变青链霉菌DNA的研究——Ⅰ.电泳过程中的特异性降解

变青链霉菌基因组DNA和质粒DNA在某些特定批号的电泳缓冲液中电泳时,双链DNA遭到很强的降解。变青链霉菌基因组DNA受到有限切割而产生的DNA片段的平均大小为6kb左右。天兰色链霉菌A3(2)和好几种其它链霉菌菌株的DNA,以及大肠杆菌的DNA在同样条件下并不受这种切割的影响。已经证明,这种特异性对变青链霉菌DNA的切割不是由于缓冲液中污染了微生物,进而产生核酸酶所致,而是由于某些批号的EDTA商品中污染了Fe~(2+)所致。变青链霉菌中DNA制备物“较差”的许多报道可能都是上述原因所致。     

重金属胁迫培养对微生物生长的影响

为探究重金属胁迫对微生物生长的影响,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、啤酒酵母菌和链霉菌为材料,用传统微生物培养方法,研究了不同Hg2+、Cd2+、Cr6+和Pb2+浓度下4种微生物的生长状况。结果表明:低浓度重金属离子对4种微生物生长有促进作用,高浓度有抑制作用,G+较G-对Hg2+和Cd2+更为敏感;4种微生物对重金属离子的敏感性表现为链霉菌>枯草芽胞杆菌>大肠杆菌>啤酒酵母菌,对微生物毒性顺序为Hg2+>Cd2+>Cr6+>Pb2+。     

Cloning and heterologous expression of the epothilone gene cluster

The polyketide epothilone is a potential anticancer agent that stabilizes microtubules in a similar manner to Taxol. The gene cluster responsible for epothilone biosynthesis in the myxobacterium Sorangium cellulosum was cloned and completely sequenced. It encodes six multifunctional proteins composed of a loading module, one nonribosomal peptide synthetase module, eight polyketide synthase modules, and a P450 epoxidase that converts desoxyepothilone into epothilone. Concomitant expression of these genes in the actinomycete Streptomyces coelicolor produced epothilones A and B. Streptomyces coelicolor is more amenable to strain improvement and grows about 10-fold as rapidly as the natural producer, so this heterologous expression system portends a plentiful supply of this important agent.     

益生菌对载鸭水体和产蛋性能的影响及其分子机制

【目的】研究饲粮添加芽孢杆菌和载鸭水体应用光合细菌对载鸭水体和鸭产蛋性能的影响及其分子机制。【方法】采用“地面平养＋水池”养殖模式,以2×2因子试验设计,选择同批次连城白鸭和樱桃谷鸭杂交后代蛋鸭240只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复10只,每个重复独立一栏。两处理因子分别为饲粮添加有效活菌含量为8×10⁷ cfu/kg的枯草芽孢杆菌和载鸭水体应用光合细菌至水体有效活菌含量为1.8×10¹² cfu/m³。对照组为不应用芽孢杆菌和光合细菌,光合组为只应用光合细菌,芽孢组为只添加芽孢杆菌,联合组为既添加芽孢杆菌又应用光合细菌。预饲7 d,试验期120 d。试验期间统计每10 d的平均产蛋率、平均采食量和平均料蛋比;每10 d采集水样用于检测大肠杆菌和沙门+志贺氏菌数量;每15 d采集水样和血样用于检测内毒素浓度。试验结束时,采集新鲜粪样用于检测大肠杆菌和沙门+志贺氏菌数量;取十二指肠、空肠和回肠黏膜用于检测内毒素水平;取空肠、回肠和脾脏组织用于炎症和凋亡相关基因表达。试验鸭自由饮用池水、自由采食、自然光照。水体和血液内毒素、采食量、产蛋率、料蛋比、水体大肠杆菌和沙门+志贺氏菌数据采用重复测量的线性混合模型分析,LSD修正法多重比较。粪便微生物数量、肠道黏膜内毒素水平和组织基因表达数据采用单因子方差分析,Duncan法多重比较。【结果】芽孢杆菌和光合细菌不显著影响鸭采食量（P＞0.05）、空肠Caspase-3和Bcl-2 mRNA表达（P＞0.05）、回肠Bcl-2 mRNA表达（P＞0.05）、以及脾脏IL-1β mRNA表达（P＞0.05）,但芽孢杆菌和光合细菌显著提高蛋鸭产蛋率（P ＜0.001）,显著降低蛋鸭料蛋比（P＜0.001）、载鸭水体（P＜0.001）、十二指肠（P＜0.01）和回肠（P＜0.01）内毒素浓度、粪便大肠杆菌数（P＜0.001）、空肠TLR4（P＜0.05）和回肠Caspase-3（P＜0.05）mRNA表达水平。采食量、产蛋率、料蛋比、水体大肠杆菌、沙门+志贺氏菌和内毒素水平存在显著的时间效应（P＜0.001）。与芽孢组和联合组相比,对照组和光合组血液内毒素和粪便沙门+志贺氏菌数量显著提高,对照组空肠粘膜内毒素水平、载鸭水体沙门+志贺氏菌数量以及脾脏TNF-α mRNA表达水平显著提高。联合组水体大肠杆菌数量显著低于对照组、光合组和芽孢组。仅联合组回肠TLR4 mRNA表达水平显著低于对照组,脾脏IL-10 mRNA表达水平显著高于对照组。【结论】芽孢杆菌和光合细菌可能通过降低载鸭水体革兰氏阴性菌数量和内毒素水平、降低肠道和血液内毒素浓度、降低炎症反应和肠道细胞凋亡,提高蛋鸭产蛋性能。     

桫椤叶和茎干抑菌活性初探

[目的]初步探讨桫椤叶和茎干提取物的抑菌活性,为中药龙骨风(桫椤叶的茎干)研究开发提供依据。[方法]以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌为供试菌种,研究了桫椤茎叶和茎干甲醇提取物对它们的抑菌作用,并与黄连提取物的抑菌效果进行比较。[结果]桫椤叶对大肠杆菌的抑制效果最好,最低抑制浓度为0.10%,对枯草芽孢杆菌的抑制效果次之,对金黄色葡萄球菌的抑制作用最弱;桫椤茎干对枯草芽孢杆菌的抑制效果最好,最低抑制浓度为0.10%,对大肠杆菌的抑制效果次之,对金黄色葡萄球菌的抑制作用最弱。桫椤叶和茎干提取物的抑菌作用与黄连提取物的相比较弱。[结论]桫椤叶对大肠杆菌的抑制效果较好,桫椤茎干对枯草芽孢杆菌的抑制效果较好,最低抑制浓度均为0.10%。     

一个链霉菌中微型转座子系统的构建

针对链霉菌中现有转座子系统的一些缺陷,构建了一个链霉菌中的微型转座子质粒pHL265,它携带的转座酶基因tnpA在转座子mini-Tn4560A外部,降低了发生二次转座的可能性,并带有大肠杆菌与链霉菌进行属间接合转移的起始位点oriT,可通过接合转移的方式将其从大肠杆菌导入到链霉菌中.利用该转座子系统转座筛选得到天蓝色链霉菌M145的约1 000株转座突变株.选取其中的8株,经Southern杂交验证可知,该转座子的转座基本具有随机性,并在宿主DNA中稳定存在.此系统为链霉菌功能基因组的研究提供了新的技术手段.     

藜蒿浸出汁抑菌作用及饮料工艺的研究

以湖南沅江的新鲜藜蒿为原料,研究了藜蒿浸出汁对细菌和真菌的抑制作用及藜蒿饮料生产工艺。结果表明藜蒿浸出汁对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、变形杆菌、葡萄酒酵母有比较好的抑菌效果。通过正交试验,确定了该饮料的最佳组合方案为A4B1C2D4E2。     

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中3个调控基因的检测

玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)Men-myco-93-63及其发酵液对多种重要植物病原菌均表现出很强的抑制作用,在植物病害生物防治方面有很大的应用潜力。根据天蓝色链霉菌A3(2)调控基因tcrA、sarA和scrX序列设计引物,扩增Men-myco-93-63基因组DNA,分别获得705bp、1 472bp和473bp的片段,经测序和比对,上述片段与天蓝色链霉菌A3(2)的tcrA、sarA和scrX基因在核苷酸序列和氨基酸序列上同源性均为99%,因此,推测玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中很可能含有这些调控基因。Men-myco-93-63中这3个调控基因的初步检测为玫瑰黄链霉菌功能基因的获得、菌株的遗传改良和代谢调控途径的研究提供了重要依据。     

扁柏醇与托酚酮抑菌活性的初步研究

采用滤纸片扩散法测定了扁柏醇和托酚酮对大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).结果表明,扁柏醇和托酚酮均对供试菌种有抑制作用,扁柏醇对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的MIC分别为300和100 μg/mL,MBC均为300μg/mL;托酚酮对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的MIC分别为100和50 μg/mL,MBC分别为300和100μg/mL.通过不同浓度的扁柏醇和托酚酮对供试菌的抑制作用比较,推测其活性基团为羟基和酮基.     

陈艾抑菌活性的初步研究

[目的]研究各种浓度的陈艾提取液和陈艾熏烟对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、青霉3种微生物的抑制作用,为其综合开发利用开辟新的途径。[方法]采用滤纸片扩散法测定各种浓度的陈艾提取液和陈艾熏烟对3种微生物的抑制作用。[结果]陈艾提取液和熏烟对3种微生物都有较明显的抑制作用,抑制效果大小依次为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、青霉,陈艾水提液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和青霉菌的最小抑菌浓度分别为0.033 3,0.028 6,0.040 0 g/ml。[结论]试验证实了陈艾的抑菌作用,对细菌的抑制效果强于霉菌。     

穿梭表达载体pYG43的构建及碱性纤维素酶基因的分泌表达

用枯草杆菌强启动子P43构建了大肠杆菌 -枯草杆菌穿梭表达载体pYG43 ,其可在大肠杆菌胞内高效表达β 半乳糖苷酶 (最高达92 0 0U)。利用该载体分泌表达了枯草杆菌碱性纤维素酶 (最高达 60U/ml) ,在原宿主菌 (B .subtilis 1A747)的基础上提高了 5～ 7倍。     

粪肠球菌和枯草芽孢杆菌的体外评价研究

测定了粪肠球菌(Enterococcus Faecalis)和枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)对致病性大肠杆菌O54、霍乱沙门氏菌A72及正常菌嗜酸乳酸杆菌CICC6075生长的影响。结果表明,粪肠球菌和枯草芽孢杆菌均可较好的抑制大肠杆菌和沙门氏菌的生长;粪肠球菌对嗜酸乳酸杆菌起到较好的促生长作用;枯草芽孢杆菌与嗜酸乳酸杆菌混合培养的前35 h,对嗜酸乳酸杆菌有一定的抑制作用,但35 h以后则对其有较好的促生长作用。     

三种苔藓植物的抑菌性研究

为了研究苔藓植物的抑菌效果。以山西省分布广泛、生物量较大的刺叶提灯藓、直蒴绢藓和山羽藓为试验材料,用分光光度法对3种苔藓植物的水提液进行抑菌效果的测定。3种苔藓植物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌均有不同程度的抑制作用,山羽藓和直蒴绢藓对细菌的抑制强度均是枯草杆菌>金黄色葡萄球菌>大肠杆菌,刺叶提灯藓对细菌的抑制强度为金黄色葡萄球菌>枯草杆菌>大肠杆菌。在3种苔藓植物中以刺叶提灯藓的抑菌性最强,高达79.03%。抑菌效果与供试细菌的种类有关,也与苔藓植物种类有关。有些苔藓植物种类在有害生物防治和一些疾病的治疗中有明显的开发利用价值。     

A useful selective bactericidal property of tergitol-7

Starch tryptone agar containing 1 : 20,000 Tergitol-7 was successfully sterilized in the Arnold by one 30-minute heating period. Decreasing the concentration to 1 : 30,000 resulted in 4 per cent failures. A concentration of 1 : 20,000 in the cold killed spores of B. mycoides and an unidentified heat-resistant bacillus but failed to kill spores of B. subtilis. Concentrations of 1 : 30,000 permitted growth after sterilization of all species of Streptomyces which were tested, while concentrations of 1 : 20,000 permitted growth of all species but one. Concentrations of 1 : 20,000 did not inhibit the growth of selected species of Penicillium and Aspergillus or of Staph. aureus. Concentrations as high as 1 : 10,000 did not inhibit the growth of E. coli.     

海芦笋黄酮化合物抑菌效果研究

研究海芦笋黄酮化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、副溶血弧菌的体外抑制效果。结果表明,海芦笋黄酮化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、副溶血弧菌的抑制效果良好,而抑菌效果为：大肠杆菌〈沙门氏菌〈枯草芽孢杆菌〈副溶血弧菌〈金黄色葡萄球菌。     

健康鸡猪体内大肠杆菌对四环素的耐药性及耐药基因分布

【目的】四环素作为人类和动物临床上广泛使用的广谱抗生素,其耐药性问题一直为全球所关注。健康动物体内的共生性大肠杆菌作为耐药指示菌和耐药基因的贮存库,了解其对四环素的耐药性及耐药机制对于疾病的防控具有重要意义。【方法】从健康鸡、猪体内分离大肠杆菌,用微量肉汤法检测其对四环素的耐药性,并用PCR方法对耐药菌株中8种四环素耐药基因的携带情况进行调查,运用统计学方法分析鸡、猪体内大肠杆菌分离株的耐药性和耐药基因分布情况的差异。【结果】总共分离鉴定出大肠杆菌269株,其中86.2%的菌株对四环素产生了耐药性,健康猪体内大肠杆菌分离株的耐药性明显高于健康鸡体内分离株(P0.05)。tet(A)、tet(B)和tet(M)3种四环素耐药基因广泛存在于健康鸡、猪体内的共生大肠杆菌中,所携带比例分别为87.9%、28.4%和15.5%;所有对四环素耐药的大肠杆菌均携带tet(A)或tet(B)基因,其中25.0%和2.6%的耐药菌株分别携带有2种和3种耐药基因,tet(M)基因与tet(A)或tet(A)+tet(B)基因共存于对四环素耐药的大肠杆菌中;健康鸡、猪体内耐药性大肠杆菌在tet(A)+tet(M)基因携带率方面的差异具有统计学意义(P0.01)。【结论】健康鸡、猪体内的大肠杆菌分离株普遍对四环素耐药,四环素耐药基因广泛分布于大肠杆菌分离株中,大肠杆菌对四环素的耐药机制以主动外排作用为主,核糖体保护基因在大肠杆菌对四环素耐药机制方面的作用尚待进一步的研究。     

天蓝色链霉菌M145中bldA依赖性突变的遗传定位与分析

bldA编码天蓝色链霉菌中识别UUA密码的tRNA,大部分菌株的生长不需要bldA功能。M145菌株发生了突变,使bldA成为必需基因。本研究以M145和1258等菌株为亲本,通过3轮杂交筛选构建了菌株LY3,作为遗传定位bldA依赖性(bldA-dependent,bad)突变的亲本之一。用LY3与1258杂交,筛选了217个重组子并鉴定其基因型。对217个重组子的基因型进行遗传分析,将bad突变定位于天蓝色链霉菌染色体SCO3934与SCO4659基因之间的758 kb区域。     

黄兰叶片和花瓣挥发性成分及其抑菌效果

采用顶空固相微萃取和气象色谱质谱技术研究了黄兰(Michelia champak L.)叶片和花瓣的挥发性成分;并提取叶、花挥发物精油,测定了不同质量分数的精油对大肠杆菌ATCC6739、金黄色葡萄球菌ATCC6538、枯草芽孢杆菌CMCC63501生长的影响。结果表明,黄兰叶片与花瓣的挥发性成分中都含有香叶烯、β-榄香烯、石竹烯等物质,叶片中的挥发性有机成分都是萜烯类物质,而花瓣的挥发性有机成分中除了萜烯类物质外,还含有较多的芳樟醇等醇类物质和安息香酸甲酯等酯类物质;黄兰叶片与花瓣的精油对大肠杆菌没有抑制作用,但质量分数为2.5%的精油对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌具有明显的抑制作用,其中2.5%的叶片精油对枯草芽孢杆菌的抑菌率达到68.20%。     

重金属胁迫培养对微生物蛋白质含量的影响

[目的]研究重金属胁迫培养对微生物蛋白质含量的影响。[方法]选择4种典型微生物（大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、啤酒酵母、链霉菌）为试验材料,采用传统微生物培养方法,在不同浓度的Hg2＋、Cd2＋、Cr6＋和Pb2＋重金属离子下进行胁迫培养,通过测定4种典型微生物的蛋白质含量,探讨重金属胁迫对4种微生物蛋白质合成的影响。[结果]低浓度的重金属对4种微生物蛋白质的合成有一定的促进作用,随着重金属浓度的增加,微生物蛋白质的合成均受到不同程度的抑制。枯草芽孢杆菌对这4种重金属的耐受性比其他3种微生物要强,4种重金属离子在比较大的质量浓度范围内（5～50 mg/L）对枯草芽孢杆菌蛋白质的合成有促进作用。低浓度Cr6＋对大肠杆菌蛋白质的合成有较强的促进作用;Pb2＋对大肠杆菌蛋白质合成有明显的抑制作用,对其他3种微生物蛋白质合成在一定浓度范围内有促进作用;低浓度的Cd2＋对4种微生物蛋白质的合成都有促进作用。[结论]该研究为探讨微生物对重金属胁迫的生理响应提供了理论依据。