水禽禽流感HI抗体检测方法的探讨

采用不同方法对78份白鸭免疫血清进行H5亚型禽流感血凝抑制试验(HI试验)。试验共分6个组:血清经20%的同源禽种红细胞或鸡红细胞进行吸附处理、或不经吸附处理,再用1%的同源禽种红细胞或鸡红细胞作为指示细胞进行试验。结果表明:进行鸭禽流感HI抗体检测时,可采用1%同源禽种红细胞悬液作指示细胞进行测定,并将结果降低1log2后作为测定结果。此方法可以有效排除血清中非特异性凝集因子对监测结果的影响,提高准确性。     

水禽禽流感HI抗体检测方法的探讨

2003年国家质量监督检验检疫总局出台了<高致病性禽流感诊断技术>(GB/T18936-2003)[1],标准中要求采用鸡红细胞作为血凝与血凝抑制试验的指示细胞监测禽流感抗体,这对于免疫鸡血清中的相应抗体水平监测比较合理[2-4],但对鸭、鹅及其他免疫禽类进行HI抗体水平监测时,常出现非特异性凝集现象[2-3],对检测结果的判定影响较大.有鉴于此,本试验拟对禽流感疫苗免疫后的水禽血清HI抗体检测方法进行探讨,研究适合免疫水禽禽流感HI抗体检测的方法.     

如何提高禽流感抗体HI试验的准确性

高致病性禽流感是国际兽医局（ＯＩＥ）规定的Ａ类动物传染病，也是各国兽医当局检疫的最主要禽病。自１９９７年香港发生禽流感并引发人类感染被报道后，禽流感就成为我国兽医部门检疫的主要禽病之一。微量血凝抑制（ＨＩ）试验由于特异性好、能进行大量样品分析、节省试剂、易于操作等优点，在流感病毒亚型鉴定和抗体检测等方面已广泛应用。但是由于操作不规范、技术不正确而严重影响试验结果的准确性，制约了在基层的普及推广。笔者根据实践的经验，提出下列看法，与大家共同商讨。１ 仪器的选择和使用 微量反应板、单道和多道微量移液器…     

免疫禽流感疫苗HI抗体的试验研究

对30日龄雏鸡肌注郑州中牧股份生产的禽流感疫苗每只0.5ml,分别于免疫后第3、6、9、12周进行血清学HI检测,3周后H5亚型HI、H9亚型HI抗体均达到6Log2以上,其效价12周时已处于免疫保护临界值状态,60日龄雏鸡免疫疫苗后,其H5、H9HI抗体效价较30日龄雏鸡上升幅度快;对另一批雏鸡分别于30、120日龄免疫两次后第1、2、3、4、5月进行HI检测,抗体较首免产生水平高,1月后抗体可达到8Log2以上,5个月后抗体还达5Log2以上。     

两种禽流感H5N1亚型Re-5株灭活疫苗免疫效果的比较

为了解湖南省招标的两种禽流感H5N1亚型Re-5株疫苗免疫家禽后抗体消长规律,研究探讨禽流感疫苗合理使用的免疫程序,以期为今后有效指导禽流感防控实践提供科学依据,对鸡和鸭分别做了免疫试验.试验结果显示,两种禽流感灭活疫苗均能诱导机体产生良好的免疫应答,但在一次免疫的情况下,鸡产生的HI抗体滴度要比鸭的高,鸡的HI抗体滴...     

水禽H5亚型高致病性禽流感免疫抗体监测及分析

为分析水禽疫苗免疫的质量,及时掌握流行病学动态和免疫效果,我们对全区水禽养殖场/户每月按镇(街道)随机抽检,进行H5亚型高致病性禽流感抗体水平的监测,为更有效地做好高致病性禽流感的预防免疫工作提供科学依据。     

禽流感HI抗体测定

禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的禽类的感染。鸡、火鸡、鸭、鹅和鹌鹑等家禽、野鸟、水禽和海鸟等均可感染,其发病形式多样,可表现为无致病性感染、低致病性感染和高致病性感染。红细胞血凝抑制试验(HI)是监测禽流感免疫状态的一种简便、快速的血清学方法。     

H9亚型禽流感病毒油乳苗免疫SPF鸡后HI抗体效价与保护关系

以H9亚型低致病性禽流感病毒（AIV）的LG1株第20代种毒接种10日龄SPF鸡胚，收获尿囊液，经浓缩制成常规灭活疫苗。用浓缩疫苗及其不同稀释度的疫苗对12日龄的SPF鸡颈部皮下注射0.2ml/只.SPF动物隔离罩内饲养21d后采集血清,随即用此病毒的第8代进行攻毒.结果表明,该浓缩疫苗及其1:1稀释后的疫苗对12日龄SPF鸡具有较好的免疫原性,平均HI滴度均达到9.4log2.并且各免疫鸡只血清中HI抗体大于7log2,但稀释至1/4的疫苗免疫后平均HI滴度只有5.log2.在人工攻毒后3d和7d,对照组有7/10和1/10分离到病毒,但3个试验组免疫后均未分离到病毒.     

不同家禽红细胞悬液检测水禽禽流感抗体对比试验

用同种水禽红细胞及水禽血清经处理后用鸡红细胞检测水禽禽流感抗体,试验结果表明:用鸡的红细胞来检测鹅、鸭的禽流感免疫抗体,比用同种水禽红细胞检测的抗体滴度平均低(2～4)Log2,如果禽流感免疫抗体低于4Log2时.用鸡红细胞基本检测不到Hl抗体.而用同种水禽红细胞对水禽禽流感抗体进行检测,可完全消除j}特异性凝集因子对水禽流感抗体检测的影响.     

重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1型,Re-1株)抗体产生规律试验报告

通过红细胞凝集抑制试验（HI试验）,对蛋用雏鸡使用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1型,Re-1株）和某种禽流感重组二联活疫苗的不同免疫程序的免疫效果进行监测,掌握禽流感HI抗体产生及消长规律,制定适合的种鸡和商品蛋鸡预防高致病性禽流感的免疫程序和免疫规范。     

禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原国家参考品的研制

按照国家一级标准物质要求和禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制试验抗原制造及检验规程规定的抗原制备方法,研制了一批禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制抗原国家参考品,用于检测禽流感病毒（H5亚型）制品生物效价和血凝抑制操作过程中的校验。该批抗原经过8家单位对其协作标定后对结果进行统计学分析,确定该批禽流感抗原的血凝效价为1：80。另对所研制的禽流感抗原均一性、稳定性、无菌检验、剩余水分测定、真空度测定等各项指标进行检测,结果均符合禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制试验抗原制造及检验规程和国家一级标准物质要求。说明该禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制抗原可以作为国家参考品。     

禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原国家标准品的研制

按照国家一级标准物质的要求,研制了禽流感病毒H9亚型(株)血凝抑制试验抗原国家标准品.对标准品的物理性状、无菌、效价、特异性、水分、真空度、均一性、稳定性等进行测定,各项指标均符合要求。经过8家单位对其协作标定,并经统计学分析,该批抗原血凝效价为460?80,最终定值为400。该禽流感病毒H9亚型(株)血凝抑制试验抗原可以作为国家标准品,批号为200901。     

影响H5亚型禽流感血凝抑制抗体效价的因素分析

1 材料与方法 1.1 材料 AI H5 HI抗体检测抗原(AI H5 Re-1,AIH5 Re-4.AI H5 Re-5)、AI H5阳性对照血清均来自国内某公司,阴性对照血清为SPF鸡血清.     

H5亚型禽流感灭活疫苗免疫后鸡血凝抑制抗体动态变化观察

选择国家指定的两个厂家生产的禽流感灭活疫苗(H5亚型,N28株)进行无母源抗体来航鸡的免疫试验.通过鸡免疫后血凝抑制(HI)抗体的动态性检测,对两个疫苗的免疫效果进行了观察.研究结果表明,两个疫苗均具有良好的免疫效果,但也存在一定程度的差异;加强免疫可以明显提高抗体水平,延长免疫保护时间.     

影响禽流感血凝和血凝抑制试验的因素及对策

血凝和血凝抑制试验是目前较为广泛使用的监测禽流感抗体水平的一种试验方法.对血凝和血凝抑制试验中的影响因素及对策进行了阐述.     

温度和时间对血凝试验测定禽流感病毒H5N1亚型Re-6株抗原效价的影响

旨在研究不同温度和反应时间对血凝试验测定禽流感病毒H5N1亚型Re-6株抗原效价的影响。试验设定4、25、37℃3个温度,分别读取反应5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60 min时的抗原效价。结果表明,随着反应温度的升高,试验结果出现时间缩短。4℃反应25 min结果趋于稳定,反应50 min时开始解凝;25℃反应20 min结果趋于稳定,反应40 min时开始解凝;37℃反应15 min结果趋于稳定,反应30 min时开始解凝。     

浅谈禽流感微量红细胞凝集抑制试验

禽流感微量红细胞凝集抑制试验(HI检测),因为其微量、快速、可靠,能够处理大量样品,并能在短时间内报告禽类血样的禽流感抗体滴度水平,因此成为出入境检验检疫部门基层实验室常用的方法。禽流感HI检测结果准确与否,对于出入境检验检疫部门及时掌握禽群的禽流感抗体水平,提高对辖区内注册活禽养殖场的禽流感疫病的监控,保证供港澳活禽顺利出口至关重要。笔者长期从事禽流感HI检测,积累了一些经验,与大家进行交流探讨:1不同效价工作抗原的影响由于禽流感微量红细胞凝集抑制试验的结果判定是以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI…     

不同禽红细胞对水禽禽流感血凝抑制试验结果的影响

禽流感是由正黏病毒科A型流感病毒引起的一种禽类烈性传染病,对养禽业及人类健康都会产生严重危害.对家禽进行禽流感疫苗预防接种是我国防治禽流感的主要措施之一.血凝和血凝抑制试验是监测家禽抗体水平、了解家禽免疫效果、建立合理免疫程序的有效方法,由于禽流感病毒具有凝集红细胞的特性,在禽流感血凝抑制试验中,采用鸡红细胞作为检测指示剂.在日常检测中,有许多水禽血清样品需要检测.为了解不同禽红细胞作指示剂对水禽禽流感血凝抑制试验结果的影响,进行了本次试验.……     

H5N1亚型禽流感基质蛋白M1基因的原核表达和纯化

为获得纯度大于90%的M1蛋白,构建重组质粒PET-22b-M1,将正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE检测分析表达形式和表达量,并经Ni2+柱亲和层析与柱层析纯化表达蛋白。结果表明:试验成功构建了pET-22b-M1表达载体;IPTG诱导后高效表达出分子质量约为28 ku的M1融合蛋白;纯化的目的蛋白在SDS-PAGE图谱上呈单一条带,且获得的M1蛋白纯度达95.4%。     

2株H5N1亚型禽流感病毒人工感染鸭的组织病理学观察

鸭经肌肉接种禽流感病毒A/duck/Guangdong/185/2004（H5N1）和A/duck/Guangdong/221/2004（H5N1）后,2周内未见死亡,但具有一些显微和超微病理学变化,主要表现为呼吸道、消化道黏膜受损,心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脑等器官一定程度的充血、淤血、出血、水肿及实质细胞变性、坏死和炎症等。