大肠杆菌O157 Stx噬菌体裂解酶的克隆表达及活性分析

为研究大肠杆菌O157Stx噬菌体编码的裂解酶(内溶素)对肠出血性大肠杆菌的抗菌作用,克隆表达了大肠杆菌O157Stx噬菌体裂解酶,并检测其裂解作用和裂菌谱。利用PCR方法扩增大肠杆菌O157Min27株中Stx2噬菌体裂解酶基因(R基因),构建表达质粒pET28a(+)-lysEC1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)。重组质粒在BL21中获得了高表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的34%,经His-trapTM亲和层析柱纯化后,获得的重组LysEC1的纯度大于97%。体外裂解活性试验证实纯化的噬菌体裂解酶LysEC1对肠出血性大肠杆菌菌株具有很好的裂解作用,这为新型噬菌体抗菌生物制剂的研发提供了新的研发方向。     

蚯蚓体腔液胞溶素蛋白研究进展

胞溶素(Lysenin,LYS)是在爱胜蚓属体腔液中发现的一类小分子造孔毒素蛋白,属于多蛋白家族,可以和细胞膜鞘磷脂特异性结合发挥其溶血毒性、抗菌、离子通道、抗氧化、细胞凋亡等功能活性。文章综述了胞溶素的理化分子结构、生物学功能、潜在应用,以为其未来研究提供参考和依据。     

噬菌体vB＿SalS＿DZ的生物学特性及对鸡沙门氏菌病的疗效

抗药性沙门氏菌的出现,严重影响了抗生素对沙门氏菌病的治疗效果,而噬菌体治疗是一种可能的替代方法。本试验研究了沙门氏菌噬菌体vB_SalS_DZ的基本生物学特性及其对沙门氏菌SM86的治疗效果。噬菌体vB_SalS_DZ的生物学特性分析显示其效价可达109pfu/m L,透射电镜结果显示该噬菌体属于有尾目T4噬菌体。对p H值的适应范围宽,在p H值4~12内能保持较高的裂解活性;该噬菌体的最适p H值在5.0左右。最佳感染复数为10-6,感染宿主菌的潜伏期和爆发期均为60 min;基因组中不携带抗性基因和毒力基因。噬菌体vB_SalS_DZ可以使感染沙门氏菌病的SPF鸡死亡率降低50个百分点,这表明该噬菌体在治疗特定的沙门氏菌感染中具有较大的应用潜能。     

噬菌体治疗作物细菌性病害的研究进展

噬菌体用于细菌防治已有很长的历史,近年来,作为作物细菌性病害的防治手段之一,利用噬菌体替代传统农药治疗的研究越来越受重视,介绍了噬菌体在作物细菌性病害的最新应用情况,并对噬菌体治疗在作物上的应用前景进行了展望.     

噬菌体在水产养殖中应用的研究进展

近年来,我国水产养殖业发展迅猛,带来巨大收益的同时,抗生素和化学药物的长期滥用也产生了污染环境、耐药性差和威胁食品安全等诸多问题。亟待寻求一种既能有效控制海水养殖动物疾病、又环境友好的新技术、新产品,以部分或完全替代抗生素或化学药物。噬菌体是一种安全、高效、无毒无害、生态友好的疾病防治绿色产品,相继在陆生和水产动物疾病防治中应用。介绍了噬菌体生物学、噬菌体治疗及噬菌体在水产养殖业中的应用等最新研究进展,展望了噬菌体防治水产养殖病害的前景,以期为噬菌体治疗水产养殖疾病提供理论和技术支持。     

一种利用噬菌体裂解大肠杆菌Rosetta菌株菌体的方法

Escherichia coli Rosetta菌株是基因克隆表达的重要宿主菌,为了探索裂解E.coli Rosetta菌体的新方法,从污水中分离到1株能裂解E.coli Rosetta菌株的噬菌体,命名为ETP-1,并研究其生物学特性和裂解效率。结果表明,EPT-1在双层平板上形成直径为1~3 mm的噬菌斑;噬菌斑透明,周围有晕环;该噬菌体的潜伏期为20min,裂解期为70 min,在55℃以上以及p H值大于11时,噬菌体失去活性。在6 h内,噬菌体可裂解73%的E.coli Rosetta菌体,ETP-1裂解其宿主细胞为E.coli Rosetta菌株菌体的破碎提供了新的方法。     

噬菌体裂解酶的应用概况

近年来由于耐药菌的频频出现,抗生素在抗感染领域面临前所未有的挑战,目前研制可裂解病原菌的噬菌体制剂已为一大热点。噬菌体裂解酶是双链DNA噬菌体在基因组复制晚期合成的一类蛋白质,它能够水解细菌细胞壁中的肽聚糖从而杀灭细菌。噬菌体裂解酶在体内外的试验中都表现出很高的杀菌性、种属特异性和安全性,因而具有广阔的应用前景。简要介绍了噬菌体裂解酶的结构性质,并对裂解酶显示出的抗菌性能及应用进行了综述。     

黑腹果蝇体内侵染Wolbachia的WO噬菌体的检测

WO噬菌体是侵染节肢动物Wolbachia的细菌病毒.WO噬菌体可能携带重要的基因以原噬菌体的形式插入到Wolbachia基因组中并参与Wolbachia调控宿主生殖方式.利用PCR扩增的方法,在感染胞内菌Wolbachia的黑腹果蝇体内检测到了WO噬菌体.由此表明,黑腹果蝇体内存在WO噬菌体.     

噬菌体展示技术

概述了噬菌体展示技术的基本原理,常用的噬菌体表面展示系统以及噬菌体展示技术的应用、展望等方面,并在抗原表位分析和疫苗的研制、人工抗体、多肽药物的开发等方面,进行了探讨。     

浅谈噬菌体的临床应用

噬菌体(Bacteriophage,简写作phage),又称细菌病毒(Bacterial virus),它可以侵入细菌细胞中,通过酶的作用,破坏细胞壁,使细菌裂解,进而杀死细菌。噬菌体分为烈性噬菌体及温和性噬菌体,前者可在敏感宿主菌内增殖,并使之裂解,亦称为毒     

单增李斯特菌溶源性噬菌体的诱导及鉴定

利用丝裂霉素C诱导获得单增李斯特菌溶源性噬菌体,并确定其核酸类型。PCR及其扩增产物的序列测定检测原噬菌体,透射电子显微镜观察丝裂霉素C诱导获得的溶源性噬菌体颗粒,DNase I、RNase A和绿豆核酸酶分别消化噬菌体基因组,确定噬菌体的核酸类型。结果显示,38株单增李斯特菌分离株中的16株在tRNAArg位点携有原噬菌体,其中1株可诱导出噬菌体颗粒,该噬菌体为长尾噬菌体,核酸为dsDNA。噬菌体的成功诱导为噬菌体及其功能基因的开发利用奠定了基础。     

单域抗体T7噬菌体展示文库构建与鉴定

优化噬菌体展示文库构建策略,获得高品质羊驼源天然纳米抗体T7噬菌体展示文库,并对文库质量进行鉴定.分离羊驼外周血淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)基因,插入T7 select 415-1b噬菌体载体构建文库,计算文库的库容量,测定文库传代稳定性.测序分析VHH基因的多样性和纳米抗体氨基...     

一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

【目的】分离并纯化出一株裂解性青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)噬菌体,并测定其各项生物学特性,为开发新的抗烟草青枯病制剂提供依据。【方法】取烟草青枯病重病田中健康烟株的根际土壤制成土壤悬浮液,并通过在青枯雷尔氏菌菌液中加入过滤后的土壤悬浮液富集噬菌体,用双层平板法验证噬菌体的存在后挑取单个最大噬菌斑进行反复纯化,直到得到单一清晰的噬菌斑。纯化后的单个噬菌斑加入对数早期的青枯雷尔氏菌菌液中进行增殖培养,将增殖液按常规方法进行噬菌体颗粒浓缩后,取20 μL浓缩液用磷钨酸染色并通过电子显微镜观察噬菌体的形态特征;同时将浓缩液进行SDS-PAGE电泳,观察蛋白条带大小和数量;用λ噬菌体DNA提取试剂盒提取噬菌体增殖液中的噬菌体核酸进行琼脂糖凝胶电泳,确定其基因组片段大小;最后用常规方法测定噬菌体的滴度、最佳感染复数、一步生长曲线,并通过比较加入噬菌体液前后青枯雷尔氏菌菌液的OD₆₀₀值变化测定其对温度、pH、紫外线、氯仿的敏感性。【结果】分离并纯化出了一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体,命名为∈RS-1, 噬菌斑为圆形,清晰透明,边缘光滑,直径1-2 mm,经电镜观察其形态为蝌蚪状,头部为二十面体的立体对称,直径约为94 nm,并有一带伸缩尾鞘的长尾大约为27 nm×100 nm,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目（Caudovirales）,肌尾噬菌体科(Myoviridae)的裂解性噬菌体,核酸性质为dsDNA;噬菌体浓缩液经SDS-PAGE分析至少可以观察到25条蛋白条带,相对分子质量在10-100 kD,说明其蛋白外壳至少含有25个结构蛋白;将提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳显示其条带大于48 kb,符合肌尾噬菌体科基因组大小范围（31-317 kb）;生物学特性的测定显示该噬菌体对青枯雷尔氏菌的最佳感染复数为0.01;其吸附和感染青枯雷尔氏菌时的潜伏期约为30 min,爆发期约为80 min,裂解量约为156;该噬菌体的裂解活性在28℃时最高,在28-50℃均较强,但在温度超过60℃后活性基本丧失;其对酸碱的耐受力较强,在pH 3-8的范围内均有较强的裂解活性,当pH值超过9后活性开始降低;其对紫外线有一定的耐受能力,经紫外线照射0-9 min后裂解活性依然较强,12 min后活性开始下降,21 min后活性基本丧失;其对氯仿不敏感,5%浓度的氯仿对其活性基本没有影响。【结论】分离到了裂解性的青枯雷尔氏菌噬菌体,属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科,经过测定其各项生物学特性可知其潜伏期较短,裂解能力较强,具有很好的杀菌效果,且其裂解活性持续时间长,并能在不同温度、不同酸碱性的环境内有较强的适应能力,具有开发为抗青枯雷尔氏菌菌剂的潜力。     

副溶血弧菌噬菌体的吸附材料选择及其吸附和洗脱作用

[目的]选择副溶血弧菌噬菌体的适宜吸附剂,并研究其吸附和洗脱作用。[方法]比较了滑石粉+硅藻土(3∶1)、活性炭、蒙脱石、玻璃纤维4种吸附剂对副溶血弧菌噬菌体的吸附固定化效果以及洗脱效果。[结果]蒙脱石和玻璃纤维对噬菌体的吸附效果好。通过单因素试验和正交试验研究蒙脱石用量、吸附时间、吸附液p H对噬菌体固定化的影响,结果发现当蒙脱石用量为0.5 g,吸附时间为1 h,吸附液p H为6.0时,吸附效果最佳。[结论]将副溶血弧菌噬菌体制成固定化制剂后分别作用于养殖动物和养殖水体,可以达到对养殖动物进行生物防治和改善水体环境的目的。     

湖北省水稻细菌性条斑病菌与噬菌体互作关系的研究

通过对细菌夺冠滤器过滤，氯仿处理以及用稻细条病病叶组织浸提液直接分离噬菌体等方法的比较，结果表明：三者中相比之下，细菌过滤器过滤法是最为简便可靠的噬菌体分离方法，通过对湖北省10个水稻细菌性条斑病菌与20个噬菌体互作反应的研究表明：不同来源的细条病菌与不同来源的噬菌体之间，存在着亲和性的分化，根据它们相互的亲和关系，可把10个细条病菌菌株划分为6个组，把20个噬菌体划分为7个溶菌型；其中RP、RS、RT、RX、RY等5个细条病菌菌株可与所有参试的20个噬菌体发生亲和反应，据此在用噬菌体技术进行湖北省水稻细菌性条斑病的测报工作中，友谊赛些广亲和性的菌株可逡为指示菌。     

基于磁珠和时间分辨荧光免疫分析的微囊藻毒素LR单链抗体筛选与鉴定

【目的】从鼠源合成噬菌体抗体库中,快速分离获得微囊藻毒素LR单链抗体。【方法】采用磁珠筛选和负筛选方法,设计两轮微囊藻毒素LR单链抗体的筛选方案。用噬菌体产出投入比和多克隆噬菌体免疫分析,对每轮筛选后微囊藻毒素LR特异性噬菌体的富集效果进行鉴定。再将第2轮筛选获得的次级库提取单链抗体基因,转入可溶性表达载体;诱导表达后,采用时间分辨荧光免疫法,对单个噬菌体克隆鉴定并测序。【结果】两轮筛选的噬菌体产出投入比分别为4.8×10-8和2.88×10-6。第2轮筛选后的次级库,经多克隆噬菌体免疫分析得到的荧光信噪比,比原始抗体库提高了22.8倍。最终鉴定得到5株不同的阳性噬菌体克隆,其中最佳的克隆对微囊藻毒素LR的检测灵敏度（IC10）为13 ng•mL-1,抑制中浓度（IC50）为435 ng•mL-1,线性范围在31—5 952 ng•mL-1。【结论】本研究筛选到的单链抗体,有潜力应用于微囊藻毒素LR的免疫学检测或免疫亲和柱的制备,同时也探索了一种高效的微囊藻毒素LR单链抗体的库筛选、鉴定方法。     

Research Progress in Phage

With excessive utilization of antibiotics in recent years,bacterial drug resistance problem is serious increasingly,and it is more and more difficult to develop anti-infective drug,while it does not have these problems to use phage controlling disease.Phage is a kind of prokaryotic virus,widely exists in the nature and includes bacteriophage,cyanophage and actinophage.Due to its potential of replacing antibiotics to treat disease,phage receives more and more attention.In this paper,based on development status of phage research at home and abroad,discovery process,naming method and classification basis of phage are introduced comprehensively,and advantages and limitations of phage applying in prevention and control of bacterial diseases are analyzed.We introduce application status of phage in human medicine,prevention and control of diseases for terrestrial animals and aquaculture,and the effects of phage in sewage treatment,prevention and control of microbial contamination of food and detection technology,and point out the shortages of phage in the above application.Meanwhile,we also discuss application prospects of phage in disease prevention and control,environmental protection and food safety.     

Research Progress in Phage

With excessive utilization of antibiotics in recent years,bacterial drug resistance problem is serious increasingly,and it is more and more difficult to develop anti-infective drug,while it does not have these problems to use phage controlling disease.Phage is a kind of prokaryotic virus,widely exists in the nature and includes bacteriophage,cyanophage and actinophage.Due to its potential of replacing antibiotics to treat disease,phage receives more and more attention.In this paper,based on development status of phage research at home and abroad,discovery process,naming method and classification basis of phage are introduced comprehensively,and advantages and limitations of phage applying in prevention and control of bacterial diseases are analyzed.We introduce application status of phage in human medicine,prevention and control of diseases for terrestrial animals and aquaculture,and the effects of phage in sewage treatment,prevention and control of microbial contamination of food and detection technology,and point out the shortages of phage in the above application.Meanwhile,we also discuss application prospects of phage in disease prevention and control,environmental protection and food safety.     

蜂胶对非发酵性豆制品防腐研究

为了研究蜂胶对非发酵性豆制品防腐的效果,寻找安全有效的保鲜剂。以蜂胶对豆制品中的主要腐败细菌的抑菌作用为基础,探讨蜂胶对3株腐败细菌生长曲线的作用阶段的不同。蜂胶对3株菌的最小抑菌浓度是0.4‰。蜂胶对菌株df1的抑制主要表现在0~14 h,即延迟期到对数期;蜂胶对df2株菌的抑制表现为延迟期;蜂胶对df3株菌的抑制时间是0~16 h,即从延迟期到对数生长期。蜂胶对腐败细菌的抑制主要体现在延迟期和对数期。0.4‰蜂胶主要抑制细菌从延迟期到对数期的菌体繁殖。该研究为蜂胶作为防腐剂使用奠定了理论基础。     

Inactivation by ultraviolet light of an acriflavine-sensitive gene function in phage T4D

Mutants of phage T4D can be isolated which multiply in the presence of concentrations of acriflavine inhibitory to the growth of wild-type phage. Bacteria mixedly infected with resistant and sensitive phage are unproductive in the presence of acriflavine. Irradiation of the sensitive phage with ultraviolet light results in inactivation of the function of the gene for acriflavine sensitivity, permitting the mixedly infected complexes to yield phage. This function is inactivated in an exponential manner and has a cross section comparable to cross sections of other gene functions in T4D.