.19%与40 m L/kg添加组的77.55%(P0.05)。由此得出,饲料中添加10和20 m L/kg几丁聚糖溶液有助于降低吉富罗非鱼幼鱼的肝体比与肝脏应激,提高非特异性免疫功能。同时,20 m L/kg添加量可以有效地促进饲料利用,降低血清脂肪沉积。在实际生产中,建议在吉富罗非鱼饲料中添加10~20 m L/kg的几丁聚糖溶液(几丁聚糖的有效浓度为0.6%),以促进吉富罗非鱼健康养殖。     

罗非鱼链球菌双重荧光PCR方法的建立及临床应用

为构建一种无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和海豚链球菌(Streptococcus iniae)的双重荧光PCR检测方法,根据筛选的海豚链球菌LysR基因和无乳链球菌Sip基因设计特异性引物和探针,优化反应浓度和退火温度,建立标准曲线,分析方法的敏感性、特异性和重复性,最后进行方法的初步应用。结果显示：当无乳链球菌引物和探针浓度分别为0.20和0.16μmol/L,海豚链球菌引物和探针浓度分别为0.20和0.32μmol/L,且退火温度为53℃时,建立的双重荧光PCR方法荧光曲线标准,线性关系线良好,有较高的扩增反应效率;无乳链球菌和海豚链球菌最低检测限分别为29.6和10.7 CFU/mL,与猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)和其他8种常见的水生动物疫病病原体无交叉反应,重复变异系数均小于2%;临床样品及人工污染样品检测结果与细菌分离鉴定方法符合率为100%。结果表明,本研究建立的罗非鱼链球菌双重荧光PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时对无乳链球菌和海豚链球菌进行检测,为罗非鱼链球菌病的临床诊断和研究...     

广西罗非鱼主养区致病性链球菌及其耐药性调查

为了解致病性无乳链球菌在广西罗非鱼主养区的分布及其耐药性情况,对广西各地区发病罗非鱼进行现场采样,以常规方法从患病罗非鱼的脑、心脏和肝脏等组织分离细菌,人工回归感染试验确定分离菌株的致病性,以API 20 Strep和16S rRNA分别对菌株进行生化鉴定和分子鉴定,K-B药敏纸片扩散法检测菌株的耐药性。调查结果,从广西8个市12个县/区采集的672个罗非鱼病样中,有30个病样共检出致病性强的革兰氏阳性球菌30株,参考株总检出率4.46%,百色市和来宾市的病样中未分离到革兰氏阳性球菌;经鉴定,分离到的30株球菌均为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae),与无乳链球菌(S.agalactiae)参考株JF423947、JQ039375、KF111315和JQ99015616SrRNA核苷酸的同源性最高(98.5%~100%);28种药物的药敏试验结果显示,对所有菌株敏感的药物只有盐酸沙拉沙星1种,对所有菌株耐药的药物有磺胺-6-甲氧嘧啶(钠)、磺胺对甲氧嘧啶和复方磺胺嘧啶3种。     

61种中草药对猪致病性链球菌的体外抑菌试验

无菌采集发病猪的肺脏、淋巴结、血液、关节积液和皮下脓肿物等病料，对其进行细菌分离鉴定，并对分离出的细菌进行致病性试验以确认致病性链球菌，将61种单味中草药分别经水煮处理后制成浓度为1g／mL的受试溶液，对致病性链球菌进行体外抑菌试验。结果发现：不同中草药对致病性链球菌具有不同的抑菌作用。     

61种中草药对猪致病性链球菌的体外抑菌试验

无菌采集发病猪的肺脏、淋巴结、血液、关节积液和皮下脓肿物等病料,对其进行细菌分离鉴定,并对分离出的细菌进行致病性试验以确认致病性链球菌,将61种单味中草药分别经水煮处理后制成浓度为1g/mL的受试溶液,对致病性链球菌进行体外抑菌试验.结果发现:不同中草药对致病性链球菌具有不同的抑菌作用.     

罗非鱼源无乳链球菌的分离鉴定及药敏试验

从广东省佛山市2个水产养殖场患病罗非鱼中分离到2株细菌,分别编号为T4SH和G6C,经形态学、培养特性观察、生化鉴定和16S rDNA基因序列分析证实为无乳链球菌。2株分离菌株均为革兰阳性菌,呈β溶血;16S rDNA基因序列与无乳链球菌同源性达99%以上。2株菌均对青霉素类、头孢类、林可胺类、大环内酯类、四环素类、氯霉素类抗生素敏感,对氨基糖苷类不敏感;而对磺胺类、喹诺酮类的敏感性存在差异。     

10种中草药对金黄色葡萄球菌的体外抗菌试验

采用试管法和平板法,分别测定了10种中草药对临床分离的一株鸡关节炎源性金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),从而为临床预防和治疗鸡金黄色葡萄球菌性关节炎提供理论依据。结果发现,10种单味中草药对临床分离的球菌均有一定的抗菌活性,尤其是黄连、大青叶、艾叶、连翘4 种中草药的体外抗菌效果更明显。     

暹罗鳄外周血白细胞提取物抗海豚链球菌感染的效果

通过细胞破碎和沉淀的方法从暹罗鳄(Crocodylus siamensis)外周血白细胞中获得提取物,并将此提取物以3种不同的方式注射小鼠,测定其在小鼠体内抗御海豚链球菌感染的效果。实验结果表明,若用海豚链球菌以腹腔注射感染小鼠,小鼠表现出明显病理症状,然后用不同浓度(2.2×103、2.2×102、2.2×101μg/ml)的提取物以腹腔注射小鼠,可使小鼠分别获得77.8％、55.6％、44.4％的相对保护率;若将海豚链球菌与不同浓度(2.2×103、2.2×102、2.2×101μg/ml)的提取物在体外等体积混合,然后将混合物以腹腔注射小鼠,可使小鼠分别获得55.6％、88.9％、77.8％的相对保护率;若将海豚链球菌以肌肉注射小鼠左腿,同时以不同浓度(2.2×103、2.2×102、2.2×101μg/ml)的提取物以肌肉注射小鼠右腿,可使小鼠分别获得77.8％、66.7％、44.4％的相对保护率。本实验的结论是：暹罗鳄外周血白细胞内存在一种或数种高效的抗菌物质,在小鼠体内能有效的防御由某些细菌导致的感染。     

广西罗非鱼链球菌病病原的生化鉴定及药敏试验

从来自南宁、北海等地的十几个暴发疾病的罗非鱼养殖场发病罗非鱼中,分离得到了8株链球菌。通过生化鉴定及药敏试验,结果表明,分离到的8株致病性链球菌,有6株为海豚链球菌（streptococcus iniae）,2株为无乳链球菌（streptococcus agalactiae）。     

海南罗非鱼源无乳链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

为探究目前海南地区罗非鱼无乳链球菌病的流行性,了解该地区无乳链球菌耐药情况,本研究2020年8月从海南地区部分渔业养殖场的病鱼中共分离获得15株无乳链球菌,对各分离菌株的血清型、主要毒力基因及耐药性进行检测,并对多重耐药情况进行分析。血清型检测结果显示,15株分离菌株的血清型与对照菌株A909一致,均为Ⅰa型。毒力基因检测结果显示,15株分离菌株均未检出毒力基因scpB,但该毒力基因在参考菌株人源无乳链球菌2603V/R中检出,而主要毒力基因cylE、sodA、gapC的检出率均为100%。药敏试验结果表明,15株分离菌株对甲氧胺嘧啶、磺胺异噁唑、复方新诺明、链霉素、新霉素、庆大霉素的耐药率达85%以上;对头孢克洛、头孢曲松、头孢哌酮、头孢拉定、卡那霉素、红霉素、利福平、克林霉素敏感性达80%以上;未发现对甲氧胺嘧啶、氟罗沙星、链霉素、新霉素、庆大霉素敏感的菌株。多重耐药检测结果表明,15株分离菌株均至少对4种药物表现耐药,其中6重及以上耐药的菌株占总分离菌株数的86.67%,并有2株为13重耐药菌株。本研究为海南地区鱼源无乳链球菌病的用药提供参考,为华南地区罗非鱼无乳链球菌的流行病学和疾病防控提供调查依据。     

广西罗非鱼无乳链球菌的分离鉴定、毒力基因及耐药性研究

本研究旨在明确中国罗非鱼主养区广西各地罗非鱼无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）分离株的血清型分布、毒力基因携带情况和耐药情况,为罗非鱼无乳链球菌病的防控奠定基础。2018-2019年从广西柳州、钦州、南宁、北海等地患无乳链球菌病罗非鱼体内分离了47株无乳链球菌,并对各分离株的血清型、毒力基因分布和耐药情况进行检测和分析。血清型检测结果表明,47株无乳链球菌血清型高度一致,均为Ⅰa血清型。对4种毒力基因检测结果表明,47株无乳链球菌临床分离株cylE、sodA、gapC毒力基因的检出率均为100%,而scpB基因仅在人源参考菌株2603V/R中检出,在所有鱼源分离株中未检出。对11类（31种）常见抗生素的药敏试验结果表明,临床分离株对磺胺异噁唑、新霉素、庆大霉素、卡那霉素的耐药率达到90%以上,对氧氟沙星、左氧氟沙星、氨苄青霉素、阿莫西林、头孢克洛、头孢曲松、头孢哌酮、头孢拉定、土霉素、强力霉素的敏感性均为100%。多重耐药检测结果表明,5重以上耐药菌株占93.62%,其中9重以上耐药菌株为19.15%,且均分离自柳州地区。结果表明,广西地区罗非鱼源无乳链球菌血清型单一,均为Ⅰa血清型,且均携带多种毒力基因,多重耐药现象严重。     

罗非鱼无乳链球菌生物学特性与致病力研究

本试验分离纯化1株致使罗非鱼具有链球菌发病症状的病原菌,药敏试验结果表明,该菌对氯霉素等10种药物敏感。PCR扩增该菌的cfb基因,将扩增片段测序后与GenBank上登录的罗非鱼无乳链球菌的cfb基因序列进行比对。同时对该病原菌的生物学特性进行研究,包括培养时间和pH对该菌生长的影响;培养温度对其致病力的影响;探讨了不同攻毒方式(腹腔、胸腔和背部肌肉注射)与鱼发病快慢的关系;并对不同规格(100和10 g左右)的罗非鱼对该菌的易感性进行分析。试验结果表明,该病原菌为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae);该菌的最适培养时间为11.5 h,最适培养pH为7.5;腹腔、胸腔和背部肌肉注射后,其发病时间几乎一致,但胸腔注射的试验鱼死亡速度最慢,背部肌肉注射是较安全可行的攻毒方式;33℃培养的无乳链球菌攻毒的罗非鱼发病最快,死亡最集中;100 g的试验鱼比10 g的试验鱼更易感染。     

大蒜挥发油对猪鸡四种常见致病菌的抗菌效果

本试验旨在研究大蒜挥发油(GO)能否作为安全优质的饲料添加剂广泛应用于畜禽养殖生产.采用试管倍比稀释法研究本实验室开发的2种精制大蒜挥发油制剂(G0-Ⅰ和GO-Ⅱ),以及市售天然大蒜油、合成大蒜油对养殖生产中常见的致病性鸡大肠杆菌、鸡沙门氏菌、猪大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的体外抗菌效果.结果发现:2种制剂对供试菌都有较好抑菌作用且效果均优于天然大蒜油和合成大蒜油;精制大蒜挥发油GO-Ⅱ(含二烯丙基二硫化物(DADS)比例高)对猪大肠杆菌和鸡大肠杆菌最低抑菌浓度(MIC)为62.5 μg/mL,对鸡沙门氏菌和金黄色葡萄球菌MIC为31.3μg/mL;GO-Ⅰ对鸡沙门氏菌和金黄色葡萄球菌MIC与GO-Ⅱ相同.本研究提示GO制剂中有效成分DADS与二烯丙基三硫化物(DATS)的比例不同抗菌效果不同.     

福建省漳州市罗非鱼无乳链球菌分离鉴定及毒力基因和耐药性研究

【目的】 明确福建漳州地区罗非鱼无乳链球菌临床分离株的血清型、毒力基因携带情况与耐药特性,为鱼源无乳链球菌研究提供新的数据。【方法】 于福建省漳州市部分罗非鱼养殖场采集疑似无乳链球菌感染的病鱼样品,通过分离培养、形态观察及生化试验初步分离鉴定病原菌。经由16S rDNA特异性片段引物、16S rDNA通用引物进行PCR鉴定及测序比对鉴定分离株。用PCR方法检测分离株血清型及4个主要毒力基因（cylE、sodA、gapC和scpB基因）分布情况。通过纸片扩散法对分离菌株进行11大类共29种抗菌药物的药敏试验,并进行多重耐药分析。【结果】 分离株菌落呈白色圆形、边缘整齐、表面光滑湿润,呈β溶血;革兰染色阳性,菌体排列为长短不一的链状,单个或成对存在;VP试验、CAMP均为阳性,触酶试验阴性,能发酵海藻糖,均符合无乳链球菌的典型特征,经鉴定共分离获得14株鱼源无乳链球菌。14株分离菌株的血清型均为Ⅰa型。分离株毒力基因cylE、sodA、gapC的检出率均为100%,而毒力基因scpB均未检出。分离菌株对磺胺异噁唑、庆大霉素、卡那霉素耐药率均为100%,对链霉素、新霉素、甲氧胺嘧啶耐药率均>70%。分离株均为多重耐药菌株,6重及以上耐药的菌株占总分离菌株数的78.57%。【结论】 本研究明确了当前福建漳州地区罗非鱼源无乳链球菌的血清型、毒力基因和耐药特性,为进一步研究鱼源无乳链球菌的致病机理和临床有效防控措施提供参考。     

广西不同年龄猪群中2型猪链球菌抗体水平调查分析

为调查规模化猪场不同年龄猪群中2型猪链球菌(S.suis 2)抗体水平,本研究采用以荚膜多糖为抗原的间接ELISA对来自广西地区母猪群、肥猪群、生长猪群共1 908份血清样品进行了S.suis 2抗体检测和分析。结果显示:成年猪群中抗S.suis 2的抗体水平普遍较高,种猪场母猪血清抗体阳性率可高达95%以上,不同地区屠宰场的育肥猪血清抗体阳性率在39.2%~97.5%。对不同日龄仔猪群抗体水平检测分析显示:14日龄~42日龄期间,抗体水平随仔猪日龄的增长而呈逐渐下降的趋势;而42日龄~130日龄期间,抗体水平随日龄的增长而呈逐渐上升的趋势。此外,经产母猪群抗体水平略高于后备母猪群,并且随胎次的增加,抗体的离散度缩小。以上结果表明S.suis 2抗体在仔猪生长阶段的空白期即42日龄时,仔猪群抗体水平最低。因此,在这个阶段和之前做好S.suis的预防和免疫工作对猪群链球菌病的防控至关重要。