川芎的组织培养技术研究

探索川芎的不同组培条件,优化其诱导和分化培养基。以川芎根、茎段和叶片作外植体进行组织培养,获得了大量的组培苗,建立了相应的植株再生系统。川芎根诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 1.2 mg/L;茎段及叶片诱导愈伤组织的最佳培养基均为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L;根愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+6-BA 2.2 mg/L+IAA 0.3 mg/L;茎段及叶片愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+KT 2.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L。根外植体在愈伤组织、分化不定芽和生根方面的诱导率分别为84%、86%和87%;茎段和叶片愈伤组织的诱导率达到92%和96%,其不定芽分化率为98%,生根率为93%。经炼苗后,获得的组培苗的移栽成活率达98%。提出了优化激素搭配的培养基,得到了高效的诱导率、分化率和生根率。     

邓恩桉下胚轴不定芽再生体系建立的影响因素

以邓恩桉种子萌发的实生苗下胚轴为材料,研究了不同激素种类与浓度及多胺对下胚轴经愈伤组织阶段产生不定芽过程的影响,以建立一种下胚轴不定芽再生快繁体系。结果表明,以MS为基本培养基,在培养基中添加2,4-D 1.0¹.5 mg/L可诱导邓恩桉下胚轴产生高质量的愈伤组织;愈伤组织增殖的适宜培养基为MS+TDZ 0.51.5 mg/L可诱导邓恩桉下胚轴产生高质量的愈伤组织;愈伤组织增殖的适宜培养基为MS+TDZ 0.5¹.0 mg/L,愈伤分化产生不定芽的适合培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L+腐胺151.0 mg/L,愈伤分化产生不定芽的适合培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L+腐胺15²5 mg/L,愈伤不定芽分化率达77.1%25 mg/L,愈伤不定芽分化率达77.1%⁷9.2%,且外植体褐化率得以降低。愈伤组织块移入分化培养基初期,379.2%,且外植体褐化率得以降低。愈伤组织块移入分化培养基初期,3⁷ d暗培养可使愈伤不定芽分化率提高到82.8%以上。     

黑莓叶片组织培养及植株再生的初步研究

以美国黑树莓叶片作为外植体,以MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA、NAA或IAA进行愈伤组织诱导及植株再生试验.结果表明:树莓叶片外植体在培养基MS+6-BA 2.0～ 4.0 mg/L+NAA(IAA)0.01～0.5 mg/L都能不同程度地形成愈伤组织 ,但以MS+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L和MS+6-BA 4.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L愈伤组织的诱导率最高,诱导率可达100%;所试验的各种不定芽分化培养基,都能不同程度地诱导愈伤组织分化出不定芽,在添加6-BA 2.0 mg/L和NAA 0.01 mg/L的MS培养基上,愈伤组织分化不定芽的比例最高,达49.7%的;所产生的不定芽在1/2 MS+NAA 0.1 mg/L的培养基上的生根率可达89.3%.     

辣木离体再生体系的建立

以辣木种子为外植体,诱导获得无菌苗,然后通过用无菌苗的嫩茎诱导愈伤组织分化不定芽,再将不定芽诱导生根,获得完整植株,建立辣木的离体再生体系。结果表明,适合辣木种子诱导无菌苗的培养基为MS_0,诱导率达95%;适合无菌苗茎段诱导愈伤组织的培养基为MS+2,4-D 0.8 mg/L+KT 0.2 mg/L,诱导率达87.03%;适合愈伤组织分化不定芽及不定芽增殖的培养基为改良MS+6-BA0.6 mg/L+IAA 0.2 mg/L,芽分化率达83.33%,芽增殖系数达4.2;适合不定芽生根的培养基为1/3MS+IBA0.5 mg/L+NAA0.2 mg/L,生根率达92.7%,平均根数达5.78。     

邓恩桉下胚轴不定芽再生体系建立的影响因素

以邓恩桉种子萌发的实生苗下胚轴为材料,研究了不同激素种类与浓度及多胺对下胚轴经愈伤组织阶段产生不定芽过程的影响,以建立一种下胚轴不定芽再生快繁体系。结果表明,以MS为基本培养基,在培养基中添加2,4-D 1.0~1.5 mg/L可诱导邓恩桉下胚轴产生高质量的愈伤组织;愈伤组织增殖的适宜培养基为MS+TDZ 0.5~1.0 mg/L,愈伤分化产生不定芽的适合培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L+腐胺15~25 mg/L,愈伤不定芽分化率达77.1%~79.2%,且外植体褐化率得以降低。愈伤组织块移入分化培养基初期,3~7 d暗培养可使愈伤不定芽分化率提高到82.8%以上。     

甘菊下胚轴离体再生体系的建立

以甘菊下胚轴为外植体,通过器官发生途径诱导不定芽分化,建立了甘菊下胚轴高效再生体系,为甘菊遗传转化体系的建立奠定了基础。结果表明:将甘菊种子播种于MS培养基上,置于黑暗条件下培养7 d可以迅速获得大量下胚轴;下胚轴在MS+1.0 mg/L 2, 4-D+0.5 mg/L 6-BA的培养基上培养15 d后,愈伤组织形成率最高为8666%,愈伤组织呈淡黄色,大小一致;将愈伤组织转接到MS培养基中培养30 d左右即可分化不定芽,不定芽分化率达25.50%,平均每个外植体产生不定芽数目为4.25个;不定芽在添加0.1 mg/L NAA的1/2 MS培养基中培养15 d后,生根率达到100%。生根试管苗出瓶后,经过适宜培养,均可以获得健壮的开花植株。      

罗汉果叶片离体再生快繁技术

以罗汉果叶片为外植体,探讨不同培养方式、不同激素组合对愈伤组织诱导和不定芽分化的影响,以期建立起稳定高效的罗汉果叶片离体再生快繁体系.结果表明:罗汉果叶片在培养基MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.7 mg/L上培养4周,愈伤组织的诱导率在90%以上;罗汉果愈伤组织在培养基MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L+TDZ 0.1 mg/L上不定芽的分化率可达70%,平均出芽指数达3.7;罗汉果试管苗在培养基MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L上芽增殖比较稳定,在培养基MS+IBA 0.1 mg/L上培养2周开始分化不定根,生根率在90%以上.     

大幅度提高马齿苋组培效率的培养环境条件优化

为了提高马齿苋的组培效率,解决马齿苋出愈时间迟、愈伤组织诱导率不高、愈伤组织诱导需要使用2,4-D、不定芽增殖来源有限等问题,根据马齿苋的最适生长条件,将组织培养环境调整为温度(30±1)℃、全光照,并从无菌苗上直接取材进行外植体培养。结果表明:种子在高温、全光照条件下萌发快,且无菌苗长势好。取材于无菌苗上的根、茎和叶均可以在不添加2,4-D的MS培养基中脱分化形成愈伤组织,且茎在MS+NAA 1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L培养基中、叶在MS+NAA 1.5 mg/L+6-BA 0.5~1.5 mg/L培养基中的初始出愈时间均提前至4 d,且诱导率均达到100%,愈伤组织长势旺盛。带腋芽的茎段在MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 5.0 mg/L培养基中可以直接分化出大量不定芽,增殖率达10.5。在最适光温环境下,马齿苋外植体出愈迅速,愈伤组织诱导率和不定芽增殖率大幅度提高。     

秘鲁番茄高效再生体系的研究

以秘鲁番茄的叶片和茎段为外植体,研究不同外植体种类、激素配比对秘鲁番茄愈伤组织诱导、分化和不定芽生根的影响,以期建立秘鲁番茄组织培养高效再生体系。结果表明:秘鲁番茄的叶片较茎段更适宜愈伤组织诱导与分化,以叶片为外植体时,最佳愈伤组织诱导培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA,愈伤组织诱导率高达100.0%;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA,不定芽的分化率高达92.4%。以茎段为外植体时,最佳诱导愈伤培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.1 mg/L IAA,愈伤组织诱导率高达95.8%;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA,不定芽的分化率高达86.5%。不定芽最适宜的生根培养基为MS+1.0 mg/L NAA,生根率达100.0%。采用草炭土+珍珠岩(体积比1∶1)的混合基质作为移栽基质,移栽成活率可达90%以上。     

盆栽安祖花叶片愈伤组织诱导及植株再生的影响因素

以近几年新引进的6个安祖花盆栽品种为试材.以刚展开的幼嫩叶片为外植体,研究了基本培养基、植物生长调节剂配比、培养条件等因素对其愈伤组织诱导及不定芽分化、增殖的影响.结果表明:MP和1/2MS培养基比MS、B5和N6培养基更适于愈伤组织的诱导,1.0～2.0 mg/L BA+0.1～0.2 mg/L 2,4-D对多数品种的愈伤诱导较为合适,MS+O.5 mg/L BA+0.5 rng/L NAA和MP+1.0 mg/L BA适于参试品种的不定芽分化,N6培养基不利于芽的分化;不定芽的增殖以MS+1.0 mg/L BA最为合适.不同品种的愈伤组织诱导能力、不定芽分化能力及其增殖效率差异明显.黑暗培养比光照培养更有利于愈伤组织的诱导.理想的生根培养基和移栽基质分别为1/2 MS+0.5 mg/L IAA和泥炭土与珍珠岩的混合物,生根率与移栽成活率均可达100%.     

非洲菊组织培养与快速繁殖试验研究

以非洲菊的花托、茎尖、花梗为外植体进行组织培养快速繁殖试验,结果表明:适合花托外植体愈伤组织不定芽诱导的培养基为"池上真一培养基"+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L,适合茎尖外植体愈伤组织不定芽诱导的培养基为MS+KT 10 mg/L+IAA 0.5 mg/L,适合花梗外植体愈伤组织不定芽诱导的培养基为MS+6-BA 10 mg/L+IAA 0.5 mg/L;适合非洲菊试管苗继代增殖的培养基为MS+KT 10 mg/L+IAA0.5 mg/L;适合非洲菊试管苗生根培养的培养基为1/2 MS+NAA 0.03 mg/L。     

续随子愈伤组织诱导与不定芽分化探讨

为建立续随子的高频再生体系,从续随子外植体除菌方案与外植体选择、愈伤组织诱导以及不定芽分化等多方面进行了探索.结果显示,70%乙醇处理15s+无菌水冲洗3次+4%次氯酸钠处理5 min+无菌水冲洗5次为最佳外植体灭菌方案;根、茎和叶中,仅有叶片能诱导出愈伤组织;虽然多个激素组合可以诱导续随子叶片产生愈伤组织,但在MS培养基,TDZ 0.2 mg/L或0.4 mg/L以及TDZ/NAA(0.5/0.1 mg/L)组合,光下培养时,愈伤组织诱导率达到100%,且出愈时间短、愈伤生长速度快;新鲜愈伤组织只有在MS培养基,TDZ 0.4 mg/L或TDZ/NAA (0.5/0.1 mg/L)才可分化出单个不定芽(无丛生芽),且分化率也仅为25%和15%.     

影响山苍子离体快繁效果的主要因素研究

以山苍子腋芽为外植体,研究了影响丛生芽诱导、增殖与壮苗生根的主要因素。结果表明:山苍子可通过外植体直接分化丛芽和先形成愈伤组织再分化不定芽2种途径形成组培器官。最佳培养温度为23℃。适宜丛生芽诱导分化的培养基是MS+6-BA 2.0mg/L+IBA 0.2 mg/L;最佳增殖培养基是MS+6-BA2.0 mg/L+KT0.5 mg/L+IBA0.1 mg/L,每40 d可增殖6.1倍;生根培养基以MS+IAA0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+AC 0.3%最佳,生根率达88.6%。     

珍稀植物香果树植株再生体系的建立

通过不定芽直接再生和经愈伤组织诱导器官发生两种途径,建立了香果树快速、高频率发生的植株再生体系,探讨了不同外植体（幼叶切块、茎段、叶柄和根）、叶片放置方式、植物生长调节剂和培养条件对不定芽直接再生和愈伤组织诱导器官发生的影响.香果树愈伤组织诱导器官发生结果表明:不同外植体在MS附加1.0 mg/L 6-BA和1.0 mg/L 2,4-D的培养基上愈伤组织诱导率均为100%,其中叶片外植体叶面向下放置效果最好;愈伤组织在MS添加0.5 mg/L 6-BA和0.5 mg/L NAA的培养基上不定芽的分化率为94.35%.香果树不定芽直接再生结果显示:叶片外植体在MS添加6-BA或ZT的培养基上,不定芽直接再生率均高达100%,其中在MS附加2.0 mg/L 6-BA培养基上,产生的不定芽数目多,生长旺盛;附加1.0 mg/L ZT 培养基上,不定芽数目多达56.67个/cm[[sup]]2[[/sup]],但生长较弱.黑暗预培养有利于香果树叶片外植体不定芽的再生.两种途径得到的不定芽转到1/2 MS培养基上均可生根,生根率达100%,附加1.0 mg/L 的IBA和0.5%的活性炭有利于再生植株根的生长.      

“红阳”猕猴桃茎段高效再生体系的建立

以"红阳"猕猴桃茎段为外植体,MS为基本培养基,培养温度25±2℃,光照强度4 500lx,16h/d,继代周期20～30d,愈伤组织暗培养.在MS+1mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA培养基中,外植体脱分化率达100%.在MS+2.0mg/L 2,4-D+0.4mg/L 6-BA培养基中,1～4代愈伤组织增殖倍数达3.38;在MS+5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA中,60d不定芽诱导率达83.33%.在MS+3mg/L 6-BA+1mg/L NAA中,不定芽1～6代平均繁殖系数达6.78;不定芽用0.01%IBA处理40min后在1/2MS培养基中生根率达100%;85株试管苗移栽到田间土营养钵中,15d成活81株,成活率达95.29%.     

桑树毛状根再生条件研究

为建立桑树毛状根的再生体系,以桑树毛状根作为外植体,研究不同质量浓度6-BA和NAA配比对桑树毛状根愈伤组织诱导和不定芽分化的影响,并对再生植株进行PCR检测。结果表明,桑树毛状根的最佳愈伤组织诱导培养基为MS+0.2mg/L 6-BA+2.0mg/L NAA,最佳不定芽分化培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA,3周愈伤组织不定芽分化率为16.7%。应用该不定芽获得再生植株的根系生长旺盛,叶片提取的基因组中含有rolB生根基因。     

Landersberg生态型拟南芥愈伤组织的诱导和植株再生体系的研究

以landersberg生态型的拟南芥为试材,建立了一套简便有效的组培体系。无菌苗的生长采用竖直培养,易于收集外植体。莲座叶、叶柄、下胚轴、根分别作为外植体在B5+5 mg/L2,4-D+0.5 mg/L KT培养基上诱导愈伤组织,结果表明,莲座叶作外植体出愈慢,出愈率低,愈伤组织质量较差;叶柄、下胚轴和根作外植体出愈快,且愈伤组织质量好,后期易分化。根外植体在MS+5 mg/L KT+0.1 mg/L IAA配方的出芽诱导培养基上诱导2～3周后,愈伤组织能有效分化出芽,分化率达100％。分化出的芽移至MS+2 mg/L NAA培养基上竖直培养,2周左右诱导分化出根,然后移至MS培养基上开花结果。     

扭果花旗杆组织培养与再生体系的建立

【目的】以扭果花旗杆(Dontostemon elegans)根和下胚轴为外植体,建立扭果花旗杆组织培养体系,为后续遗传转化体系的建立提供技术基础。【方法】以MS培养基为基础培养基,利用萘乙酸(NAA)探究根和下胚轴直接诱导不定芽情况,利用2,4 二氯苯氧乙酸(2,4-D)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、NAA、苯基噻二唑基脲(TDZ)、吲哚丁酸(IBA)进行愈伤组织诱导及分化和不定芽生根试验,统计愈伤组织诱导及分化和不定芽生根情况,确定扭果花旗杆组培体系最佳培养基类型。【结果】（1）由根和下胚轴直接诱导不定芽的最适培养基分别为MS+0.3 mg/L NAA和MS+0.6 mg/L NAA,直接诱导不定芽的最佳外植体为根。（2）扭果花旗杆根和下胚轴都能诱导愈伤组织,其中根系诱导愈伤组织速度最快且状态最佳,其次为下胚轴。根系愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,诱导率可达100.00%;下胚轴愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+0.3 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+1.5 mg/L NAA,诱导率可达100.00%。（3）根系和下胚轴的最佳愈伤组织分化培养基均为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,分化率分别为100.00%和86.66%。（4）最佳生根培养基为MS+0.5 mg/L IBA,生根率可达50%以上。（5）将组培苗移至土壤后,在光照培养室培养15 d,其存活率可达83.33%。【结论】建立的扭果花旗杆组培体系可获得与实生苗形态一致的组培苗,为扭果花旗杆遗传转化体系的建立奠定了技术基础。     

2,4-D等植物生长调节剂对金银花叶片植株再生的影响

以金银花叶片为外植体,研究了2,4-D等植物生长调节剂对愈伤组织诱导和植株再生的影响.结果表明:最佳愈伤组织诱导培养基为MB+1.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT,愈伤组织诱导率达91.84%,生长良好;最佳不定芽分化培养基为MB+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,不定芽分化率达93.33%,且生长旺盛;最佳不定芽生根培养基为1/2MB+2.0mg/L IBA+0.2mg/L IAA,生根率达83.33%,且根较多,苗健壮.试管苗移栽成活率达89.3%.     

泰半夏小块茎的诱导及工厂化育苗研究

以泰半夏的无菌叶片、叶柄为材料,通过愈伤组织分化不定芽途径,建立泰半夏工厂化育苗植株再生体系。结果表明,以叶片、叶柄为外植体,愈伤组织最适诱导培养基分别为:MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 3.0 mg/L、MS+0.5 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA;愈伤组织在相同培养基中增殖后诱导小块茎分化的最适培养基为:MS+2 mg/L6-BA。1/2MS+0.1%活性炭+0.5 mg/L NAA培养基产生的根较粗壮、浓密。