组蛋白去乙酰化酶在杨树根再生和生长中的功能

组蛋白去乙酰化酶(HDAC)在植物生长和发育过程中具有十分重要的调控作用。目前,关于HDAC的研究主要集中在草本植物,而关于木本植物的HDAC功能研究鲜有报道。以84 K杨(银白杨×腺毛杨)和小黑杨2种杨树组培苗为供试材料,在培养基中添加0、1、5μmol/L浓度的组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(TSA),研究TSA对杨树根再生和生长的影响。结果表明,TSA处理明显抑制2种杨树根的再生和生长,TSA浓度越高,对组培苗根的再生和生长的抑制作用越大。研究结果对于通过根系改良提高杨树对水分和营养物质的利用率、增强杨树抗逆性具有十分重要的意义。     

5-Aza-CdR 联合TSA对牛核移植胚胎体外发育及表观遗传状态的影响

【目的】探讨5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2-′Deoxycytidine,5-Aza-CdR)联合曲古抑菌素A(Trichosta-tin A,TSA)对牛核移植胚胎体外发育及其表观遗传状态的影响。【方法】以体外受精胚胎作为对照组,将部分体细胞、核移植胚胎以及体细胞联合核移植胚胎用5-Aza-CdR+TSA(5-Aza-CdR:20 nmol/L,72 h;TSA:50 nmol/L,12 h)进行处理,统计核移植胚胎体外发育率,并对2-细胞、8-细胞和囊胚阶段胚胎进行DNA甲基化和组蛋白乙酰化检测,研究5-Aza-CdR+TSA处理对核移植胚胎体外发育及其表观遗传状态的影响。【结果】与对照组相比,5-Aza-CdR+TSA单独处理供体细胞和核移植胚胎均可以显著提高克隆胚胎的囊胚发育率和囊胚细胞数(P<0.05);供体细胞和核移植胚胎均用5-Aza-CdR+TSA处理后,核移植胚胎体外发育能力进一步提高,囊胚发育率显著高于单独处理供体细胞或核移植胚胎组(P<0.05)。免疫荧光检测发现,体细胞和核移植胚胎均用5-Aza-CdR+TSA处理,不但显著降低了2-细胞和8-细胞阶段DNA甲基化水平,而且也显著增加了组蛋白乙酰化水平(P<0.05),使核移植胚胎附植前各发育阶段的表观遗传状态更接近于体外受精胚胎。【结论】5-Aza-CdR联合TSA处理供体细胞和核移植胚胎可以更明显地提高克隆胚胎的体外发育能力,改变核移植胚胎的DNA甲基化和组蛋白乙酰化水平,使它们的表观遗传状态及体外发育率更接近于体外受精胚胎。     

细胞骨架抑制剂对狂犬病病毒感染人神经瘤细胞的影响

为检测细胞骨架抑制剂对狂犬病病毒(RABV)感染细胞的抑制作用,筛选了秋水仙素(Col)和细胞松弛素D(CytoD)2种骨架特异性抑制剂在人神经瘤细胞SH-SY5Y上的适宜浓度,探讨其对RABV感染及复制的影响。结果表明:随着细胞骨架抑制剂浓度的升高,微管和微丝的破坏加剧;当Col浓度分别为0.065 mmol/L和0.130 mmol/L及CytoD浓度分别为0.25μg/mL和0.50μg/mL时,微管、微丝结构及细胞活力均与对照组无显著差异(P0.05),2种骨架抑制剂对RABV的感染及复制均有抑制作用。通过对RABV培养物的OD值和G基因mRNA的定量检测,发现CytoD对RABV感染的抑制作用较Col更明显,Col对RABV复制的抑制作用较CytoD更明显。     

维生素B 17对HepG2细胞体内外生长的影响

分别通过体外培养和体内接种试验,探讨维生素B-17对HepG2细胞体内外生长的影响。结果表明:体外试验中,当维生素B-17的添加量为1.3 g/L时,HepG2细胞生长抑制率仅为5.62%;当添加量为10.5 g/L时,抑制率增加到30.99%;当添加42 g/L时,抑制率达到56.30%。体内试验低质量浓度和中质量浓度组瘤块生长抑制均不明显,与对照组相比差异不显著(P>0.05);高质量浓度组对肿瘤生长抑制作用最好,与对照组相比差异显著(P<0.05)。说明高质量浓度的维生素B-17对HepG2细胞体内外生长均有抑制作用。     

EPF单抗联合顺铂对家畜膀胱肿瘤抑瘤效果的影响——基于膀胱肿瘤裸鼠移植瘤模型

为观察早孕因子单克隆抗体(EPF-McAb)联合顺铂(DDP)对膀胱癌细胞EJ裸鼠移植瘤的抑制作用,常规将EJ细胞接种于裸鼠右侧背部皮下,待肿瘤长至直径约5 mm时随机分为4组,每组5只,即空白对照组、顺铂组、低剂量单抗联合组和高剂量单抗联合组。定期测量裸鼠肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。给药2周后处死裸鼠,剥取肿瘤,称瘤重,计算抑瘤率。通过苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察细胞病理学改变;免疫印迹法检测早孕因子(EPF)的表达情况。结果表明,顺铂组、低剂量单抗联合组和高剂量单抗联合组裸鼠移植瘤生长速度均慢于空白对照组。与顺铂组比较,低剂量单抗联合组和高剂量单抗联合组裸鼠末次给药的移植瘤体积分别为(131.05±8.26)和(97.92±7.35)mm³。低剂量单抗联合组抑瘤率(35.78%)和高剂量单抗联合组抑瘤率(53.04%)均高于顺铂组抑瘤率(22.36%),差异均达显著水平(P<0.05)。与空白对照组比较,单抗联合组裸鼠EPF蛋白的表达量下降(P<0.05)。表明EPF-McAb联合顺铂可抑制膀胱癌细胞EJ在裸鼠体...     

脱氧核酶对端粒酶hTERT mRNA的切割以及对鼻咽癌细胞凋亡相关基因的影响

目的:探讨脱氧核酶对端粒酶蛋白亚基hTERTmRNA的切割作用及对人鼻咽癌细胞凋亡相关基因表达的影响。方法:针对hTERT基因的核苷酸序列,合成“10～23”型脱氧核酶及其类似物,提取总RNA在体外切割hTERTmRNA;转染鼻咽癌细胞后,用RT-PCR扩增hTERT基因片段,用PCR-ELISA法测定端粒酶活性,用RT-PCR和荧光免疫测定凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果:未经修饰的脱氧核酶DzT和在DzT的3'末段添加倒位连接T碱基的脱氧核酶DzTi在体外能够有效地切割hTERTmRNA;在转染鼻咽癌细胞后,DzTi比DzT对hTERTmRNA表现出更强的切割作用,DzTi能够显著地降低鼻咽癌细胞端粒酶活性(P<0.01)、抑制鼻咽癌细胞的生长(P<0.05)和bcl-2基因的表达(P<0.05),上调bax基因的表达(P<0.05)。DzT和DzTi的催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzT'和DzTi'在体外和胞内均不表现对hTERTmRNA的切割作用。结论:人工合成的脱氧核酶确实能够高效特异地切割端粒酶hTERTmRNA,并降低鼻咽癌细胞的端粒酶活性,促进鼻咽癌细胞凋亡。作为一种新发现的催化性核酸,脱氧核酶在肿瘤的基因治疗领域中将具有极其重要的应用价值。     

纳米二氧化硅对体外培养HaCaT细胞凋亡的影响

[目的]比较不同粒径(15、30、100 nm)纳米二氧化硅(nano-SiO2)和常规二氧化硅(Micro-SiO2)对人皮肤表皮细胞(HaCaT)生长的抑制作用及凋亡的影响。[方法]采用不同浓度(2.5、5、10μg/ml)不同粒径(15、30、100 nm)的nano-SiO2和10μg/ml的Micro-SiO2(1～5μm)染毒体外培养的HaCaT细胞24 h,同时设溶剂对照组(nano-SiO2和Micro-SiO2的分散液染毒组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测HaCaT细胞暴露于不同浓度、不同粒径的nano-SiO2后的细胞活力,用Annexinⅴ-PI双染法和Hoechest33342染色法测定细胞凋亡情况;使用2’,7’-二乙酰二氯荧光素荧光探针检测细胞内活性活性氧(ROS)水平。[结果]不同粒径的nano-SiO2纳米对HaCaT细胞的半数抑制浓度分别为(19.4±1.3)、(27.7±1.5)、(35.9±1.6)μg/ml。当染毒浓度固定时,随着nano-SiO2粒径的减小,凋亡率逐渐增加。当粒径固定时,胞内ROS的水平也随着nano-SiO2浓度的增大而增高。相关分析表明,细胞存活率和凋亡率与胞内活性氧的水平的相关性分别为-0.952和0.898(P<0.01)。[结论]nano-SiO2能抑制HaCaT细胞生长并可诱导其凋亡,这种现象的发生可能与胞内产生的活性氧水平有关。     

大豆黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析

目的：体外观察大豆黄酮对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及酶动力学分析以确定其抑制作用类型。方法：利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化．获得重组人CK2的α^ 及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶．并测定大豆黄酮对酶的抑制作用及采用IC50结果的回归方程分析其动力学。结果：大豆黄酮能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IS50=2．38μmol／L),抑制作用明显强于已知的CK2抑制剂5,6-二氯-1-β-D-呋哺核糖苯并咪唑(DRB)和N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3)。酶动力学分析表明,大豆黄酮与ATP(Ki=3．02μmol／L)及酪蛋白(Ki=2．22μmol／L)均呈混合型抑制CK2的活性。结论：大豆黄酮是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂。     

茶树油提取物对Lewis肺癌细胞活性及其移植瘤生长的影响

茶树油主要由萜类物质组成,具有抗菌消炎、抗病毒等作用。松油烯-4-醇是茶树油的主要成分之一,不同提取工艺下茶树油中松油烯-4-醇与异松油烯所占比例相差较大。利用Lewis肺癌(lewis lung cancer, LLC)细胞及其小鼠移植瘤模型,评价6种茶树油提取物的抗肿瘤作用,为茶树油提取物在肺癌治疗中的应用提供理论依据。用不同浓度(0.1%、0.05%、0.01%)的茶树油提取物处理LLC细胞24 h, MTT法检测细胞活性;建立C57BL/6小鼠LLC移植瘤模型,茶树油提取物瘤内或腹腔注射,每天1次,连续5 d;另设阴性和环磷酰胺阳性对照组。通过测量肿瘤体积计算抑瘤率。结果表明：6种茶树油提取物均能显著降低LLC细胞活性,抑制顺序由大到小为提取物2、5、6、4、1、3。6种茶树油提取物均能抑制小鼠LLC移植瘤生长。瘤内注射时肿瘤抑制作用由大到小为提取物4、2、6、1、5、3,腹腔注射时抑制作用由大到小为提取物4、2、6、3、5、1。综合而言,6种茶树油提取物均能不同程度地抑制小鼠LLC细胞及其移植瘤的生长,松油烯-4-醇或异松油烯为主的茶树油均可抑制LLC细胞及其移植瘤的生长。     

胞外ATP对胡杨细胞囊泡运输的影响

在植物中,胞外ATP(eATP)作为一种重要的信号分子,调控植物的生长、发育及逆境响应等多种生命活动。这些植物细胞的生命活动与囊泡运输密切相关,然而,eATP是否对植物细胞的囊泡运输具有调控作用尚不清楚。本文利用能够标记囊泡运输的荧光染料FM1-43研究了eATP对胡杨细胞囊泡运输的影响。FM1-43染色结果显示,50 mol/L eATP对胡杨细胞胞吞作用不明显,而高浓度的eATP(200、400 mol/L)则会抑制其胞吞作用,其抑制作用与eATP浓度呈正相关。高浓度的eATP(200、400 mol/L)同样抑制胡杨细胞胞吐作用。而不同浓度的ADP(50、200、400 mol/L)处理则对胡杨细胞囊泡运输无明显影响。这说明高浓度eATP对胡杨细胞囊泡运输的抑制作用不是源于eATP的水解产物,而是来自于其本身的信号作用。药理学实验发现,ATP受体抑制剂PPADS(100 mol/L)能抑制高浓度eATP对胡杨细胞囊泡运输的限制作用,说明eATP是通过嘌呤受体介导的信号通路调控囊泡运输过程。但值得注意的是,嘌呤受体的另一种抑制剂suramin(100 mol/L)却对eATP的抑制作用不明显,因为suramin处理胡杨细胞后eATP(200 mol/L)仍能抑制囊泡运输。这说明在胡杨细胞中某一类与P2X同源的受体介导了高浓度eATP对囊泡运输的抑制作用。综上,eATP作为信号分子可调控胡杨细胞的囊泡运输,并且高浓度eATP对胡杨细胞的囊泡运输具有负调控作用。      

氰氨态氮的硝化抑制效应及其在农田的应用

本文探讨了氰氨态氮的硝化抑制效应,比较了氰胺和双氰胺在农田的使用效果。研究结果表明,氰胺和双氰胺都能抑制硝化作用,从而提高氮肥利用率。在水田土壤中,氰胺的分解速度比双氰胺缓慢,硝化抑制效应持续时间较长,其增效作用比双氰胺大;在旱田土壤则相反,双氰胺的硝化抑制效应大于氰胺。在正常的条件下,氰胺是氰氨化钙分解的主要产物。试验结果表明,氮肥与氰氨态氮的配合比例以5:1～3:1为宜。在多数情况下,这个浓度水平对作物无害,并能充分发挥增效作用。同时,在水田土壤中,氮肥与氰氯化钙配施,其增效作用比双氰胺大,而成本却比双氰胺为低。     

猪精原干细胞体外培养条件的优化

以出生后1～5 d的长白公猪为主要研究对象,采用两步酶消化法获取睾丸细胞悬液,用Percoll不连续密度梯度法对猪精原干细胞(PSSCs)进行纯化,以碱性磷酸酶(AP)染色鉴定;利用MTT法检测2种细胞因子——胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和白血病抑制因子(LIF)对PSSCs发育的影响.结果表明:用Percoll不连续密度梯度法获得的PSSCs占睾丸总细胞数的(8.19±0.83)%,AP染色的阳性率为(87.47±2.90)%,表明该方法可有效获取PSSCs;MTT法检测表明,20 ng.mL-1 GDNF+1 000 U.mL-1 LIF的组合添加对PSSCs体外增殖的效果最好.     

PDTC和顺铂对人鼻咽癌细胞株CNE1、CNE-GL、CNE2Z的联合作用

目的观察PDTC和顺铂（DD）对人鼻咽癌细胞株CNE1、CNE1-GL、CNE2Z的联合抑制效应。方法单独及联合应用PDTC和DDP处理后,采用MTT法测定CNE1、CNE1-GL、CNE2Z细胞的生长抑制效应。采用直线回归法求出中效浓度,利用中效原理计算联合用药指数。结果在实验剂量范围内,单独及联合应用PDTC和DDP的生长抑制效应具有剂量依赖性。对CNE1细胞,药物效应（抑制率）大于85%时,具有协同作用（CI〈l）;对CNE1-GL、CNE2Z细胞,两药合用具有拮抗作用。结论单独及联合应用PDTC和DDP对CNE1、CNE1-GL、CNE2Z具有生长抑制作用,两药联用对CNE1细胞具有协同作用。     

猪生长及胴体性状3个相关基因座遗传效应

 【目的】研究猪生长性状相关基因多态性,各多态位点对猪生长及胴体性状的影响,为分子标记辅助选择提供依据。【方法】采用PCR-RFLP方法分析PIT1、HDAC1、IGF2 基因在不同品种酶切位点多态性,分析不同基因型对生长与胴体性状的遗传效应。【结果】PIT1基因C等位基因、HDAC1基因G等位基因、IGF2基因A等位基因均有显著提高生长的效应,达100 kg活重所需时间一般可缩短6～9 d。PIT1基因C等位基因、HDAC1基因G等位基因、IGF2基因A等位基因提高瘦肉率3～5个百分点、背膘厚降低2～3 mm,生长性能指数得到相应提高。【结论】上述基因的有利等位基因有可能在选种中作为分子标记。     

脲酶抑制剂对尿素在土壤中分解速度的影响

选用酚类、醌类和盐类化学药剂以及农副产品下脚料等28种物质作为脲酶抑制剂进行室内比较试验,筛选出醌氢醌,1,4-对苯二酚、邻苯二酚、对苯醌、C-F-1、CuSO_4·5H_2O、烟碱、石灰氮、双氰胺和蓖麻叶等10种抑制率较高(平均达44.82%)的脲酶抑制剂。试验结果还表明,同一种抑制剂在 pH7.0～8.0条件下抑制率较高;抑制剂的抑制率随着尿素用量的增加而降低,而随着培养温度的升高而提高。     

3种磷酸二酯酶对小鼠卵母细胞自发成熟的影响

为探讨和比较磷酸二酯酶(PDE)3、4和5对小鼠卵母细胞体外自发成熟的影响,将小鼠卵丘卵母细胞复合体(COCs)和裸卵(DOs)分别培养在含有或不含有PDE 3、4和5特异性抑制剂的M-199培养液中。结果表明:PDE3的特异性抑制剂cilostamide和PDE5的特异性抑制剂zaprinast均能显著抑制小鼠COCs和DOs的自发成熟,且其抑制效应不随培养时间的延长而减弱,但却是可逆的;而PDE4的特异性抑制剂rolipram对小鼠COCs和DOs没有影响。上述结果提示,不同亚型的PDE在小鼠卵母细胞减数分裂过程中具有不同的调节作用。     

产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8复配对棉花的解盐促生作用

[目的]为微生物菌剂的产品开发和应用提供理论依据。[方法]将产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8按不同比例复配,研究不同复配组合对棉花的解盐促生作用及其对立枯丝核菌的抑菌效果。[结果]产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8按1∶（1～2）复配时,对立枯丝核菌具有很好的抑菌效应;两者按1∶（1～2）复配浸种的棉花种子的发芽率为86.67%（是对照组的1.49倍）,盆栽试验中棉花种子的发芽率和成苗率分别达到60.00%和50.00%,分别是对照组的1.50和1.67倍。[结论]产酸克雷伯氏菌Rs-5与枯草芽孢杆菌组合BCL-8按适当比例复配对盐胁迫条件下的棉花具有显著的促生作用。     

牛耳枫提取物对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用

 【目的】筛选对甜菜夜蛾（Spodoptera exigua（Hübner)）酚氧化酶具有高抑制活性的化合物,寻找新型害虫控制剂的线索。【方法】以牛耳枫（Daphniphyllum calycinum Benth.）提取物Deoxycalyciphylline B和Methyl homosecodaphniphyllate为抑制剂,采用酶标仪微量法研究了其对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制活性及抑制类型。【结果】Deoxycalyciphylline B和Methyl homosecodaphniphyllate对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制中浓度(IC50)分别为2.439 mmol?L-1和0.879 mmol?L-1,2种化合物均为典型的可逆竞争型抑制剂,抑制常数（Ki）分别为2.051 mmol?L-1和1.269 mmol?L-1。【结论】2种生物碱对甜菜夜蛾酚氧化酶具有较好的抑制活性,可以以这2种化合物或其类似物为模板指导酶抑制剂的分子设计,是寻找新型害虫控制剂的重要途径。     

石灰性土壤中不同硝化抑制剂的抑制效果及其对亚硝态氮累积的影响

 【目的】比较不同硝化抑制剂3, 4-二甲基吡唑磷酸（DMPP）、双氰胺（DCD）、2-氨基-4-氯-6-甲基吡啶（AM）和硫脲（TU）在石灰性土壤中的抑制效果,明确其对土壤中亚硝态氮累积的影响。【方法】采用室内培养的方法,比较了硝化抑制剂对石灰性土壤中铵态氮、硝态氮、亚硝态氮、pH、表观硝化率和硝化抑制率的影响。【结果】施用TU和未施用硝化抑制剂的土壤在培养初期（1—3 d）出现了亚硝态氮的累积。TU的施用导致土壤pH下降至硝化作用适宜的范围,从而促进了硝化作用进程;施用硝化抑制剂DMPP、DCD和AM的土壤几乎未检测到亚硝态氮,且硝化抑制效果明显,硝化过程延滞35—39 d。硝化抑制率强弱顺序10%DCD＞1%DMPP＞5%AM（这里的数值代表硝化抑制剂的施入量占施入纯N量的百分比）。【结论】DMPP、DCD和AM的施用能显著抑制亚硝态氮的产生,并能显著抑制硝化作用进程（P＜0.01）;相反,TU的施用却促进了硝化作用的进程。供试的4种硝化抑制剂中,以10%DCD（纯N含量）处理的硝化抑制率最高,其次是1%DMPP。     

抑制剂和激活剂对梨星毛虫中肠蛋白酶活性的影响

旨在研究不同抑制剂和激活剂对梨星毛虫Illiberis pruni中肠蛋白酶活性的影响。利用生化技术分别测定梨星毛虫幼虫不同龄期的4种中肠蛋白酶（总蛋白酶、强碱性胰蛋白酶、弱碱性胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶）活性,进而在最适龄期（4龄幼虫）测定蛋白酶激活剂（EDTA,MgCl₂,EGTA,CaCl₂）和抑制剂（PMSF,TPCK,STI,TLCK,IAA,DTT）对梨星毛虫中肠蛋白酶活性的影响。结果表明：梨星毛虫幼虫中肠总蛋白酶、强碱性胰蛋白酶、弱碱性胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶均在4龄具有最高酶活性。所有试剂均对总蛋白酶有激活作用;5 mmol/L CaCl₂对强碱性胰蛋白酶抑制作用最高;对弱碱性胰蛋白酶有抑制作用的仅有5 mmol/L DTT;对胰凝乳蛋白酶抑制效果最佳的为10 mmol/L EGTA。所筛选的对梨星毛虫主要中肠蛋白酶具有抑制作用的抑制剂,对以昆虫中肠蛋白酶为靶标的绿色害虫防控技术的开发具有参考价值。