松嫩平原春小麦耐盐碱性鉴定及品种(系)筛选

为确定松嫩平原春小麦品种(系)耐盐碱性鉴定的适宜盐碱浓度,同时筛选耐盐碱小麦材料,以黑龙江省试种的30个春小麦品种(系)为试验材料,采用不同浓度NaHCO3溶液分别在春小麦萌发期和苗期进行盐碱胁迫处理,筛选适合耐盐碱性鉴定的胁迫处理浓度,并通过主成分分析、隶属函数分析、聚类分析等方法对30个春小麦品种萌发期和苗期的耐盐碱性进行综合评价。结果表明,150mmol·L-1 NaHCO3为小麦耐盐碱性筛选的理想鉴定浓度;30个春小麦品种(系)中,九三09-1933等7个品种(系)萌发期高度耐盐碱,北麦9号为萌发期盐碱敏感品种;九三08-51271、龙麦36、7767为苗期高度耐盐碱品种(系),克旱14号、九三08-7127为苗期盐碱敏感品种(系);综合评价萌发期与苗期鉴定结果,其中高度耐盐碱的品种(系)为龙麦36和09-9933,盐碱敏感品种(系)为九三08-7127和克旱14号,克旱7号等其他品种(系)中度耐盐碱。     

甘薯新品种(系)的抗病鉴定与筛选

鉴定了福建省泉州市农业科学研究所新育成的311个甘薯品种(系)对甘薯瘟与蔓割病的抗性,结果表明抗薯瘟Ⅰ、Ⅱ型菌和蔓割病的品种(系)分别有153(占64.29%)、37(占15.55%)和238(占76.53%)份.进一步鉴定了抗病品种(系)薯块产量、品质等性状,筛选出泉薯647、23、11、932、721、848、052、145、153、922等综合表现较好的抗病品种(系).同时分析了抗病品种(系)组合双亲的抗源构成,结果抗(MR～HR)薯瘟Ⅰ型菌和抗(MH～HR)蔓割病的品种(系)均主要选自双亲抗性为R×R组合,分别为94(占61.44%)和132(占55.46%)个;抗(MR或R)薯瘟Ⅱ型菌品种(系)主要选自双亲抗性为R×R、R×S、S×R和 S×S等4类组合,各有6～11(占16.22%～29.73%)个.     

黑大豆(青子叶)优异资源鉴定与筛选

1997—2000年对黑龙江省11份青子叶黑大豆品种资源进行了农艺性状，籽粒品质鉴定评价。筛选出多花、多英，多分枝种质3份，高蛋白种质4份，抗大豆花叶病毒病（SMV）种质2份，高抗大豆霜霉病（Peronospora manshurica）种质3份。     

高黄酮水稻品种资源的鉴定与筛选

黄酮是中药中重要功能成分,具有较强抗氧化作用,能清除体内自由基,有提高免疫力,降血糖、血脂和血压,消炎的作用。对水稻中的黄酮研究较少,对高黄酮水稻资源的筛选更少有涉及。水稻黄酮主要为花青素与原花青素,花青素多存在于黑米中,原花青素多存在于红米中。通过测定985份资源的黄酮含量,并应用系统聚类中的WARD法,将黄酮含量分为高黄酮、较高黄酮、中等黄酮及低黄酮四类,其中高黄酮品种有4个。黄酮含量高能显著降低稻米蛋白质含量,增加稻米垩白度,但对其他指标影响较小。将优异资源与高黄酮水稻育种结合,全面提高一般色米的黄酮含量,可为糖尿病患者与"三高"(高血糖、高血脂、高血压)患者、肝功能不良者及免疫力较低者提供理想膳食素材。     

马铃薯极早熟品种东农303再生系统的筛选

以马铃薯品种东农 30 3的脱毒试管苗为供试材料 ,进行了 5种培养基对试管苗茎段愈伤组织诱导和植株再生影响的试验。结果表明 :不同的培养基表现出不同的诱导效果 ,愈伤组织诱导的最佳培养基是 2号培养基 (MS + 0 0 1mg/LNAA + 3mg/LBA) ,愈伤率是 90 4 %。植株再生的最佳培养基是 5号培养基 (MS + 2 2 5mg/LBA + 5 0mg/LGA3) ,再生率是 98 3%。     

适合稻鱼系统的水稻品种筛选研究

以中浙优8号、野香优3号、桂育9号、桂禾丰、Y两优1号、昌两优8号等品种为试验材料,采用宽窄行和等行距两种栽植方式,以控释肥作基肥一次性施肥,对适合稻鱼系统的水稻品种进行筛选。结果表明,Y两优1号和中浙优8号的产量高,可分别作为双季稻稻鱼系统早季中偏晚和晚熟品种种植,桂育9号生育期、株高、产量、叶面积指数各方面表现适中,可作为稻鱼系统中熟品种种植。栽植方式对各水稻品种的分蘖、株高、产量影响差异不显著;宽窄行栽植能提供更大的活动空间,适合稻鱼系统栽培模式。     

甘蔗新品种(系)筛选试验

通过1年新植、1年宿根的品种比较试验,分析其产量性状与经济性状并做综合评定。筛选适应崇左蔗区气候环境、土壤条件下栽培且又能获得667m2产吨糖的甘蔗优良新品种(系)替代新台糖22号,使蔗农增产、增收,企业增效,促进整个产业的持续稳定健康发展。结果表明,在引进的5个品种中,新宿平均含糖量最高的柳城03/182达1.17t/667m2,比对照品种新台糖22号1.08t/667m2多0.09t/667m2,增幅8.33﹪,达甘蔗667m2产吨糖田目标。综合评分柳城03/182为4.6分,位居第一,说明该品种能适应当地环境条件和栽培技术,并具备高产、稳产、高糖、宿根性好的特点。可以预选为甘蔗"吨糖田"应用示范的优良新品种(系)。而园林16号、园林17号、园林18号、福农15号均低于对照种新台糖22号。     

特早熟耐盐型棉花品种(系)筛选及萌发期耐盐鉴定方法探讨

用1.0％ NaCl溶液胁迫对102个特早熟棉花品种(系)进行了耐盐性筛选,萌发期筛选结果显示抗盐以上类型的品种有55个,占全部参试品种的53.9％.种子萌发试验表明:辽1074为抗盐型品系,盐胁迫下种子正常萌发,棉苗健壮,受盐害轻,相对含水量较高.萌发期耐盐综合指标可以反映棉花耐盐性的强弱.     

水稻抗旱高产品种(组合)筛选

在大田生育期只靠雨水灌溉的易旱田,对16个早、晚稻品种（组合）进行了产量、抗旱系数、结实性状、最后三片功能叶面积与寿命及卷叶、黄叶、枯叶状况与抗倒性的比较研究,从中筛选出早稻抗旱高产品种3个,晚稻抗旱高产品种（组合）2个,分别为湘辐93－4、辐丰早92－124、91－1、威优46与V989。在孕穗期与结实期遭受干旱后,其产量为5．68～6．83t／hm2,抗旱系数为0．702～0．859。     

无患子科树木细子龙营养贮藏蛋白质的分离鉴定

采用光学显微技术、十二烷基磺酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)、免疫印迹和间接免疫荧光定位技术，分离鉴定了无患子科树木细子龙(Amesiodendron chinense)的营养贮藏蛋白质(VSP)。在经汞-溴酚蓝染色的石蜡切片中，观察到枝条、树干和根的次生木质部的木薄壁细胞中有深蓝色颗粒状物质，而在上述枝条、树干和根的次生韧皮部的韧皮薄壁细胞和韧皮射线薄壁细胞中则为均一状的淡蓝色物质。这些被染成不同程度蓝色的物质具有蛋白质性质。SDS—PAGE分析表明，在枝条、树干和根的树皮及木质部中，有2种含量高的蛋白质，其分子质量约23kDa和26kDa。使用荔枝(一种无患子科树木)的22kDa VSP的多克隆抗体对这些部位的树皮和木质部可溶性蛋白质进行免疫印迹分析，在免疫印迹图谱上，该抗血清只识别23kDa和26kDa蛋白质，且23kDa蛋白质谱带颜色较深，说明它们与荔枝的22kDa VSP有一定的同源性。间接免疫荧光定位结果表明，只有颗粒状和均一状蛋白质内含物发出异硫氰酸荧光素特异的蓝绿色荧光，说明23kDa和26kDa蛋白质是这些颗粒均一状内含物的主要成分。树木抽新梢后，这2种蛋白质含量在一定程度上减少。可见，23kDa和26kDa蛋白质符合树木VSP的3条标准，应该是细子龙的VSP。韧皮部和木质部的VSP在形态上的差异可能与蛋白质的种类不同有关。     

MADS-box基因酵母双杂交系统的构建及鉴定

为研究香蕉中MADS-box基因相互作用的分子机理,筛选该基因表达产物在体内相互作用的靶蛋白,分别构建诱饵质粒载体和香蕉果实采后2 d的cDNA文库,采用共转化法转入酵母细胞中,经过初步筛选鉴定,证明已成功构建了MADS-box基因的酵母双杂交系统。该结果为发现MADS-box基因表达产物在体内相互作用的靶蛋白奠定了基础。     

建立番木瓜性别研究的cDNA-AFLP分析体系

以番木瓜幼苗为材料,利用多重PCB技术快速鉴定其性别.建立适合番木瓜性别研究的cDNA-AFLP分析体系,分析影响cDNA-AFLP分析体系的各种可能因素(RNA提取、酶切与连接效率、预扩增效果等),并对影响选择性扩增反应的各因子进行优化.结果表明,选择性扩增的最佳体系,即在反应体系中,各因素终浓度分别为:Ta[酶0.06U/μL;L;Mg2+2.4mmol/L;dNTP 2.0mmol/L;引物0.48 μmol/L.通过优化体系得到的选择性扩增产物,银染检测后条带清晰稳定.表明成功建立了适合番木瓜性别研究的cDNA-AnLP分析体系.     

PRSV运动相关病毒蛋白的Sos恢复系统诱饵载体构建及自激活效应检测

为研究与番木瓜环斑病毒运动相关的病毒蛋白(CP、HC-Pro、CI)互作的寄主因子,构建以Sos恢复系统为原理的胞质酵母双杂交系统的3个病毒蛋白诱饵载体,并检测其自激活作用来验证是否适用于后续的文库筛选.通过RT-PCR从番木瓜环斑病毒海南分离物中扩增出这3个病毒蛋白的片段,按正确方向将目标片段分别插入诱饵载体pSos中,并将重组质粒导入酵母温度敏感酵母菌株cdc25H,检测其表达产物对酵母Sos恢复系统Ras信号通路的激活作用而产生的细胞温敏特性影响.结果表明,这3个含番木瓜环斑病毒运动相关的病毒蛋白的诱饵载体构建正确,对酵母菌株cdc25H的Sos恢复系统无激活作用,激活试验为阴性.     

Rapid Construction of a High-Density Rice Linkage Map by High Efficiency Genome Scanning （HEGS） System

High-density linkage maps are essential tools for genome analysis of various biological traits. Our developed compact multi-gel system, HEGS (high efficiency genome scanning) is a high-throughput and high-cost-performance electrophoresis apparatus. Using this system, a high-density (average interval 2.3 cM) map with 1 065 AFLP and 63 SSR markers was constructed from recombinant inbred lines of a japonica and indica hybrid in just two months of electrophoreses by a single person. More than 50% of the mapped AFLP markers were commonly polymorphic for several combinations between japonica and indica rice and 15% were applicable for genetically closer crosses between upland and lowland types of japonica rice. This system can be used for rapid analyses of all kinds of markers.     

显脉球须刺蛾多角体病毒的初步研究

从显脉球须刺蛾(Scopelodes venosa Kwangtungensis Hering)幼虫自然罹病死亡虫体中,分离到1株多角体病毒,包涵体呈多角形,有四边、六边、八边等多种形态,大小为600—800×1000—1200nm,多角体会在0.05 mol/L Na_2CO_3+0.1 mol/L NaCl 弱碱溶液中降解,且能释放出短杆状的病毒粒子,其大小为260—300×40—60 nm。室内感染3—4龄幼虫,LC_(50)为4.112×10~3 PIB,回归直线方程为 y=0.549x+2.86     

橡胶树14-3-3蛋白基因的酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活和毒性检测

以克隆到的3个编码橡胶树14-3-3蛋白的基因HbGF14a、HbGF14b、HbGF14c和为基础,构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-HbGF14a、pGBKT7-HbGF14b、pGBKT7-HbGF14c,并对其进行自激活和毒性实验鉴定.自激活实验结果表明,3个诱饵载体没有自激活性;毒性实验结果表明,pGBKT...     

茶树钙依赖性蛋白激酶基因CsCDPK17的鉴定及表达分析

钙依赖型蛋白激酶(Calcium-dependent protein kinases,CDPKs或CPKs)是植物细胞中重要的钙离子信号受体,普遍参与了植物生长发育和胁迫响应等调控过程。本研究从茶树龙井43中克隆到1条CDPK基因,经测序验证该序列包含1611bp的完整ORF,编码536个氨基酸。结合序列比对和进化分析发现该蛋白N-末端具有豆蔻酰化位点,具备钙依赖性蛋白激酶的保守结构域,并且与拟南芥AtCDPK17的同源关系最近,因此命名为CsCDPK17(Genbank登录号为:MK238482)。蛋白质理化特性分析发现其蛋白分子量为59.9kD,理论等电点pI为5.43,属无跨膜结构域的亲水性蛋白。使用水稻原生质体和烟草叶片两种瞬时表达的方法均证明CsCDPK17是细胞质膜和细胞核双定位蛋白。对克隆到的CsCDPK17上游2000bp的启动子区分析发现了多个与基因转录、光、激素(ABA、SA、MeJA等)相关的顺式作用元件。表达分析显示,CsCDPK17在成熟叶和种子中表达水平较高,而在根中的表达水平最低;在龙井43、大面白等4个品种冷驯化过程中,该基因的表达随着冷驯化过程显著上调,随着脱驯化过程下调;同时还发现CsCDPK17能够不同程度地响应低温(最高5.1倍)、干旱(最高2.3倍)、渗透(最高2.4倍)胁迫。本研究的结果表明CsCDPK17在茶树的生长发育和低温、干旱、渗透等非生物胁迫响应的过程中均发挥一定的调控作用。     

高粱花叶病毒Hcpro、CP和PIPO基因酵母双杂交载体构建及自激活验证

采用同源克隆技术获得侵染甘蔗高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)的Hcpro、CP、PIPO基因片段.将该基因片段连接至pGBKT7载体,分别构建酵母双杂交诱饵载体pGBKTT-Hcpro、pGBKT7-CP和pGBKTT-PIPO,经PCR、酶切及测序鉴定,证明重组诱饵载体构建成功后,将重组质粒导入Y2H Gold酵母菌株,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用.结果表明,含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性.含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Leu、SD/-Trp/-Ade和SD/-Trp/-His营养缺陷平板上不能生长,表明重组诱饵质粒表达产物对ADE2、HIS3报告基因无自激活作用.研究结果为下一步利用酵母双杂交系统检测与高粱花叶病毒Hcpro、CP、PIPO蛋白相互作用的甘蔗蛋白提供基础.     

一种E.coli-Free的酵母同源重组系统稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的新方法

侵染性克隆是研究病毒的重要工具,而偏大的病毒基因组及其在大肠杆菌中的不稳定给构建侵染性克隆造成很大困难。通常采用插入内含子和酵母同源重组等方式可以获得稳定克隆,但本实验最初利用酵母同源重组系统并未成功构建番木瓜畸形花叶病毒(PLDMV)的侵染性克隆。经研究证实,该不稳定现象确实存在于大肠杆菌中,而非酵母和农杆菌细胞。通过改良酵母同源重组方法,成功构建了有/无内含子intron 2的PLDMV侵染性克隆p35S-FL和p35S-FL-In2,农杆菌注射接种番木瓜均发病,侵染效率达64.7%~69.7%。本研究通过酵母同源重组质粒直接转化农杆菌,建立了一种10 d内即可稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的E.coli-Free酵母同源重组新方法。该方法对其他在大肠杆菌中不稳定的植物病毒侵染性克隆的构建具有重要意义。