大豆KTi基因和BBi基因双价RNAi表达载体的构建

以KTi基因的ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GUS-KTiS为模板,采用PCR技术克隆含有KTi基因的完整ihpRNA构件,并将其克隆到pMD18-T载体,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并进行序列比对;然后以BBi基因ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GFP-BBiS为基础,利用限制性内切酶BstⅪ单酶切,将KTi基因的完整ihpRNA构件连入其中。最后利用冻融法转化根癌农杆菌,并进行PCR鉴定。结果表明:PCR扩增得到含有KTi基因的完整ihpRNA构件,构建成重组克隆载体pMD18-T-KRNAi,并构建成双价ihpRNA种子特异性表达载体pKTi-BBi-RNAi,并转化得到含有pKTi-BBi-RNAi的农杆菌EHA105。成功构建同时具有大豆胰蛋白酶抑制剂KTi基因和BBi基因的双价RNAi种子特异性表达载体,KTi基因和BBi基因的ihpRNA表达框架成功转入农杆菌中。     

大豆KTi基因和SBA基因双价RNAi表达载体的构建

本研究采用RT-PCR技术克隆大豆KTi和SBA基因的核心保守序列,序列分析表明,KTi基因片段为324bp,SBA基因片段为515bp;利用RNAi技术,结合种子特异性启动子,构建同时具有KTi基因和SBA基因反向重复结构的双价RNAi种子特异性表达载体pCAMBIA3301-KTi-SBA(pKTi-SBA)。通过酶切检测及测序,证明双价RNAi种子特异性表达载体构建成功。本研究为通过RNAi技术同时降低大豆种子中胰蛋白酶抑制剂和凝集素含量,改良大豆品质奠定基础。     

高产海藻糖突变菌株YUV3海藻糖合酶基因克隆及原核表达

海藻糖合酶(Trehalose synthase,TreS)属于α-淀粉酶家族(α-amylase family),是生物体内通过TreS途径生成海藻糖的一种酶类。利用PCR技术,从本试验室筛出的高产海藻糖突变菌株YUV3中扩增了海藻糖合酶基因(TresY),将其克隆到原核表达载体pET-28a(+),得到重组质粒P-TresY,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,重组蛋白经SDS-PAGE分析,得到一条分子量约为110kDa的特异条带,并经Western blotting分析鉴定,表明成功构建重组质粒P-TresY并在大肠杆菌中表达,为进一步的研究奠定基础。     

德式乳杆菌D-乳酸脱氢酶基因的克隆与表达

利用PCR的方法从德式乳杆菌的DNA中扩增得到D-乳酸脱氢酶基因,构建重组克隆质粒(pMD19-T-DLDH),转化DH5α进行蓝白斑筛选,得到阳性克隆提取质粒双酶切验证。连接pET-32a表达质粒,构建重组表达质粒,提取质粒双酶切、测序验证,测序结果与原序列基本相符。得到重组表达质粒pET-32-DLDH转化BL21大肠杆菌IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示有明显大小约为19Ku特异蛋白条带。     

论转基因动物表达重组蛋白

转基因动物表达重组蛋白多以乳腺、唾液腺和膀胱为靶位。在这些表达器官中,通过构建合适的载体,选择适当的启动子和调控序列可产生比正常水平高得多的重组蛋白。     

毕赤酵母高表达载体与高产β-甘露聚糖酶菌株的构建

本研究利用基因工程技术对pPIC9K载体进行改造,以提高β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达量,从而得到高产的β-甘露聚糖酶基因工程菌。     

NPR1基因植物表达载体构建及对玉米的遗传转化

为了提高玉米的广谱抗病性,从拟南芥中克隆NPR1基因,构建以bar基因为筛选标记的植物表达载体pCAMBIA3301-NPR1,通过农杆菌介导法将pCAMBIA3301-NPR1转入玉米自交系‘H99’的愈伤组织中,用含10mg/mL草胺磷的筛选培养基进行筛选,共获得34株再生植株;经过PCR和RT-PCR鉴定,得到14株RT-PCR阳性植株。结果表明,NPR1基因在玉米中得到表达。     

非物质文化遗产景观基因识别及其意象研究——以羌年为例

羌年是羌族文化的突出体现,也是非遗文化系统的重要组成部分。引入景观基因理论,将传承载体特征、表达形式特征、民俗信仰特征、文化意象特征四个特征维度作为羌年的主导性基因特征,进而构建起羌年景观基因识别的指标体系。研究指出,传承羌年须依托祭祀塔、柏枝等关键性空间载体,同时,羌年传承的产品载体具有典型的“六畜”符号特征。此外,羌年集中表达了万物有灵、敬畏自然、新年平安、风调雨顺的复合性文化意象。研究结果有助于提高对羌年文化景观的识别能力、提升民族文化影响力,为羌年的保护、传承与长效发展提供理论依据。     

利用Shuffling技术改良纤维素葡聚糖内切酶(EGI)酶活

本文以纤维素葡聚糖内切酶基因为基础,利用shuffling改组技术,经过DNaseI降解、PrimerlessPCR、TouchdownPCR对纤维素内切酶基因进行了突变和改组,然后将改组的纤维素内切酶基因插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建了重组子突变体库。通过羧甲基纤维素钠(CMC-Na)培养基的分离筛选,得到活性比较高的纤维素葡聚糖酶菌株。对这些菌株通过3,5-二硝基水杨酸法(DNS)进行酶活检测,成功获到比原来酶活高5.75倍的菌株,酶活表达量56.52U/mL,对其诱导表达条件进行优化结果表明在50℃,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)终浓度为0.1mmol/L条件下,酶的产量最高。     

昆虫抗菌肽的研究进展

昆虫抗菌肽是昆虫体内分泌合成的免疫效应因子,具有广谱的杀菌效果。近年来,随着人们对抗菌肽的深入研究,人们发现当病原微生物入侵时,昆虫体内最终合成大量的抗菌肽来应对病原微生物对虫体的破坏。因此,其在昆虫的生长发育过程中具有重要意义,本文从抗菌肽的种类和作用机制两方面做了简述。     

莲ARF基因家族全基因组鉴定和表达分析

生长素反应因子(auxin response factor, ARF)是调节生长素表达的转录因子响应基因,与植物生长发育和信号转导等多个过程密切相关。本研究对莲ARF基因家族进行鉴定,从莲的全基因组中共鉴定到30个ARF基因家族成员。分析其理化性质发现它们的氨基酸数介于86aa～988aa,等电点范围为4.61～9.05,大部分表现为酸性且都为亲水蛋白。利用生物信息学软件分析莲的ARF蛋白序列的保守结构域和保守基序,结果显示莲中不是所有的ARF蛋白都含有B3结构域、Auxin_resp结构域、AUX_IAA结构域,但至少具备其中一种结构域,ARF基因家族中预测含有15个保守基序,对莲ARF保守域蛋白序列进行进化树分析,莲中ARF蛋白可以被划分为四组,基因结构进化高度保守。研究结果为后续深入研究莲ARF基因家族的功能奠定了基础。     

农民利益表达机制研究——基于利益表达机制构成要素的角度

当前农民利益表达的困境昭示了利益表达机制的不完善,从利益表达的构成要素上来说,农民利益表达存在着利益表达主体的能力缺失、利益表达客体的角色错位和利益表达载体渠道不畅通的问题,所以建立顺畅的农村利益表达机制,就必须使利益表达的主体、客体和载体三个方面共同作用,才能真正使利益表达机制顺利运行,促进和谐社会的构建.     

农民利益表达机制研究——基于利益表达机制构成要素的角度

当前农民利益表达的困境昭示了利益表达机制的不完善，从利益表达的构成要素上来说，农民利益表达存在着利益表达主体的能力缺失、利益表达客体的角色错位和利益表达载体渠道不畅通的问题，所以建立顺畅的农村利益表达机制，就必须使利益表达的主体、客体和载体三个方面共同作用，才能真正使利益表达机制顺利运行，促进和谐社会的构建。     

春尺蠖小热激蛋白基因AcinHsp19.4的表达与序列分析

小分子热激蛋白(small heat shock protein,sHSP)在昆虫抵御外界不利环境中具有重要作用。为深入探究该基因在春尺蠖耐饥饿胁迫的作用机理,本研究基于已有不同时间饥饿处理下的转录组数据,筛选得到sHSP,命名AcinHsp19.4(GenBank登录号:MW336984),分析其分子特征并构建系统进化树,同时分析了该基因在不同时间饥饿处理下的表达谱。结果显示,春尺蠖AcinHsp19.4基因序列全长516 bp,共编码171个氨基酸,具有小分子热激蛋白保守的α-晶体结构域,在N端不含信号肽且无跨膜区。系统进化结果表明,春尺蠖AcinHsp19.4与桦尺蛾BbetHsp19.4亲缘关系最近。该基因在饥饿处理72 h后,表达量显著上调。研究结果说明,AcinHsp19.4参与春尺蠖的生长发育过程,并可能在春尺蠖应对饥饿胁迫的抗逆机制中扮演重要角色。     

植物TIR1/AFBs基因家族研究进展

TIR1/AFBs基因家族是一种存在于细胞核中的生长素受体,属于F-box蛋白基因中的一个小亚族。它们通过与相关生长素相结合活化转录因子来促进基因的表达,从而进行调控,是生长素信号转导过程中的关键部分。为了深入研究生长素信号转导机制,从TIR1/AFBs基因家族的发现与结构,家族成员表达模式的差异及对植物生长发育方面的调节等方面概括介绍了TIR1/AFBs基因家族的分子调控机制,总结了TIR1/AFBs基因的功能。最后探讨了TIR1/AFBs基因的研究方向。     

浅谈溶菌酶的研究进展

溶菌酶作为一种天然的抗菌剂,广泛存在于人及哺乳动物等的多种组织器官中,良好的杀菌作用使其成为医疗、食品保鲜界的宠儿,应用广泛,为了高效表达溶菌酶,有关利用基因工程技术构建其基因表达载体的研究较多;鸡卵清溶菌酶的结构研究较为清晰,所以目前将其作为一种模式蛋白研究蛋白质的变性、聚集等特性上的报道较多,具有病理学上的意义。     

马铃薯萌芽出苗期根系对水分胁迫的响应机理分析

【目的】研究马铃薯根系对不同水分胁迫的响应机理。【方法】试验以马铃薯栽培品种‘克新1号’为材料,利用Illumina HiSeqTM 4000高通量测序技术,从转录组水平分析马铃薯萌芽出苗期根系对不同水分胁迫基因的差异表达,分析萌芽出苗期根系对水分胁迫应答的分子机理。【结果】①通过对转录组测序分析,中度水分胁迫样品中获得差异表达基因1 488个,其中上调578个,下调910个,重度水分胁迫样品中获得差异表达基因5 241个,其中上调1 905个,下调3 336个,共同差异表达基因369个,差异基因主要与蛋白激酶、水解酶、氧化还原酶、水通道蛋白、转运蛋白、转录因子等相关;②马铃薯萌芽出苗期根系中谷胱甘肽及其代谢途径参与了抵御水分胁迫处理的正调控;③激素ABA、ET和CKs信号转导被激活,IAA、属于12个家族的107个蛋白磷酸酶基因,可能参与水分胁迫应答,其中丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(PP2C,PP2A)参与了ABA信号转导的调控;④发现了属于54个家族的488个转录因子基因,其中部分转录因子参与水分胁迫应答。【结论】在水分胁迫下,马铃薯萌芽出苗期根系基因出现差异表达,其中部分蛋白激酶、蛋白磷酸酶、氧化还原酶、转录因子及其参与的生物代谢途径和信号转导途径参与了水分胁迫的应答响应。     

pGAP-毕赤酵母表达系统的研究进展

三磷酸甘油醛脱氢酶(GAP)启动子具有很强的组成型表达能力,在近年来广泛应用于巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白。文中通过对pAOX1、pFLD1、pGAP3种表达载体的比较,阐述了pGAP表达系统在生产外源蛋白中的优点及国内外现阶段的相关应用。     

UV-C照射后番茄差异表达基因的基因芯片检测

应用Affymetrix基因芯片研究了4 kJ/m2短波紫外线(UV-C)照射后7 d番茄总基因表达谱的变化情况。结果表明,UV-C照射后7 d,5 177个基因在杂交后发生变化,差异表达变化倍数值在大于2和小于-2范围内基因共481个,其中上调基因331个,下调基因150个。上调基因主要包括细胞壁相关基因、信号转导基因、胁迫相关基因和抗性基因等;下调基因主要包括乙烯相关基因和初级代谢基因等。研究结果为探索采后UV-C照射诱导番茄抗性反应、抑制乙烯合成,从而推迟成熟、延长番茄采后寿命的分子机制提供了基础。     

冠突曲霉flbD基因功能研究

冠突曲霉是茯砖茶上的优势菌,可通过渗透压调控获得纯的无性和有性阶段,是研究真菌产孢的好材料.flbD基因广泛存在于丝状真菌中,是调控丝状真菌无性孢子形成的关键基因.为了探究flbD基因在冠突曲霉(Aspergillus cristatus)发育阶段的功能,以冠突曲霉为试验材料,构建flbD基因敲除载体,利用根癌农杆菌介...