贵长猕猴桃软腐病病原菌分离鉴定及其植物源杀菌剂室内筛选

【目的】明确贵长猕猴桃软腐病致病病原菌,筛选具有防控作用的绿色植物源杀菌剂,为猕猴桃软腐病的绿色防控提供科学依据。【方法】采用组织分离法分离、纯化并结合回接试验确定病原菌。通过形态学和分子生物学对病原进行鉴定,并采用菌丝生长速率法测定6种植物源杀菌剂对病原菌的毒力。【结果】分离获得的8株有效菌株中RF2和RF2-4可引发软腐病,将该菌株的rDNA-ITS序列在NCBI上进行BLAST比对,菌株RF2和RF2-4分别与葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea、拟茎点霉菌Phomopsis sp.同源性达100%和99%,结合RF2和RF2-4病原菌形态特征分析,明确两株致病菌为葡萄座腔菌B.dothidea、拟茎点霉菌Phomopsis sp.。0.5%苦参碱AS对葡萄座腔菌B.dothidea和拟茎点霉菌Phomopsis sp.的EC_(50)分别为0.442mg·L~(-1)和0.322mg·L~(-1),0.3%丁子香酚SL的EC_(50)则分别为0.680mg·L~(-1)和0.301 mg·L~(-1),两者毒力均高于其他植物源杀菌剂。【结论】引起贵长猕猴桃软腐病的病原菌为葡萄座腔菌B.dothidea和拟茎点霉菌Phomopsis sp.;0.5%苦参碱AS和0.3%丁子香酚SL对葡萄座腔菌B.dothidea和拟茎点霉菌Phomopsis sp.菌丝生长具有较强的抑制作用,该研究结果可为贵长猕猴桃软腐病的田间药剂防治提供筛选依据。     

冷藏期内红阳猕猴桃软腐病病原菌的分离与鉴定

为明确导致贮藏期红阳猕猴桃果实软腐的病原菌种类，本研究以冷藏期红阳猕猴桃病果为试材，采用组织块分离法分离软腐病病原菌，按照科赫法则确定分离病株的致病性，同时采用形态学结合分子鉴定技术对病原菌种类进行鉴定。结果表明，共有4种软腐病病原菌被鉴定，分别是拟茎点霉菌（Phomopsis sp.）、间座壳菌（Diaporthe sp.）、互隔链格孢菌（Alternaria alternata）和细极链格孢菌（A. tenuissima）。上述4种病原菌是新鉴定的冷藏期红阳猕猴桃果实软腐病的病原菌，其中细极链格孢菌作为猕猴桃果实软腐病病原菌被首次报道。     

奉新县猕猴桃果实腐烂病病原菌分离鉴定

为明确江西奉新猕猴桃果实腐烂的病原菌种类,对该县猕猴桃烂果进行大量病菌分离,对分离的病菌进行了分子鉴定和致病性测定,结果表明引起奉新猕猴桃烂果的病原菌有6种,分别是葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、富氏葡萄孢盘菌(Botryotinia fuckeliana)、盘多毛孢菌(Pestalotiopsis sp.)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、拟茎点霉菌(Phomopsis sp.)和链格孢菌(Alternaria sp.),其中主要是葡萄座腔菌(分出率占83.0％),其次是拟茎点霉菌(分出率占8.9％).致病性测定结果同时表明葡萄座腔菌既可从果面伤口侵入,也可以从果皮直接侵入,其他5种真菌则只能从伤口侵入.研究结果对奉新猕猴桃烂果病害的防治和进一步研究将具有重要的指导意义.     

猕猴桃果实熟腐病菌生物学特性及其寄主抗病性鉴定研究

为掌握猕猴桃果实熟腐病的发生规律和为其综合防治提供理论依据,对该病害的两种主要病原菌葡萄座腔菌（ Botryosphaeria dothidea）和拟茎点霉菌（ Phomopsis sp．）的生物学特性、寄主范围和猕猴桃品种抗病性进行了鉴定研究,结果表明葡萄座腔菌和拟茎点霉菌均在25℃和pH 7．0的条件下生长最快;适合两者生长的碳氮源种类基本相同;葡萄座腔菌偏好利用马铃薯葡萄糖培养基、胡萝卜培养基和苜蓿煎汁培养基,而拟茎点霉菌偏好利用烟草煎汁培养基。伤口接种试验表明,供试的5科14种植物均能被上述两种病菌感染,都应属于其寄主范围的植物;供试的17个猕猴桃品种,只有3个品种为高抗品种,其余14个为感病品种。     

蓝莓枝干溃疡病病原鉴定及品种抗病性研究

为明确引起蓝莓枝干溃疡病的病原菌,为该病害的田间诊断及综合防治提供参考,采用组织分离法和单孢分离法对引起蓝莓枝干溃疡病的病原菌进行了分离纯化,利用柯赫氏法则、菌落形态特征及核糖体DNA内转录间隔区序列(rDNA-ITS)对菌株进行了分类鉴定,采用活体接种病原菌和病斑长度测量的方法检测了5种蓝莓品种的抗病性。从病枝分离得到疑似病原菌菌株15株(JA1~JA8、JB1~JB7),菌株JA4和JB2均可导致蓝莓枝干溃疡病。rDNA-ITS序列分析和菌落形态学鉴定发现,JA4为拟茎点霉菌(Phomopsis sp.),JB2为葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)。接种试验表明,布里吉塔、蓝丰和蓝美人对枝干溃疡病的抗性没有显著差异。拟茎点霉菌(Phomopsis sp.)和葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)均可以引起蓝莓枝干溃疡病,拟茎点霉菌在春天条件适宜情况下可由花芽侵入,而葡萄座腔菌必须从伤口侵染,两种病原菌也可以产生复合侵染。蓝莓品种布里吉塔、蓝美人和蓝丰等品种抗性强;夏普蓝易受病原菌侵染,抗病性差。     

南疆葡萄采后致病菌分离鉴定及拮抗菌的筛选

[目的]研究葡萄采后致病菌的种类、致病规律和拮抗菌筛选,为葡萄采后保鲜和寻找安全有效的微生物抗菌剂奠定基础.[方法]采用组织块分离法从健康果实和腐烂果实上得到致病菌和拮抗菌,运用平板对峙法检测拮抗菌的拮抗效果.[结果]引起葡萄采后腐烂的病原菌主要是真菌:灰霉、黑曲霉、青霉、根霉、链格孢和拟茎点霉等6个属.其中黑曲霉和根霉是葡萄在常温运输过程中的主要致腐菌,而灰霉、交链孢和青霉是葡萄在低温贮运过程中的主要致腐菌.健康葡萄上分离出7种细菌分离物,5种有明显的拮抗效果,其中细菌2和细菌3的抑菌效果最好.[结论]不同的葡萄品种采后致病菌的种类不同,其致病规律也不同;筛选具有较好抑菌效果的微生物,为生物防治葡萄腐烂提供理论基础.     

四川猕猴桃软腐病防治初步研究

本试验以木霉菌(Trichoderma spp.)为生防筛选材料,针对猕猴桃软腐病(葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea),通过对峙培养、难挥发性代谢产物的拮抗试验以及5种杀菌剂对病原菌的毒力测定,为猕猴桃软腐病生物、化学防治提供参考的理论依据。结果表明,菌株T156-37对葡萄座腔菌的拮抗效果最好,抑制率达到66.11%。木霉菌株T163-8的难挥发性代谢产物对葡萄座腔菌的抑制作用最好,抑制率达到63.26%。25%咪鲜胺在室内生测试验效果显著,其次是30%苯醚甲环唑.丙环唑,EC50(μg/m L)分别是0.3825和10.2351。     

荔枝叶面、花穗和果实上真菌消长动态

用组织分离方法对荔枝不同发育时期和不同部位的致病和非致病真菌进行系统分析,结果分离到14个属的真菌,其中致病菌11种,非致病菌3种.炭疽属Colletotrichum sp.和拟茎点霉属Phomopsis sp.真菌在叶片、花穗和果实上属于常驻菌群;非致病菌壳囊孢属Cytospora sp.真菌全年出现在成熟叶片上,分离频率为43.7%;而芽枝孢属Cladosporium sp.和链格孢属Alternaria sp.真菌在荔枝开花和挂果期广泛分布.茂名地区2009年降雨量为1 396.9mm,当日均降雨量在0.2～12.4 mm区间时,花穗和果柄上链格孢属真菌与日均降雨量呈正相关,一元线性回归方程为y=11.99+2.5 x(r2=0.99,P<0.01),而炭疽菌属、拟茎点霉属、芽枝孢属、白地霉属真菌与日均降雨量相关性不显著.果实上致病菌变化趋势为第2次生理落果期和果实成熟期含有致病真菌最多,采前落果期致病菌分离频率最低.在果实发育过程中,降雨量与其他因素共同作用影响致病菌分离频率.     

木麻黄内生真菌次生代谢产物及生物活性

【目的】分离和鉴定木麻黄Casuarina equisetifolia枝条和果实中的内生真菌,筛选具有抗菌和抗氧化活性的内生真菌。【方法】采用组织块分离法分离木麻黄枝条和果实中的内生真菌,通过菌落观察和分子生物学相结合的方法对分离到的内生真菌进行鉴定;采用薄层层析-生物自显影法测定木麻黄内生真菌次生代谢产物对细菌的抑制活性,采用多孔板-DPPH显色法测定抗氧化活性。【结果】从木麻黄枝条和果实中共分离鉴定得到12株内生真菌,枝条和果实内生真菌存在明显的差异,相同的菌株只有2株,分别为Cef-1(Pseudofusicoccum sp.)和Cef-7(Pestalotiopsis sp.);12株内生真菌分属于9个不同的属中,分别为Pseudofusicoccum、葡萄座腔菌属Botryosphaeria、拟盘多毛孢属Pestalotiopsis、木霉属Trichoderma、曲霉属Aspergillus、裂菌属Rhytidhysteron、拟茎点霉属Phomopsis、镰刀菌属Fusarium和炭疽菌属Colletotrichum。其中,葡萄座腔菌属种类最多,为木麻黄内生真菌的优势种群,其次是拟盘多毛孢属真菌。抗细菌活性的结果表明,Cef-2(Botryosphaeria sp.)表现出最强的抑制活性,对所有供试细菌的抑菌斑直径均大于10 mm,强于阳性对照硫酸链霉素,Cef-1和Cef-9(Fusarium sp.)对青枯病菌Ralstonia solanacearum也表现出较好的抑制活性。内生真菌Cef-2表现出最好的抗氧化活性,IC50为0.80mg/mL。【结论】木麻黄枝条和果实中均存在内生真菌且均以葡萄座腔菌属为优势种群,2个部位真菌的种类存在明显差异。内生真菌Cef-2表现出最强的抗细菌和抗氧化活性,可作为候选菌株进一步分离和鉴定其活性成分。     

浙江省“浙八味”道地药材真菌病害调查及病原鉴定

通过对浙江省磐安地区"浙八味"药材真菌病害进行病原菌分离和鉴定,采用无菌培养基平板分离技术,从药材植物病叶中分离获得病原真菌,构建真菌ITS系统发育树,对病原菌进行分子水平的分类鉴定,并观察病原菌菌落形态及显微结构和形态学鉴定共获得9种病原真菌,分别为链格孢菌(Alternaria sp.)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、球毛壳菌(Chaetomium globosum)、绿色木霉菌(Hypocrea virens)、月状旋孢腔菌(Cochliobolus lunatus)、球孢黑孢霉(Nigrospora sphaerica)、木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)、束状刺盘孢(Colletotrichum dematium)和茎点霉菌(Phoma sp.)。查阅药用植物病原菌记录并结合科赫法则实验,当地药用植物成为3种病原菌的新寄主,分别为月状旋孢腔菌引起的安徽亳州白芍褐斑病、束状刺盘孢引起的磐安阔叶麦冬炭疽病、球毛壳菌引起的早小洋菊叶枯病。     

华东地区蓝莓采后病害病原鉴定及其多样性分析

本试验以采自山东省日照市、青岛市及威海市和浙江省金华市的蓝莓果实为试材,通过对采后病害病原菌的分离、鉴定、致病性测定及多样性分析,探究地区间蓝莓采后病原菌种类及其群落特征。分离鉴定结果表明:引起蓝莓采后病害的病原菌有链格孢(Alternaria alternata)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、根霉(Rhizopus sp.)、黑曲霉(Aspergillus niger)、黑附球菌(Epicoccum nigrum)、小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspora)、拟茎点霉(Phomopsis sp.)、枝状枝孢(Cladosporium cladosporioides)、辐毛小鬼伞(Coprinellus radians)、稻黑孢菌(Nigrospora oryzae)、球黑孢(Nigrospora sphaerica)、棒状拟盘多毛孢(Pestalotiopsis clavispora)等12种真菌。多样性分析结果表明,蓝莓采后病原菌群落多样性丰富,其中链格孢是优势种,灰葡萄孢和根霉是亚优势种;4个采样地蓝莓采后病原真菌群落的多样性存在差异,其中金华地区的多样性指数(H'=1.5540)和均匀度指数(J=0.9658)均最高;4个地区间的蓝莓采后病原菌相似性系数较低,其中日照地区与青岛地区之间的相似性系数最高(Cj=0.4444),威海地区与金华地区之间的相似性最低(Cj=0.1428)。     

广西桉蝙蛾病原真菌的鉴定

【目的】进行广西桉蝙蛾病原真菌的种类鉴定,筛选致病性强的优势菌株,为桉蝙蛾的生物防治奠定基础。【方法】采用常规的组织分离法进行病原菌的分离,对分离纯化获得的菌株进行致病性测定,根据形态特征和rDNA ITS序列分析确定病原菌的分类地位。【结果】从桉蝙蛾虫尸上分离纯化获得206个真菌菌株,这些菌株分属于白僵菌（Beauveria）、镰刀菌（Fusarium）、拟青霉（Paecilomyces）、曲霉（Aspergillus）、青霉（Penicillium）、毛霉（Mucor）和Evlachovaea,其中白僵菌分离率为87.4%,其他真菌分离率较低。经致病性测定,白僵菌是桉蝙蛾幼虫强致病菌,镰刀菌和Evlachovaea是弱致病菌,其他4类真菌为非致病菌。以形态学特征和rDNA ITS序列分析结果为依据,鉴定球孢白僵菌[B.bassiana（Balsamo）Vuillemin]、尖孢镰刀菌（F.oxysporum Schlecht）和Evlachovaea sp.为桉蝙蛾幼虫的致病菌,其中Evlachovaea sp.在中国首次被记载。【结论】广西桉蝙蛾的病原真菌为球孢白僵菌、尖孢镰刀菌和Evlachovaea sp.,其中球孢白僵菌为优势菌,具有较高的开发利用价值。     

高良姜叶枯病病原菌的分离和鉴定

[目的]明确高良姜叶枯病病原菌.[方法]病原菌从高良姜感病组织上分离并依据柯赫氏法则进行致病性测定,病原菌的鉴定主要通过形态鉴定和ITS序列分析.[结果]高良姜叶枯病病原菌确定为可可毛色二孢（Lasiodiplodia theobromae）,属子囊菌门（Ascomycota）,座囊菌纲（Dothideomycetes）,葡萄座腔菌目（Botryosphaeriales）,葡萄座腔菌科（Botryosphaeriaceae）,毛色二孢属（Lasiodiplodia）.[结论]首次报道高良姜叶枯病病原菌为可可毛色二孢.     

枣果病原真菌的分离鉴定及特性分析

对云南省蒙自市6个主要枣树栽培品种储藏期的腐烂果实表面的病原真菌进行分离和鉴定,得到25株优势病原真菌,分别扩增得到核糖体DNA转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列,通过对ITS的生物信息学和系统发育分析,并结合菌落形态特征,鉴定病原真菌分别为链格孢属(Alternaria sp.)、曲霉属(Aspergillus sp.)、葡萄座腔菌属(Neofusicoccum sp.)和脉纹孢菌属(Neurospora sp.)。     

石榴病原菌与病害研究综述

综述了国内外石榴的主要病原菌种类及其病症.主要包括：甘薯长喙壳（Ceratocstis fimbriata Ellis＆Halsted）与石榴枯萎病;石榴鲜壳孢（Zythia versoniana Sacc.）或石榴壳座月孢[Coniella granati（Sacc.） Petr.＆Syd.]、Phomopsis sp.与石榴干腐病;腐皮镰刀菌[Fusarium solani（Mart.） Sacc.]与石榴根腐病;石榴痂圆孢菌（Sphaceloma punicae Bitanc et Jank.）、小穴壳菌（Dothiorella sp.）与疮痂病;石榴生尾孢霉菌（Cercospora punicaeP.Henn）与褐斑病;厚盘单毛孢（Monochaetia pachyspora Bubak）与圆斑病;葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）、产紫青霉（Penicillium purpurogenum）、黑曲霉（Aspergillus niger）与果腐病;极细枝孢（Cladosporium tenuissimum Cooke）与叶霉病.     

湖北武汉茶树内生真菌多样性及种群结构

为了解武汉地区茶树内生真菌的多样性,从鄂茶1号、鄂茶5号、福鼎大白茶的茎、叶共210个组织块中,分离获得166株内生真菌菌株。结果表明,茶树受内生真菌侵染程度较高,74.29%的组织有内生真菌存在。根据r DNA-ITS系统发育分析,从中分离鉴定内生真菌15属,27个分类单元,主要有链格孢(Alternaria)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria)、刺盘孢(Colletotrichum)、间座壳属(Diaporthe)、镰孢霉(Fusarium)、赤霉(Gibberella)、小从壳菌(Glomerella)、球座菌(Guignardia)、新壳梭孢菌(Neofusicoccum)、拟盘多毛孢(Pestalotiopsis)、拟茎点霉(Phomopsis)、格孢腔菌(Pleosporales)、拟青霉(Paecilomyces)、腐霉(Pythium)、丝核菌(Rhizoctonia)和2种未知真菌。根据相对频率,葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、盘长孢状刺盘孢(Colletotrichum gloeosporioides)、芒果球座菌(Guignardia mangiferae)等在茶树中比较常见。不同组织部位、不同品种内生真菌分布及组成存在差异,表现出较丰富的多样性。     

麻江县蓝莓重要病虫害的种类调查和病原鉴定

2015年5月,贵州省黔东南州麻江县蓝莓种植地发生2种重要真菌病害和1种鳞翅目幼虫导致的虫害,采用ITS保守序列测序和形态学鉴定的方法对菌株进行鉴定。结果表明,病原菌为乌饭树拟茎点霉（Phomopsis vaccinii）和葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea),其导致的真菌病害分别为蓝莓枝枯病和果腐病;害虫为绿尾大蚕蛾（Actias selene ningpoana Felder）的幼虫。     

猕猴桃果实贮藏期主要真菌病害的rDNA-ITS鉴定及序列分析

【目的】对陕西省周至县猕猴桃主栽品种‘华优’、‘海沃德’及‘秦美’贮藏期霉烂果实中的病原菌进行分离与鉴定,分析比较病原菌rDNA-ITS序列的差异和种内与种间群体分化状况,确定优势菌,为病害防治提供依据。【方法】采用病原菌形态鉴定与rDNA-ITS鉴定相结合的方法,确定引起猕猴桃霉烂的病原菌种类;通过构建系统发育树,分析病原菌种之间的亲缘关系。【结果】从贮藏期霉烂的猕猴桃果实中共分离出30株病原菌,主要为青霉属（Penicillium）、木霉属（Trichoderma）、交链孢霉属(Alternaria) 、毛霉属（Mucor）、拟青霉属(Simplicillium)等5个属。其中青霉属（Penicillium）19株占63.3%,为优势菌,包括Penicillium sp. 、Penicillium chrysogenum、Penicillium paneum、Penicillium purpurogenum和Penicillium commune;木霉属（Trichoderma）8株占26.7%较次之,包括Trichoderma longibrachiatum和Trichoderma sp;交链孢霉属(Alternaria) 、毛霉属（Mucor）、拟青霉属(Simplicillium)各1株,各占3.3%;聚类分析表明,30株病原聚为五大类群。【结论】引起陕西省周至县‘华优’、‘海沃德’和 ‘秦美‘猕猴桃贮藏期果实霉烂优势病原菌为Penicillium sp.、Penicillium chrysogenum、Penicillium paneum、Penicillium purpurogenum和Penicillium commune;rDNA-ITS区序列在青霉菌属内种间差异鉴别具有较高的参考价值。     

越冬前北京和云南葡萄溃疡病组织内相关真菌的鉴定

为了解我国不同地区在冬季修剪窗口期葡萄枝干组织中与葡萄溃疡病相关的病原微生物的种类,探索葡萄溃疡病组织中病原微生物的年周期变化,从栽培和植保角度制定防控措施,采用微生物分离、生物学特性观察,以及ITS测序的方法,对北京和云南葡萄溃疡病组织内相关真菌进行分离和鉴定。从北京的材料中分离鉴定出5种真菌:45.0%葡萄座腔菌属(Botryosphaeria),30.0%镰刀菌属(Fusarium),15.0%刺盘孢属(Colletotrichum),7.5%木霉属(Trichoderma),2.5%茎点霉属(Phoma);从云南的材料中分离鉴定出7种真菌,32.0%茎点霉(Phoma),27.0%壳囊孢属(Cytospora),14.0%拟茎点霉属(Phomopsis),14.0%葡萄座腔菌属(Botryosphaeria),4.5%附球菌属(Epicoccum),4.5%镰刀菌(Fusarium),4.5%链格孢属(Alternaria)。研究结果首次揭示出北京和云南葡萄越冬前溃疡病组织具有多种植物病原微生物共同存在的特征及主要相关真菌的种类。     

蓝莓采后病原真菌的分离鉴定及抑制研究

以兔眼蓝莓(品种名为灿烂)为材料,采用组织分离法从自然腐败蓝莓中分离、纯化病原真菌,通过形态学观察及分子生物学技术进行鉴定,并考察肉桂醛、柠檬醛、牛至精油、香芹酚和丁香酚等对4种病原菌的抑制效果。结果表明,分离得到6株病原真菌,分别为1株稻黑孢霉(Nigrospora oryzae)、1株青霉属(Penicillium sp.)、3株枝孢属(Cladosporium sp.)和1株链格孢属(Alternaria sp.)真菌,经致病性试验确定链格孢霉为主要病原菌。牛至精油对4种病原真菌均具有较好的抑制效果,对链格孢霉的半最大效应浓度(EC_(50))为37 mg/L。