Ghrelin对绵羊早期体外胚胎发育调节机制的初步研究

【目的】探讨Ghrelin对绵羊早期胚胎发育的调节机制。【方法】将绵羊体外受精早期胚胎在Ghrelin组(300,1 000,10 000ng/mL)、Ghrelin受体拮抗剂D-Lys3-GHRP-6组(10,200,400ng/mL)、D-Lys3-GHRP-6+Ghrelin组(D-Lys3-GHRP-6 400ng/mL,Ghrelin 300,1 000和2 000ng/mL)、空白对照(不加D-Lys3-GHRP-6和Ghrelin)4个组别的胚胎发育液中进行发育培养,采用荧光定量PCR技术分别对各处理不同发育阶段(2-细胞期、4-细胞期、8-细胞期和16-细胞期)绵羊早期胚胎中ERK1、ERK2、P90rsk、Bcl-2、Bax mRNA的表达情况进行检测。【结果】与空白对照组相比,在添加Ghrelin组ERK1、ERK2、P90rsk、Bcl-2基因mRNA的表达表现为显著性上调(P0.05),且这种上调作用可被D-Lys3-GHRP-6所拮抗;在添加Ghrelin组Bax基因mRNA的表达无显著性变化,但在D-Lys3-GHRP-6组Bax基因mRNA的表达表现为显著性上调(P0.05)。【结论】Ghrelin可级联激活MAPK信号通路,抑制促凋亡基因Bax的表达、促进抗凋亡基因Bcl-2的表达,进而促进绵羊早期胚胎的发育。     

Ghrelin和GHS-R1a mRNA在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达

【目的】探讨Ghrelin和GHS-R1a mRNA在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达及二者表达与FSH之间的关系。【方法】 利用实时定量RT-PCR技术检测体外成熟进程中牛卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA水平表达变化,观察不同浓度FSH对Ghrelin和GHS-R1a mRNA表达的作用以及FSH与FSH受体抑制剂的组合对Ghrelin和GHS-R1a基因表达的影响。【结果】 实时定量RT-PCR结果揭示牛卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA的相对表达量随着成熟过程的延长而呈现一定变化规律,即Ghrelin和GHS-R1a mRNA在卵母细胞体外成熟过程中从8 h开始显著下降并持续此低表达水平到24 h;不同浓度FSH 显著抑制卵母细胞Ghrelin及GHS-R1a mRNA的表达,而FSH 受体抑制剂明显减弱FSH的抑制作用而促进二者表达。【结论】Ghrelin和GHS-R1a mRNA在卵母细胞体外成熟过程中的表达可能随着培养液中FSH升高而降低。     

FSH和LH及其受体基因在梅山猪公猪HPT轴的表达

为了研究卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)及其受体在梅山猪公猪各组织中的表达特征以及在下丘脑-腺垂体-性腺轴(HPT轴)中的表达规律,采用荧光定量PCR(RT-PCR)方法对6头150日龄梅山猪公猪的生殖组织、脑组织及内脏组织中FSHβ、FSHR、LHβ和LHR基因的表达情况进行分析。结果显示,FSHβ基因在梅山猪公猪的下丘脑和垂体中表达;FSHR基因在梅山猪公猪的睾丸、附体、附尾和尿道球腺中表达;LHβ基因在梅山猪公猪的睾丸、附头、附体、垂体、大脑、小脑和海马中表达;LHR基因在梅山猪公猪的睾丸和下丘脑中表达。采用荧光定量方法对各日龄(2、30、60、90及150日龄)梅山猪公猪下丘脑、垂体和睾丸中FSH和LH及其受体的表达进行研究。结果表明,FSHβ在下丘脑和垂体中的表达量随日龄的增加而增加;FSHR在睾丸中的表达量在2、30、60日龄段中较稳定,90日龄时表达量开始降低,150日龄的表达量达到最低值;LHβ在垂体中的表达、LHR在下丘脑中的表达和LHR在睾丸组织中的表达趋势都呈现起伏状态,30日龄时出现表达高峰,60日龄时表达量降低,90日龄时又达到表达高峰,以后降低;LHβ在睾丸中的表达量在2、30、60日龄段无显著差异(P0.05),90日龄时达到表达最高峰,150日龄时表达量有所降低。     

阉割对公猪生长性能和胴体品质的影响

【目的】探讨阉割对生长期公猪的生长、胴体性状和肌肉品质的影响。【方法】选取36头全同胞雄性仔猪,根据配对原则分成18对,每对随机抽出1头在5周龄时阉割,另1头作对照。5、12、21和30周龄时空腹称重,采集血液测定血清睾酮含量;21、30周龄屠宰测定胴体性状,采集背最长肌样品,用近红外扫描和气相色谱-质谱分析方法测定肌内脂肪含量和脂肪酸组成。【结果】12、21和30周龄时,未去势公猪的血清睾酮含量极显著高于去势公猪(P0.01);21周龄时,去势公猪的体重高于未去势公猪(P0.05),但在30周龄时,未去势公猪体重极显著高于去势公猪(P0.01),21和30周龄时,去势公猪平均膘厚、板油重和脂肪率极显著高于未去势公猪,平均皮厚和瘦肉率极显著低于未去势公猪(P0.01);30周龄时,未去势公猪胴体重、前蹄重和眼肌面积显著地高于去势公猪(P0.05);21周龄时去势公猪肌内脂肪含量高于未去势公猪(P0.05),背最长肌肌肉部分饱和脂肪酸(SFA)和单不饱和脂肪酸(MUFA)极显著高于未去势公猪(P0.01)、但多不饱和脂肪酸(PUFA)极显著低于未去势公猪(P0.01),公猪血清睾酮含量和肌内脂肪含量之间无显著相关性(P0.05),但与C16:0、C18:1、MUFA及C18:0和PUFA存在极显著负相关和正相关(P0.01)。【结论】公猪阉割后,血清睾酮水平降低,从而影响公猪的生长和胴体性状以及肌肉脂肪酸组成。     

Ghrelin对雌性大鼠促性腺激素分泌及其mRNA表达的影响

【目的】探明Ghrelin在中枢水平上对雌性大鼠促性腺激素分泌及其mRNA表达的影响。【方法】用1 nmol Ghrelin对不同发情周期(发情前期、发情期、发情后期、间情期)雌性大鼠及用不同剂量(0.3,1和3 nmol)Gh-relin对发情后期雌性大鼠分别进行侧脑室注射,15 min后断头采血,离心血清,同时采集脑垂体,采用酶免法测定血清促黄体素(LH)、促卵泡素(FSH)的质量浓度,用实时荧光定量PCR法检测LH mRNA、FSH mRNA在垂体中的表达。【结果】①在发情前期和间情期,Ghrelin可显著抑制雌性大鼠LH的分泌和LH mRNA的表达(P0.05);Ghre-lin对整个发情周期中FSH的分泌不产生影响,仅在发情期抑制FSH mRNA的表达(P0.05)。②在发情后期,0.3和1 nmol的Ghrelin对大鼠促性腺激素分泌和mRNA表达均无影响,但3 nmol的Ghrelin可显著抑制LH、FSH的分泌和LH mRNA的表达(P0.05)。【结论】Ghrelin在中枢水平上对FSH、LH的释放及FSH mRNA和LH mR-NA的表达均有抑制作用,但存在一定的剂量差异,并受发情周期的调节。     

犏牛、牦牛睾丸组织中Ghrelin 与GHSR 基因mRNA 表达水平研究

对犏牛、牦牛睾丸组织中生长素(Ghrelin)与生长激素促分泌素受体(GHSR)基因mRNA表达水平进行研究。运用荧光定量PCR方法,检测Ghrelin、GHSR基因在犏牛、牦牛睾丸组织中m RNA的表达水平差异,结果显示:在犏牛、牦牛睾丸组织中,Ghrelin基因m RNA相对表达量犏牛显著高于牦牛(分别为0.8177±0.0225、0.4656±0.0222,P0.05);GHSR基因mRNA相对表达量也是犏牛显著高于牦牛(分别为0.8622±0.0347、0.4722±0.0761,P0.05)。相对于牦牛睾丸组织,犏牛睾丸组织中Ghrelin与GHSR基因m RNA均高表达可能是犏牛雄性不育的原因之一。     

Ghrelin在驯鹿组织器官中的表达

为检测生长素(Ghrelin)在驯鹿体内可能表达的器官,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术,检测驯鹿的下丘脑、垂体、舌、食管、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠、心、肺、肝、脾、肾、膀胱、输尿管、睾丸、附睾、输精管、淋巴结、甲状腺、胰、肾上腺、胸腺、精囊腺和骨骼肌中Ghrelin的表达情况。Ghrelin在上述器官中均有表达,且在皱胃内的表达量明显高于其他器官(P0.05),其次是胰、十二指肠、睾丸和食管,与下丘脑、垂体和舌等其余器官内的表达量相比差异也显著(P0.05),这些器官内的表达量相对较少。     

小花棘豆中毒对家兔丘脑-垂体-性腺轴α-甘露糖苷酶的影响

【目的】探讨小花棘豆中毒对家兔丘脑-垂体-性腺轴α-甘露糖苷酶(AMA)的影响,揭示小花棘豆的毒性作用机理。【方法】将24只家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,对照组饲喂青干草,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂添加15%,30%和45%小花棘豆全草的混合饲料(其苦马豆素含量分别为30,60和90mg/kg),分别于攻毒后第14,35和70天时每组随机采集2只家兔的丘脑、垂体和性腺,检测AMA在家兔丘脑-垂体-性腺轴中的分布、活性及其基因mRNA的表达量。【结果】AMA在家兔丘脑、垂体和性腺中均有分布,小花棘豆中毒可导致家兔丘脑-垂体-性腺轴AMA活性和分布明显下降。试验组及对照组家兔丘脑-垂体-性腺轴高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(AMA1)和溶酶体α-甘露糖苷酶(AMA2)均有表达,但各试验组表达转录水平总体低于对照组,攻毒第70天时试验Ⅰ组家兔丘脑-垂体-性腺轴的AMA1和AMA2,试验Ⅱ组家兔丘脑-垂体-性腺轴及试验Ⅲ组家兔丘脑和垂体中AMA2的表达均与对照组差异不显著(P0.05);试验Ⅲ组家兔丘脑-垂体-性腺轴和试验Ⅱ组家兔丘脑、垂体、睾丸中AMA1mRNA表达量均极显著低于对照组(P0.01),试验Ⅱ组卵巢AMA1mRNA表达量显著低于对照组(P0.05),试验Ⅲ组家兔睾丸和卵巢AMA2mRNA表达量显著低于对照组(P0.05)。【结论】小花棘豆中毒可影响家兔丘脑-垂体-性腺轴AMA的活性及其基因的转录表达。     

瘦素及其受体在真孕和假孕母犬下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达

【目的】研究胚胎着床期瘦素(leptin)及其受体(OB-R)在真孕和假孕母犬下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达差异.【方法】应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学的方法检测胚胎着床期真孕和假孕母犬下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫组织中瘦素及其受体的表达.【结果】瘦素在真孕和假孕母犬的下丘脑、垂体、卵巢、子宫中均有表达,在输卵管中表达阴性,瘦素受体在真孕和假孕母犬各组织中均有表达;瘦素及其受体在真孕母犬下丘脑、卵巢和子宫组织中的表达量显著高于假孕母犬(P0.05),瘦素受体在真孕母犬垂体和输卵管中的表达量显著高于假孕母犬(P0.05).真假孕母犬垂体中瘦素水平差异不显著(P0.05).【结论】瘦素及其受体对于犬的胚胎着床具有一定调节作用.     

神经激肽B在犬生殖轴上的表达

【目的】研究神经激肽B(NKB)在犬生殖轴上的表达规律。【方法】以仔犬期、幼犬期、初情期母犬及成年公犬、母犬为研究对象,颈动脉放血处死后取其下丘脑、垂体、睾丸和卵巢,其中成年公、母犬的样本进行NKB免疫组化试验,观察NKB分布情况并拍照;仔犬期、幼犬期、初情期和成年期母犬样本进行RT-qPCR试验,以GAPDH为内参,测定样本中目的基因Tac3 mRNA的表达量。【结果】NKB主要分布于下丘脑外侧区和视上核、腺垂体、卵巢卵泡颗粒层细胞和卵母细胞及睾丸的间质组织和生精细胞,而神经垂体中未见分布。在母犬下丘脑、垂体和卵巢中,Tac3 mRNA表达量均表现为从仔犬期至初情期逐渐上升,于初情期达最高水平,至成年期又有所下降,且与其他各发育阶段差异显著(P0.05)。【结论】NKB可能参与母犬初情期的启动。     

反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Fit-1 mRNA表达的影响

［目的］ 探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达的影响。［方法］ 试验分为4组：Ⅰ组,空白对照组;Ⅱ组,脂质体组;Ⅲ组（SCON）,20 μmol/L正义寡核苷酸组;Ⅳ组（ASCON）,20 μmol/L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48 h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达情况的变化。［结果］VEGF mRNA在Ⅰ、Ⅱ组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长无明显变化;在Ⅲ组VEGF mRNA 表达略有降低,但与Ⅰ和Ⅱ组间无显著性差异（P＞0.05）;Ⅳ组（反义寡核苷酸组）的VEGF mRNA表达量显著下降（P＜0.05）,并且随着时间延长逐渐下降。VEGF受体FLT-1 mRNA的表达与VEGF相似。［结论］反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1的mRNA表达有下调作用。     

反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达的影响

[目的]探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1mRNA表达的影响。[方法]试验分为4组:I组,空白对照组;II组,脂质体组;III组(SCON),20μmol/L正义寡核苷酸组;IV组(ASCON),20μmol/L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Flt-1mRNA表达情况的变化。[结果]VEGFmRNA在I、II组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长无明显变化;在III组VEGFmRNA表达略有降低,但与I和II组间无显著性差异(P>0.05);IV组(反义寡核苷酸组)的VEGFmRNA表达量显著下降(P<0.05),并且随着时间延长逐渐下降。VEGF受体FLT-1mR-NA的表达与VEGF相似。[结论]反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1的mRNA表达有下调作用。     

反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Fit-1 mRNA表达的影响

[目的]探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Fit-1mRNA表达的影响。[方法]试验分为4组：Ⅰ组,空白对照组;Ⅱ组,脂质体组（不加寡核苷酸）;Ⅲ组（SCON）,20μmol／L正义寡核苷酸组;Ⅳ组（ASCON）,20μmol／L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Fit-1 mRNA表达情况的变化。[结果]VEGF和Fh-1熔解曲线表明扩增效果好,培养24h,VEGFmRNAⅠ组相对表达量为0．0769,Ⅱ组为0．0768,Ⅲ组为0．0769,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,Ⅳ组VEGFmRNA相对表达量下降为0．0242,且与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组有显著性差异（P〈0．05）。培养36h,前3组相对表达量分别为0．059,0．051,0．0514,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,第Ⅳ组为0．0242,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。培养48h,前3组相对表达量分别为0．061,0．0552,0．0521,3组之间无显著性差异（P〈0．05）,第Ⅳ组为0．0115,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。培养24h,Fit—lmRNA Ⅰ组相对表达量为0．0786;Ⅱ组为0．0782,Ⅲ组为0．0781,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,Ⅳ组Flt-1 mR—NA相对表达量下降为0．0256,且与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组有显著性差异（P〈0．05）。培养36h,前3组相对表达量分别为0．0781,0．0784,0．0782,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,第Ⅳ组为0．0228,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。培养48h,前3组相对表达量分别为0．0691,0．0780,0．0693,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,第Ⅳ组为0．0215,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。可见,VEGF受体Flt-1 mRNA的表达与VEGF相似。二者均在Ⅰ组、Ⅱ组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长没有明显变化;在Ⅲ组表达轻微下降,但与Ⅰ组和Ⅱ组无显著性差异（P〉0．05）;Ⅳ组的表达量显著下降（P〈0．05）,并且随着时间的延长至逐渐下降。[结论]反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt—1的mRNA表达有下调作用。     

水牛发情前后血清瘦素与饥饿激素水平的动态变化及其相关性

[目的]了解水牛发情前后血清瘦素与饥饿激素水平的变化规律及其相关性。[方法]从发情前14天至发情后22天,从广西某水牛场23头摩拉水牛抽取血液,用ELISA方法测定血清瘦素和饥饿激素水平。[结果]水牛血清瘦素和饥饿激素水平在发情前逐步上升,发情后日变化剧烈,且两者呈极显著正相关。[结论]该研究为水牛营养代谢病机制的研究提供了新的途径。     

Recent advances in immunocastration in sheep and goat and its animal welfare benefits: A review

Castration of male animals is a common practice in the meat industry aimed at reducing aggressive behavior, preventing unpleasant flavor, and controlling undesirable breeding. For many years, mechanical castration and surgical castration have been practiced to sterilize the animals. However, these castration methods are not humane because of the associated risk of death, pain, and stress. Recently, immunocastration targeting the hypothalamic-pituitary-gonadal axis (HPG) axis has been reported as an animal-friendly approach that circumvents many of the concerns with conventional castration, and suggested by researches as an alternative to surgical castration. However, there is no compilation of updated information on the use of immunocastration in sheep and goats. Therefore, this review aims to summarize the developmental process from traditional surgical castration to immunocastration and to screen the process of immune targets. It also compares the respective advantages and disadvantages of traditional castration technologies and immunocastration, in particular including analyses in the characteristics, features application and welfare benefits of immunocastration in sheep and goats were also analyzed.     

Ghrelin对奶山羊下丘脑神经肽Y(NPY)和刺鼠相关蛋白(AGRP)mRNA表达的影响

研究Ghrelin对奶山羊下丘脑神经肽Y(NPY)和刺鼠相关蛋白(AGRP)mRNA表达的影响。10只泌乳期莎能奶山羊随机分为试验组和对照组,每组5只。试验组静脉注射Ghrelin(3.0μg/kg),3h后宰杀,迅速取下丘脑,检测下丘脑脑神经肽Y和刺鼠相关蛋白mRNA的表达。结果表明,一定剂量的Ghrelin对NPY mRNA的表达具极显著上调作用(P0.01);对AGRP mRNA的表达也有显著促进作用(P0.01)。以上结果提示Ghrelin可能通过对这些神经肽的作用参与对奶山羊摄食和能量代谢等生理活动的调节。     

莫桑比克罗非鱼ghrelin 受体基因的特性及ghrelin受体和ghrelin mRNA组织表达

[目的]了解莫桑比克罗非鱼ghrelin/GHSR系统的生理功能。[方法]采用RT-PCR和RACE技术分离莫桑比克罗非鱼2个GH-SR全长cDNA序列,并用荧光定量PCR方法检测了莫桑比克罗非鱼ghrelin基因及其受体GHSR-1a mRNA水平的组织表达,以及饥饿对这2个基因表达的影响。[结果]获得了莫桑比克罗非鱼2个GHSR cDNA全序列（GHSR-1a、GHSR-1b）。GHSR-1a序列全长1 627bp,编码384个氨基酸,具有7个跨膜结构域结构;GHSR-1b序列全长1 858 bp,编码298个氨基酸,只具有前5个TM,在第6个TM的第4个氨基酸处开始缺失。正常生理条件下,2基因在所检测组织中均有表达,但存在明显的组织差异。ghrelin主要由胃中分泌,除性腺外,雌鱼所有被检测组织的表达量均高于雄鱼的表达量,以肌肉中ghrelin基因的表达差异最大,雌鱼是雄鱼的30.4倍。莫桑比克罗非鱼GHSR-1a基因在垂体、肝脏、心脏中表达量较高,且被检测组织中雄鱼的表达量均高于雌鱼的表达量,其中鳃组织的表达差异最大,雄鱼是雌鱼的36.3倍。饥饿28 d后莫桑比克罗非鱼胃中ghrelin基因表达增加,雄鱼ghrelin基因分泌量增加了3.7倍,雌鱼增加了2.6倍;雌雄个体垂体中GHSR-1a的分泌量均略有下降。[结论]ghrelin/GHSR-1a系统可能具有调节莫桑比克罗非鱼能量平衡的作用。     

广西水牛ghrelin cDNA的克隆及序列分析

[目的]克隆广西水牛ghrelin的cDNA并对其进行序列分析。[方法]以广西沼泽型水牛的真胃底组织总RNA为模板,用特异性引物扩增ghrelin的cDNA。扩增产物经凝胶回收纯化后与pMD 18-T连接并转化大肠杆菌DH5d,转化产物经PCR和双酶切鉴定后筛选出阳性克隆,阳性克隆经5×1ml LB液体培养基培养鉴定后测序。[结果]成功获得了广西水牛ghrelin的cDNA,该片段长339bp,编码113个氨基酸。BLAST分析结果表明,该片段与黄牛前原ghrelin基因仅有6个碱基的差异,同源性为98．2％;而两者ghrelin均由27个氨基酸组成,序列同源性为1013％。[结论]为进一步研究ghrelin基因的生物学功能提了供理论基础。     

巢湖鸭Ghrelin基因外显子3的单核苷酸多态性及其对屠体性状的影响

[目的]检测巢湖鸭Ghrelin基因外显子3的单核苷酸多态性（SNPs）,并分析其与巢湖鸭屠体性状的关系。[方法]以巢湖鸭为试验群体,采用PCR-SSCP和DNA测序的方法检测鸭生长素（Ghrelin）基因外显子的3SNPs,并将所发现的SNPs与胴体重、半净膛重和全净膛重等屠体性状进行相关性分析。[结果]巢湖鸭外显子3第54bp处发生G→A的沉默突变,检测到AA、BB和AB3种基因型,该突变位点对巢湖鸭胴体重影响极显著（P〈0.01）,对半净膛重和全净膛重有显著影响（P〈0.05）,BB基因型在胴体重、半净膛重和全净膛重上显著高于AA型和AB型（P〈0.05）。[结论]Ghrelin基因多态性与巢湖鸭的部分屠体性状存在显著相关性,对B等位基因进行选择将有利于提高巢湖鸭的屠体指标。