PRRSV弱毒细胞疫苗与灭活疫苗生殖道黏膜免疫效果观察

应用组织学方法比较观察了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒细胞疫苗与灭活疫苗生殖道黏膜免疫的效果。试验选用5月龄长白×大约克夏二元杂交母猪18头。PRRSV弱毒细胞疫苗和灭活疫苗通过生殖道黏膜免疫接种。结果表明PRRSV弱毒细胞疫苗生殖道黏膜接种组母猪的子宫黏膜上皮内淋巴细胞数较灭活疫苗生殖道黏膜免疫接种组和对照组母猪显著减少(P<0.01);而且子宫黏膜上皮变矮变薄,变得有些不规则。灭活疫苗生殖道黏膜接种组母猪子宫黏膜上皮内淋巴细胞数与对照组母猪间差异不显著(P>0.05)。本试验结果显示PRRSV弱毒细胞疫苗经生殖道黏膜免疫接种则对生殖道黏膜上皮内淋巴细胞产生抑制作用。说明PRRSV弱毒细胞疫苗和灭活疫苗经生殖道黏膜免疫效果不理想     

禽脑脊髓炎病毒的分离与疫苗研制

禽脑脊髓炎病毒的分离与疫苗研制卢中华张红英于晓军杨霞（河南农业大学，郑州４５０００２）王之岑（淮阳师范学校）张保亮（许昌县畜牧兽医技术中心）禽脑脊髓炎（ＡｖｉａｎＥｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓＡＥ）是一种主要侵害雏鸡的病毒性传染病。１９３０年首次...     

PRRSV的分离与鉴定

从猪场疑似猪繁殖和呼吸综合症的病死仔猪肺脏和脾脏中分离到一株致Marc-145细胞病变的病毒,RT-PCR检测确诊为猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV),按Reed-muench法计算TCID50结果显示该分离病毒株在Marc-145细胞上的增殖毒价为106.75TCID50/ml。     

PRRSV新疆分离株的ORF5序列分析与同源性比较

采用RT-PCR技术,分别对PRRSV新疆分离株XJ-a,XJ-b,XJ-c的ORF5片段的ORF5基因进行扩增,获得长度为603 bp的特异性目片段.ORF5片段序列分析表明,新疆3个分离株的ORF5基因与欧洲型PRRSV毒株序列核苷酸的同源性为56.1%～56.4%,与标准美洲型PRRSV毒株序列的核苷酸同源性达到86.6%～87.2%,与国内部分省市流行株的同源性在96.0%～99.2%.PRRSV新疆分离株属于北美洲型PRRSV的变异毒株,属同一亚型,毒株间也存在一定的差异,具有高度致病性的生物学特征.     

鸽新城疫病毒的分离鉴定及灭活油乳化疫苗的研制

通过对上海及周边地区鸽新城疫的流行病学调查、临床症状、病毒分离、病毒回归鸽试验及血清学试验，证实了鸽新城疫的广泛流行。利用分离的鸽新城疫毒株研制了鸽新城疫灭活油乳化疫苗，疫苗安全、免疫效果良好，第5周达到抗体高峰7．8log2，免疫持续期较长，能有效地抵御当前流行株强毒的攻击。     

鸡新城疫病毒感染不同细胞的病变特性研究

为了探讨鸡新城疫病毒(Newscastle disease virus,NDV)感染不同细胞的病变特性,选用NDV强、弱毒株感染鸡胚成纤维细胞(DF-1)、仓鼠肾细胞(BHK-21)和人宫颈癌细胞(HeLa).结果表明:NDV强毒株在DF-1、BHK-21、HeLa上均能增殖,在DF-1、BHK-21、HeLa上产生的细胞病变(cytopathic effect,CPE)以发生细胞融合和形成合胞体为主要特征,在DF-1上增殖速度较快,HA效价也高;NDV弱毒株含10μg/mL胰蛋白酶的DMEM培养基上,DF-1、BHK-21、HeLa可引起细胞变圆、脱落,没有典型的CPE,盲传15代CPE特征未发生改变,血球凝集(HA)效价较低.可见,NDV在其种属来源相同的DF-1中更适宜增殖,DF-1可用作NDV感染的最佳细胞模型.     

山羊痘病毒培养及其细胞病变观察研究

[目的]研究不同处理的细胞对病毒生长的影响。[方法]制备原代绵羊睾丸细胞,并用原代、传代和冻存3种处理的睾丸细胞对我国山羊痘病毒疫苗株分别进行培养,并用倒置显微镜和电子显微镜观察。[结果]病毒在3种处理的细胞上生长出现细胞病变的时间略有差异,并且细胞病变也不尽相同。[结论]不同处理的细胞出现的细胞病变不同。     

猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒的分离与初步鉴定

从患败血症仔猪的肺脏、淋巴结组织中分离到1株猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV);流行特征表现为仔猪出现严重的呼吸道症状;该病毒能在Marc-145细胞上生长,但不能在Vero、BHK21、RK等细胞上增殖;分离毒适应Marc-145细胞后,产生以皱缩、脱落、崩解为特征的细胞病变,分离毒Marc-145第4代的TCID50为10-6.725*0.1ml-1;ELISA抗体检测表明,病猪和分离毒接种仔猪体内含有PRRSV IgG、IgM抗体.     

黑龙江省某猪场猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定

猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)是养猪业常见的猪腹泻病毒,对仔猪具有高死亡率.将黑龙江地区某猪场腹泻样本鉴定为TGEV阳性后,无菌接种于猪肾细胞(PK-15)连续传代培养成功获得一株TGEV分离株,通过CPE观察、RT-PCR鉴定、间接免疫荧光试验以...     

PRRSV青海株与其他疫苗株对Marc-145细胞的毒力比较

[目的]研究青海PRRSV毒株对Marc-145细胞的适应性和增殖速率以及致病性和毒力等.[方法]以PRRSV青海毒株QH08、海利和诺倍威CH-1R经典毒株、GW-HR毒株及其在Marc-145细胞上的传代毒株为研究对象,对4种毒株及其传代毒株的TCID50值和细胞病变作用(CPE)出现的时间进行比较,探讨了PRRSV青海毒株对Marc-145细胞的适应性、在Marc-145细胞内的增殖速率以及该毒株的毒力.[结果]随着PRRSV传代次数的增加,病毒在Marc-145细胞中的增殖速率加快,对细胞的适应性和毒力都增强.与其他3个毒株相比,青海株毒力最强;C PE出现的时间提前,说明病毒在Marc-145细胞中的复制周期缩短,表明不同毒株PRRSV的F10比F1在Marc-145细胞中具备更好的复制能力和致病性.[结论]4株PRRSV传代毒10个代次的TCID50总趋势为渐变上调的趋势,CPE出现的时间总体上呈逐渐缩短的趋势.     

蚕豆萎蔫病毒两个分离物的比较研究

作对蚕豆萎蔫病毒的两个分离物Ｂ９３５和Ｐ１５８的部分特征作了比较研究，从病毒粒子形态、血清学关系，病毒衣壳蛋白组分和分子量以及病毒且分和分子量这些特征看，Ｂ９３５和Ｐ１５８葳相似，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，Ｂ９３５和Ｐ１５８基因组具有同源性，但其同源性不高，这意味着蚕豆萎蔫病毒种内基因组上可能存在着较大的差异。     

犬瘟热病毒的分离

对流行病学调查、临床症状检查和血清学（ELISA）检测为阳性的自然发病犬,取肠内容物为病料,采用同步培养方法分别接种于非洲绿猴肾细胞系（Vero）、犬肾细胞系（MDCK）进行病毒的分离.用多聚酶链式反应（RT-PCR）检测感染细胞中的病毒核酸.结果表明,病料接种Vero细胞、MDCK细胞均产生明显的细胞病变（CPE）;用RT-PCR 技术检测病毒感染的细胞培养液,扩增出特异性的产物带,扩增出的片段大小分子长为760bp,与预期设计的长度相同.用Vero细胞同步培养从肠内容物中分离出的病毒命名为犬瘟热病毒GZ1株;用MDCK细胞同步培养从另一只犬的肠内容物中分离出的病毒命名为犬瘟热病毒GZ2株.     

番鸭细小病毒弱毒疫苗的研究

应用生物技术从番鸭细小病毒菁田株（ＭｕｓｏｖｙＤｕｌｋｉｌｉｎｇＰａｒｖｏｖｉｒｕｓ，ＭＰＶ－Ｐ）选育出对１日龄雏番鸭无致病力的弱毒疫苗株（ＭＰＶ－Ｐ１）。该弱毒株具有良好的兔原性和遗传稳定性；制备成疫苗，免疫注射１日龄雏番鸭，免疫后３ｄ部分鸭血清中出现抗体，７ｄ９８％以上的鸭血清中出现抗体；２１－３０ｄ抗体效价达高峰，有效免疫期在１９０ｄ以上；注苗后７ｄ攻毒，保护率１００％；当ＬＰＡＩ滴度在ｌｏ     

TAD—3鸡传染性法氏囊病弱毒细胞疫苗的研究

将ＴＡＤ鸡传染性法氏囊病鸡胚弱毒疫苗适应于鸡胚成纤维细胞制成ＴＡＤ－３弱毒细胞疫苗，其毒价稳定在１０＾７．５ＴＣＩＤ５０／ｍＬ以上；２８日龄雏鸡免疫接种后１４ｄ体琼扩阳性率为１００％，雏鸡接种１０＾５Ｔ ＣＩＤ５０证明安全，现场使用效果理想。但不宜以大剂量的ＴＡＤ－３和新城疫疫苗同时口服免疫接种，以免干扰新城疫的免疫效果。     

一株牛流行热病毒的分离与鉴定

牛流行热病毒(BFFV)是引发世界范围内牛流行热最主要病原之一,给奶牛业的发展造成严重危害。本研究通过RT-PCR对疑似牛流行热奶牛抗凝血样品进行检测,选取阳性样品颅内接种3日龄乳鼠,7日后乳鼠死亡,鼠脑组织通过PCR扩增出BFFV目的条带,乳鼠颅内重复接种3次,乳鼠发病死亡时间明显提前。选取阳性脑组织接种BHK-21细胞,盲传3代后出现明显细胞病变,特异性引物扩增获得目的条带,测序结果与牛流行热病毒序列一致,表明成功分离到一株牛流行热病毒。     

常用分离培养肾细胞方法的比较

[目的]采用常用的分离培养肾细胞方法比较分离培养肾细胞,并提出优化方案。[方法]A法:组织块培养法;B法:1%胶原酶消化分离法;C法:5%胰蛋白酶消化法;D法:0.5%胰蛋白酶-0.02%EDTA连续分离法。[结果]A法初期细胞生长不好,1周后生长良好;B法、C法细胞贴壁状况较好,但细胞生长不均一,呈丘陵状生长,细胞产量较少;采用D法消化肾组织块,能够快速获得大量细胞,并且细胞生长整齐、均一,能够满足后续实验的需要。[结论]使用D法分离培养肾细胞优于其他3种方法,试验效果最佳。     

TAD－3鸡传染性法氏囊病弱毒细胞疫苗的研究

将ＴＡＤ鸡传染性法氏囊病鸡胚弱毒疫苗适应于鸡胚成纤维细胞制成ＴＡＤ－３弱毒细胞疫苗，其毒价稳定在１０７·５ＴＣＩＤ５０／ｍＬ以上；２８日龄雏鸡免疫接种后１４ｄ抗体琼扩（ＡＧＰ）阳性率为１００％，雏鸡接种１０５ＴＣＩＤ５０证明安全，现场使用效果理想。但不宜以大剂量的ＴＡＤ－３（≥３×１０４ＴＣＩＤ５０）和新城疫疫苗同时。服免疫接种，以免干扰新城疫的免疫效果。     

蚕蛹蛋白与大豆分离蛋白酶解比较研究

利用木瓜蛋白酶、胃蛋白酶及中性蛋白酶水解蚕蛹蛋白及大豆分离蛋白,结果表明不同酶水解得到的水解液其氨基酸含量和构成有较大差别,对中性蛋白酶而言蚕蛹蛋白较大豆分离蛋白更易水解,适宜温度为５０℃,底物浓度为２０％￣３０％,且分次加酶比一次加酶效果更佳。     

闵行地区PRRSV的分离鉴定及N基因序列分析

采集闵行地区规模猪场疑似PRRS阳性病料,在Marc-145细胞上进行病毒分离,采用RT-PCR扩增PRRSV高度保守的N基因并测序。结果表明,成功分离到6株PRRSV,为研究闵行地区PRRSV流行株分子变异和致病机理提供了良好的生物素材。