蛋白质的层析分离

文章对蛋白质纯化过程中经常使用的层析方法,即凝胶过滤层析、离子交换层析和亲和层析这三种层析方法的原理、主要介质和操作步骤进行了综述。     

小麦幼叶ROP GTPase提取方法的优化

所有RhoG TPase组成一个特殊的亚家族,命名为ROP GTPase,这个家族参与并调控肌动蛋白细胞骨架的重组等一系列信号转导过程。小麦ROP GTPase的高效纯化技术和手段是对其功能和性质等进行研究的重要基础和关键,并且这对小麦ROP GTPase关于信号转导以及F-actin的研究有着极为重要的理论和实践意义。采用凝胶过滤层析和分辨率较高的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）等技术对小麦的ROP蛋白进行了提取、纯化和鉴定。     

中国白梨高产高效栽培的生理生态学研究

该文充分论述了白梨的起源与分布及与周围生态中生物因子和非生物因子的关系,从而为白梨高产高效栽培提供一定的理论基础。     

凝胶过滤层析参数对EV71病毒粗提液分离效果的影响

通过凝胶过滤层析达到分离纯化EV71肠道病毒粗提液,以提高EV71的纯度.选用不同的洗脱流速、不同样品上样量、不同的缓冲溶液的pH值和不同盐浓度对EV71肠道病毒粗提液进行连续洗脱.结果表明,凝胶过滤层析的洗脱流速、样品上样量、缓冲溶液的pH值和盐浓度对EV71病毒均能不同程度地影响EV71病毒粗提液的分离效果.在试验...     

小麦幼叶ROP GTPase提取方法的优化(英文)

所有RhoGTPase组成一个特殊的亚家族,命名为ROP GTPase,这个家族参与并调控肌动蛋白细胞骨架的重组等一系列信号转导过程。小麦ROPGTPase的高效纯化技术和手段是对其功能和性质等进行研究的重要基础和关键,并且这对小麦ROP GTPase关于信号转导以及F-actin的研究有着极为重要的理论和实践意义。采用凝胶过滤层析和分辨率较高的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)等技术对小麦的ROP蛋白进行了提取、纯化和鉴定。在小麦幼叶ROPGTPase的提取中,初期蛋白质样品使用硫酸铵进行盐析脱盐并去除杂质,在提高目的蛋白纯度的同时也去除了一部分非目的蛋白,缩小了蛋白质的分子量范围。获得的蛋白样品提取液加入SephadexG25进行浓缩,浓缩后的蛋白使用紫外分光光度计进行纯度鉴定,测得蛋白质的纯度比较高,经凝胶过滤层析洗脱后利用SDS-PAGE电泳进行纯度鉴定,得到了较为清晰的电泳图谱,目的蛋白质的含量有所提高,并且可有效去除其他杂蛋白的干扰,为进一步对小麦ROP蛋白功能和性质的研究提供了一定的理论和试验基础。     

怀头鲇胃黏膜蛋白酶分离提纯条件的筛选

采用两种硫酸铵饱和梯度盐析方法对怀头鲇Silurus soldatovi胃黏膜蛋白酶激活液进行粗提,用6种组合层析条件对胃蛋白酶粗提液进行Sephadex G-75凝胶过滤层析,获得初步纯化的蛋白酶,并通过蛋白质浓度、蛋白酶活力及SDS-PAGE凝胶电泳对其分析鉴定。结果表明:在28%、56%、83%(NH4)2SO4饱和度条件下分级盐析效果比较理想;不同层析条件下层析峰分离液的蛋白酶活力测定均显示出酶活性,层析峰蛋白酶比活力较粗提液提高5～9倍,60 cm柱(层析柱高52 cm、直径1.6 cm)层析峰分离效果较好。从盐析粗提液电泳结果,以及在60 cm层析柱、pH为3.3的0.01 mol/Lβ-丙氨酸-甲酸缓冲液、0.8mL/min流速条件下的层析峰蛋白分管收集液酶活力峰值和层析峰峰顶形状判断,怀头鲇胃蛋白酶可能有两种蛋白组分存在,并测得相对分子质量为26 000～47 000。     

玉米湿磨、乳酸菌发酵及挤压膨化处理后淀粉组成的变化

 【目的】研究湿磨、乳酸菌发酵改性和挤压工艺对玉米粉中淀粉组成的影响。【方法】以普通玉米品种为材料，通过湿磨、乳酸菌发酵改性和挤压膨化工艺制备玉米粉，从玉米粉中提取淀粉，采用Sepharose CL-2B琼脂糖凝胶柱层析研究淀粉的组成变化。【结果】湿磨玉米粉淀粉的GPC图谱呈双峰分布，将淀粉分子分为大分子支链区（Ⅰ区）和直-支混合区（Ⅱ区），Ⅰ区洗脱体积在21～42 ml，相对分子量平均聚合度在26 632～18 666，Ⅱ区洗脱体积在42～70 ml，相对分子量平均聚合度在18 666～8 046;发酵改性玉米粉的淀粉GPC图谱也呈双峰分布，但两区分子平均聚合度范围缩小，淀粉组成发生了变化;挤压玉米粉淀粉的GPC图谱呈单峰分布，相对分子量平均聚合度在27 960～9 374。【结论】乳酸菌发酵和挤压过程中淀粉分子发生了降解，发酵过程中产生降解的淀粉分子主要是介于Ⅰ区和Ⅱ区之间的淀粉分子，而挤压过程中的高温高剪切作用使Ⅰ区大部分淀粉分子发生降解。     

茶多酚提取纯化及其功能特性研究进展

茶多酚(tea polyphenol)是从茶叶中提取的一种新型天然抗氧化剂,无副作用、无毒性,具有抗氧化、抗肿瘤、抗辐射、降血糖、降血脂、提高机体免疫力等药理和保健功能。该文对茶多酚的提取纯化及其功能特性进行了综述,介绍了茶多酚的多种提取纯化方法和工艺特点,为其进一步开发利用提供参考依据。     

人凝血酶原复合物提取及纯化工艺的研究

[目的]确定血浆中人凝血酶原复合物提取及纯化的最佳工艺条件。[方法]以人血浆为原料,凝血酶原复合物的吸附率和回收率为评价指标,采用单因素试验及正交试验对提取和纯化条件进行优选。[结果]最佳工艺为:选用pH值为7.0的DEAE-Sephadex A50凝胶从人血浆中提取人凝血酶原复合物,吸附50 min时,凝胶对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的吸附率可达84.0%、86.5%、85.7%和78.0%;采用NaCl浓度为0.1 mol/L、pH值为7.2的洗涤液洗涤吸附后的凝胶5次,然后用NaCl浓度为2.0 mol/L的洗脱液洗脱3次,对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的回收率可达84.9%、76.4%、82.8%和78.7%。[结论]该工艺合理、可行,适合人凝血酶原复合物的工业化生产。     

猪精液抑制素的提取与纯化及其生物活性的测定

新鲜猪精液经乙醇沉淀，丙酮清洗，得抑制素粗提物，再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤，收集蛋白质洗脱峰。采用小鼠ｈＣＧ卵巢增重抑制法（改良斯蒂尔曼－－波菜生物测定法）地其进行生物活性测定，粗品１０００μｇ剂量组对性成熟前雌性小鼠卵巢增重的抑制作用极显著（Ｐ〈０．０１），第二峰下降部分２００μｇ组的抑制效果显著（Ｐ〈０．０２）。表明从精液中可提取到具有生物活性的抑制素制品。     

苹果多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白的分离纯化

以膨大期的富士苹果果皮为材料,通过匀浆、硫酸铵沉淀、透析、聚乙二醇6000浓缩、CM-SephadexC-50离子交换柱和Sephadex G-100分子筛凝胶过滤层析分离纯化出苹果多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白。用还原糖法测定其具有抑制多聚半乳糖醛酸酶活性,bradford法进行定量,经非连续SDS-PAGE分析为电泳纯,根据标准蛋白鉴定其亚基的分子量为41 kD。为苹果PGIP的纯化建立了一种有效的方法。     

桃PGIP基因及cDNA的克隆及序列分析

通过PCR扩增了桃的PGIP基因及eDNA序列,并进行了序列之间的比对及分析。结果表明,桃的PGIP基因全长1092bp,而其cDNA序列只有1045bp,PGIP基因中含有一段长147bp的内含子,且内含子符合GT-AG规律。这与其他核果类植物的PGIP基因构成基本相同。其基因序列与GenBank中已登录的3个桃以及其他核果的序列比对,其同源性达92％～99％;与苹果、梨和大桉的同源性分别为85％、84％和8．4％。     

基于PGIP基因的蔷薇科植物分子进化树构建与分析

从NCBI网站筛选到97条蔷薇科植物PGIP基因序列,用邻位相接法构建系统进化树,分析他们之间的亲缘关系。结果表明,蔷薇科植物PGIP基因可聚为17个类群,这与传统的分类结果基本一致,初步探讨了吐根树、耆叶梅、Cercocarpus ledifolius、Purshia tridentate、Horkelia cuueata和卡塔林硬木的亲缘关系,对进一步研究蔷薇科植物之间进化与亲缘关系提供参考。     

党参总皂苷的提取·分离和纯化

[目的]优化党参皂苷的提取工艺,并对皂苷进行纯化。[方法]用正交试验优化党参皂苷的提取工艺,通过考察大孔树脂类型、洗脱液pH值对党参皂苷纯度的影响,优化皂苷的纯化方法。[结果]党参皂苷提取的最佳工艺为：提取时间为36 h,提取温度为45℃,料液比为16∶;D101大孔吸附树脂为党参皂苷吸附的最佳树脂,洗脱液pH值为9左右时,得到的皂苷浓度最高。[结论]该试验得到了较高纯度的党参皂苷,为获得高纯度党参皂苷提供了保证。     

鲶鱼体表黏液IgM的分离纯化及其抑菌活性研究

依次采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析法从鲶鱼体表黏液中分离纯化IgM,并对其抑菌活性进行了检测.通过试验可以得出,凝胶层析的最佳分离条件为:0.02 mol/L pH 8.0的Tris-HCl缓冲液、洗脱速度为0.3 mL/min.鲶鱼体表黏液中提取的IgM对大肠杆菌抑菌作用最强,其次是枯草芽孢杆菌,对藤黄微球菌抑菌效果最不明显.在低温贮存时温度控制在0～4℃,有助于保持其抑菌活性,但随着时间的延长,抑菌活性也会逐渐减弱.     

梨成熟果多酚提取工艺条件的优化

[目的]提高梨果实多酚的提取率,研究梨成熟果多酚的提取工艺条件。[方法]利用超声波辅助提取法,在单因素试验的基础上结合正交试验对梨果实多酚的提取工艺条件进行优化。[结果]梨成熟果多酚提取的最佳工艺条件是甲醇浓度100%、料液比1∶15(g∶m L)、超声温度50℃和超声时间5 min,在此条件下提取率是0.056 4 mg/g。[结论]研究可为梨加工品种的筛选及梨资源的高效利用提供参考。     

灰树花多糖的分离、纯化与理化性质

灰树花子实体用热水提取，乙醇沉淀，透析冻干得灰树花多糖粗品，再经Sevag法脱蛋白，DEAE－Sephadex A-25柱层析纯化得到4种多糖分别为PGF－1，PGF－2，PGF－3和PGF－4。4种多糖经纸层析，Sephadex G-200柱层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果表明都为单一均匀组分：PGF－1经纸层及气相色谱分析证实它是一种葡萄糖；凝胶渗透色谱测定其分子量为11万。红外光谱揭示PGF－1含β－型糖苷键。     

鸡心SOD的分离纯化及部分性质研究

为从新鲜鸡心中获得锰超氧化物歧化酶的电泳纯制品并进行性质研究,将鸡机心匀浆,抽提,正丁醇除脂,丙酮分级沉淀,DEAE-Sepharose层析和Superdex-200层析结果为:酶的比活是1 633U/mg,纯化倍数是139.16,全分子相对分子质量是1.037×105,亚基相对分子质量2.63×104.该酶在50℃～70℃有较好的稳定性,最适温度是40℃,pH值在3～9之间有较好的稳定性.Ca2+、二硫苏糖醇、尿素对鸡心SOD有一定的激活作用,Ba2+和Zn2+对鸡心SOD抑制作用较弱,Cu2+抑制作用较强,低摩尔浓度乙二胺四乙酸二钠对酶有激活作用,高摩尔浓度有抑制作用.     

紫红薯多糖的提取纯化及抗氧化作用研究

实验优化了从紫红薯中提取多糖的工艺,利用DEAE-52柱层析分离纯化出紫红薯多糖Ⅰ和Ⅱ两个组分,并测定了对.OH、DPPH.和ABTS的清除作用。结果表明:紫红薯多糖最佳提取条件为提取时间60 min、料液比为1∶8、超声功率为240 W,经纯化后的紫红薯多糖Ⅰ和Ⅱ具有较好的清除自由基的能力。     

梨渣可溶性膳食纤维的提取及抗氧化特性

用NaOH对梨渣中可溶性膳食纤维进行提取,探讨提取时间、温度、液料比等对提取率的影响,优化提取工艺并测定可溶性膳食纤维的抗氧化能力。结果表明,最佳提取工艺条件为NaOH质量浓度30.0 mg/mL,提取时间2.38 h,液料比9.58∶1,温度89.63℃,膳食纤维的提取率为14.12%;梨渣膳食纤维对O2-.和DPPH.的最高清除率分别为41.32%和60.28%,具有较强的抗氧化作用。