切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗点眼免疫反应Ⅱ.组织学与免疫组织化学研究

60只1日龄健康雏鸡随机分为A、B、C三组。A组于1日龄手术切除下眼睑结膜。A、B两组于12日龄时结扎鼻泪管，用新城疫克隆30苗点眼。C组为对照组。23日龄分别采取其CALT和哈德氏腺，比较观察其组织细胞。结果，1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡CALT缺失，点眼免疫后，哈氏腺的免疫细胞也较正常免疫鸡少，而正常接种ND克隆30（B组）后，CALT发生早，生长快，淋巴细胞数量多，故本实验证实CALT对哈氏腺免疫细胞的数量与成分有一定的调控作用。CALT缺失鸡是研究黏膜免疫系统比较理想的模型。     

切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗的免疫反应Ⅰ.局部与循环抗体检测

实验将 60只 1日龄健康雏鸡随机分为A、B、C 3组。A组为CALT缺失组 ,B组为免疫组 ,C组为非免疫对照组。A组于 1日龄手术切除下眼睑结膜 ,A、B两组于 1 2日龄结扎鼻泪管后进行点眼免疫接种新城疫克隆 30疫苗。2 3日龄时 ,收集A、B、C各实验组鸡的血清和泪液 ,做红细胞凝集抑制试验 (HI试验 )、酶联免疫吸附试验(ELISA)。比较观察各实验组雏鸡血清和泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量的变化特点。结果 ,1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡CALT缺失 ,CALT缺失鸡点眼免疫后 ,泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量比免疫组雏鸡低。但对雏鸡的抗体生成的规律并不产影响。故实验证实了CALT对眼区局部抗体的产生及其种类有重要的调控作用 ,协同哈氏腺完成局部免疫的功能     

切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗的免疫反应I.局部与循环抗体检测

实验将60只1日龄健康雏鸡随机分为A、B、C3组。A组为CALT缺失组，B组为免疫组，C组为非免疫对照组。A组于1日龄手术切除下眼睑结膜，A、B两组于12日龄结扎鼻泪管后进行点眼免疫接种新城疫克隆30疫苗。23日龄时，收集A、B、C各实验组鸡的血清和泪液，做红细胞凝集抑制试验（HI试验）、酶联免疫吸附试验（ELISA）。比较观察各实验组雏鸡血清和泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量的变化特点。结果，1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡CALT缺失，CALT缺失鸡点眼免疫后，泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量比免疫组雏鸡低。但对雏鸡的抗体生成的规律并不产影响。故实验证实了CALT对眼区局部抗体的产生及其种类有重要的调控作用，协同哈氏腺完成局部免疫的功能。     

结膜相关淋巴组织和哈氏腺免疫协同关系的研究Ⅰ．结膜相关淋巴组织缺失对哈氏腺点眼免疫应答的影响

采用ＥＬＩＳＡ、免疫组织化学方法、手术切除结膜相关淋巴组织（Ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ，ＣＡＬＴ）法对结膜相关淋巴组织和哈氏腺（Ｈａｒｄｅｒｉａｎ Ｇｌａｎｄ，ＨＧ）在点眼免疫应答过程中的相互协同关系进行了研究。研究发现，采用外科手术于１日龄切除结 膜相关淋巴组织后切除组点眼免疫后泪液中ＮＤＶ－特异性ＩｇＡ、ＩｇＭ型抗体滴度及哈氏腺中ＩｇＡ、ＩｇＭ     

鸡结膜结合淋巴组织（CALT）对新城疫疫苗点眼免疫应答

１８０只１日龄公雏平均分成Ａ、Ｂ、Ｃ三组。Ａ组于１日龄手术切除下眼睑结膜。Ａ、Ｂ两组于１０日龄和２０日龄用鸡新城疫Ⅱ系（ＮＤⅡ）弱毒疫苗点眼首免和二免，Ｃ组为对照组。定期收集泪液、血清、ＣＡＬＴ和哈德氏腺，比较观察其抗体ＨＩ效价消长规律与免疫组织细胞变化特点。结果，Ｃ组非免鸡泪液ＨＩ效价比血清ＨＩ效价稍低，１０至３４日龄均呈直线下降，３４至４８日龄维持在极低的水平上（１．２￣２Ｌｏｇ２）。Ｂ组点眼     

“紫黄散”对鸡脾脏和胸腺淋巴细胞的影响

为了研究中药复方"紫黄散"对鸡免疫器官的调节作用,试验选择120只1日龄海兰褐雏鸡随机分为A组、B组、C组、D组,并在A组、B组、C组基础日粮中添加0.2,0.1,0.05 g/只紫黄散,D组为对照组,分别于30日龄、40日龄、50日龄时各组随机抽取10只鸡剖杀,取鸡胸腺和脾脏组织块,在显微镜(400×)下观察和比较各组胸腺及脾脏形态结构的变化情况,并记录免疫器官内淋巴细胞的数量变化。结果表明:试验组鸡免疫器官内的淋巴细胞数量高于对照组,且以B组效果最佳。说明中药复方"紫黄散"在一定剂量范围内能有效增加鸡免疫器官内淋巴细胞数量,进而增强鸡体的免疫力。     

猪红细胞CD58分子协同NDⅣ疫苗免疫的佐剂效应

用从木瓜酶修饰的猪红细胞提取的 CD5 8分子 ,协同 ND 疫苗免疫 8日龄雏鸡 (分为试验 A组、对照 B组 ) ;用从正常猪红细胞提取的 CD5 8分子 ,协同 ND 疫苗免疫 18日龄雏鸡 (分为试验 C组、对照 D组 ) ,以β-微量法测定ND抗体效价 ,以 α-醋酸萘酯酶染色法检测鸡外周血 T细胞的变化 ,并分别用 NDV F4 8E9强毒株在免疫后 2 4 d攻击 A组和 B组鸡、39d攻击 C组和 D组鸡。结果表明 ,免疫前 ,8日龄雏鸡的 ND抗体效价为 2 5.8,18日龄雏鸡的 ND抗体均为阴性 ;免疫后 ,与对照 D组比较 ,试验 C组的 ND抗体提前 4 d达到 2 4 .8,并且试验 C组 ND抗体效价显著高于对照 D组 ( P<0 .0 1) ,保护期延长 ;试验 A组雏鸡体内 ND抗体变化和对照 B组相似 ,但试验 A组雏鸡外周血 T细胞数量显著高于对照 B组 ( P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。攻毒试验结果显示 ,试验 A组鸡死亡率为 33% ,对照 B组鸡死亡率为6 3% ;试验 C组鸡死亡率为 17% ,对照 D组鸡死亡率为 5 3%。本研究结果表明 ,猪红细胞 CD5 8分子具有较好的疫苗佐剂效应     

猪红细胞CD58分子的疫苗佐剂效应研究

用从木瓜酶修饰的猪红细胞提取的CD58分子协同NDⅣ疫苗 ,免疫 8日龄雏鸡 (分为试验A组、对照B组 ) ;用从正常猪红细胞提取的CD58分子协同NDⅣ疫苗 ,免疫 18日龄雏鸡 (分为试验C、对照D组 )。以 β_微量法测定ND抗体效价 ,以α_醋酸萘酯酶染色法检测鸡外周血T细胞的变化 ,并分别用F48E9强毒株在免疫后 2 4d攻击A组和B组鸡、39d攻击C组和D组鸡。结果表明 ,免疫前 ,8日龄雏鸡的ND抗体效价为 2 5.8,18日龄雏鸡的ND抗体均为阴性 ;免疫后 ,与对照D组比较 ,试验C组的ND抗体提前 4d达到 2 4.8,并且试验C组ND抗体效价显著高于对照组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,保护期延长 ;试验A组雏鸡体内ND抗体变化和对照B组相似 ,但试验A组雏鸡外周血T细胞数量显著高于对照B组 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。攻毒试验结果显示 ,试验A组鸡死亡率为 33%、对照B组鸡死亡率为 6 3% ;试验C组鸡死亡率为 17% ,对照D组鸡死亡率为 5 3%。本研究结果表明猪红细胞CD58分子具有较好的疫苗佐剂效应。     

鸡眼区相关淋巴组织对ND疫苗点眼免疫应答Ⅱ.眼区局部T淋巴细胞亚群的变化

本研究采用流式细胞仪技术对鸡眼区相关淋巴组织(HALT)在鸡新城疫疫苗点眼免疫后的局部T淋巴细胞亚群的变化进行了研究。研究发现,LaSota 系ND疫苗点眼免疫后眼区相关淋巴组织对ND疫苗可产生良好的细胞免疫应答。免疫组结膜相关淋巴组织(CALT)和哈氏腺(HG)中CD4 T及CD8 T淋巴细胞数量于首免后迅速升高。免疫期间其百分比含量明显高于非免疫组,到40 日龄时,有恢复到正常值的趋势。     

鸡新城疫疫苗点眼免疫后哈氏腺中IgA、IgM、IgG型浆细胞的数量变化及分布特点

用Lasota系ND疫苗分别于10、20日龄进行点眼免疫后采用SLAB免疫组织化学对鸡哈氏腺在新新城疫（Newcastle Disease,ND)疫苗点眼免疫后IgA、IgM、IgG型浆细胞的数量变化及分布特征进行了研究。研究发现，Lasota系ND疫苗点眼免疫后鸡哈氏腺中（Harderian Gland,HG)中IgA、IgM、IgG型浆细胞的出现较对照组早，并于48日龄达到峰值，一免及二免后三种类型的浆细胞数量均极高于对照组（P＜0．01），其中IgA浆细胞的数量最多，IgM型浆细胞次之，IgG型浆细胞的数量最少。IgA、IgM、IgG三种浆细胞均散在分布于哈氏腺的间质中，且主要围绕各级管腔上皮及腺上皮分布，其中成熟的浆细胞紧贴腺上皮及管腔上皮分布。表明Lasonta系ND疫苗点眼免疫后可促进哈氏腺中的IgA、IgM、IgG型浆细胞的分化、成熟，这些浆细胞分泌的抗体成分可通过上皮而被分泌到管腔中去，最后到达泪液中，在眼区及上呼吸道起到保护作用。     

鸡马立克病CVI988疫苗不同接种部位对免疫效果的影响

探讨鸡马立克病CVI988疫苗不同的接种部位对免疫效果的影响,将96只1日龄海兰褐公雏鸡随机分成对照组(C)、腹腔注射接种组(PI)和颈部皮下接种组(HI),C组腹腔注射0.2mL疫苗稀释液,PI组和HI组注射0.2mL CVI988疫苗。在第3、6、10、15、20、26、35、45天对3组各4只鸡进行心脏采血,制作血涂片,分别进行ANAE和甲基绿-派洛宁染色,观察血液中阳性B淋巴细胞和T淋巴细胞百分率的变化。结果显示,在免疫早期(3日龄～6日龄),免疫组的阳性T淋巴细胞显著低于对照组,而阳性B淋巴细胞在第3天就显著高于对照组;在免疫中后期,免疫组的阳性T淋巴细胞和B淋巴细胞基本都显著高于对照组;并且PI组的阳性T淋巴细胞高于或显著高于HI组,阳性B淋巴细胞在第15天显著高于HI组。由此可见,CVI988疫苗接种第3天产生体液免疫效应,10d后细胞免疫效应高于对照组,即早期免疫效果主要靠体液免疫,腹部免疫接种效果优于颈部免疫,为马立克病更有效的免疫接种提供了理论依据。     

Consequence of Cryptosporidiosis on the immune response of vaccinated broiler chickens against Newcastle disease and/or avian influenza

The consequence of cryptosporidiosis on the immune response of vaccinated chickens against Newcastle disease and/or avian influenza was studied by using 240, 1 day old, male, white Hy-Line chicks and divided into 8 groups and subgroups. Each group or subgroup was consisting of 30 chicks (15?×?2 replicates). The first and second groups were kept as unvaccinated control, G1uninfected and G2 infected. G3, G4 and G5 contained 2 subgroups A&B (G3A, G3B, G4A, G4B, G5A and G5B). Chicks of subgroup A were vaccinated only while chicks of subgroup B were infected and vaccinated. These chicks were orally inoculated with 5?×?10⁵ oocysts of Cryptosporidium baileyi (C. baileyi) at 2 days of age. Chickens were vaccinated intraocular with live Newcastle disease (ND) vaccine (Hitchner on day 7th and LaSota on day 17th of chicken life) (G3) or vaccinated by subcutaneous route with Volvac®- H5N2- AI vaccine on day 10 of chicken life (G4). Last group (G5) was infected similarly and vaccinated with ND and AI vaccines with the same day, dose and route of vaccination for each one. Random blood samples were collected for 3 weeks post-vaccination for investigation of humoral immune response against Newcastle and/or avian influenza vaccines by the haemagglutination inhibition (HI) test. The results showed that H5N2 vaccine at day 10 of chicken life is effective in chickens indicated by the geometric mean of HI titer against AI virus. The findings of this study showed that the infection with Cryptosporidia in the broiler chicken has a depressive effect on the immune status of the birds vaccinated against ND and/or AI vaccination. Moreover, the obtained protection rates against challenge with virulent ND virus observed to be parallel to the results of HI- test. Also, by using 2 different antigens (one commercial and field prepared antigen) to avian influenza virus, lower Geometric mean (GM) HI titer were appeared in infected and vaccinated group than vaccinated group only. A study of the relative lymphoid organs weight such as bursa of Fabricius from the experimental chicks indicated that those organs were comparable between the groups infected-vaccinated and vaccinated only. Non significant variations in final live weight between uninfected control and infected groups were indicated. Also, H5N2-AI vaccination at 10 days old did not affect the final live weight. ND and/or AI Vaccination could not be a substitute to application of good hygienic measures and fecal examination of the birds especially for protozoal diseases such as cryptosporidiosis. It could be concluded that cryptosporidiosis could be one cause of ND and/or AI vaccination failure in poultry farms.     

当归多糖对鸡禽流感-新城疫重组二联苗免疫效果的影响

将80只1日龄健康罗曼雏鸡随机分为4组,每组20只。常规免疫程序进行免疫,并分别于1日龄皮下注射生理盐水以及不同剂量的当归多糖,连续7d,于7、14、21、28、35、42、49、56日龄采血,检测AI和ND抗体效价,探讨当归多糖的免疫佐剂效果。试验结果表明：各组当归多糖均能提高AI—HI和ND—HI抗体效价,其中中剂量组抗体高峰期持续时间长,免疫后期有延长较高抗体存在的趋势,具有较好的免疫辅助效果。     

Role of harderian glands in resistance against Mycoplasma gallisepticum challenge

Harderian glands of one-day-old chickens were surgically removed. At one week old, these chickens and controls from which these tissues were not removed, were vaccinated intranasally with a temperature-sensitive mutant of Mycoplasma gallisepticum. Humoral and local immunity were measured by means of antibody in sera and tracheal washings, respectively. Protection was measured by resistance to intra-air-sac challenge with the S6 strain of M gallisepticum. There was no discernible difference in either humoral or local antibody response between vaccinated chickens from which the glands had been removed and control birds. In addition, both groups were significantly protected against air-sac challenge compared with unvaccinated controls. These results indicate that removal of the Harderian glands neither affects the production of antibody to M gallisepticum, nor alters the effectiveness of temperature-sensitive M gallisepticum vaccination. The role that the Harderian glands play in resistance to M gallisepticum is therefore questioned.     

复方中药对蛋雏鸡感染IBDV后免疫器官的形态学影响

２００只３０日龄健康海兰蛋雏鸡随机分为四组,每组５０只。Ａ组饲料中添加复方中药,接种ＩＢＤＶ;Ｂ组饲料中添加中药,接种ＩＢＤＶ;Ｃ组不添加中药,接种ＩＢＤＶ;Ｄ组不作任何处理为对照组。在接种后７ｄ剖检、取材作石蜡切片,观察鸡免疫器官的形态学变化。结果表明,传染性ＩＢＤ野毒可使鸡免疫器官发育不良,主要导致法氏囊的淋巴细胞变性坏死,抑制免疫活性细胞的生成,导致免疫抑制;中药促进免疫器官发育及免疫活性细胞生成,提高免疫活性,调节免疫抑制,使免疫器官的组织结构保持或恢复正常水平;复方中药抗ＩＢＤＶ感染的效果优于中药。     

感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后局部粘膜免疫功能的变化

雏鸡1日龄感染鸡贫血病毒（CAV），8日龄接种Lasota疫苗，以未感染免疫雏鸡为对照，于免疫后7、14、28d检测其哈德尔腺和盲肠扁桃体T细胞及IgG^ 、IgM^ 、IgA^ 抗体生成细胞数量，泪液、气管液、肠液、胆汁中IgG、IgM、IgA含量以及泪液、胆汁HI抗体滴度的动态变化。揭示了感染CAV雏鸡接种ND疫苗免疫后哈德尔腺、盲肠扁桃体的T细胞和IgG^ 、IgM^ 、IgA^ 抗体生成细胞数量，泪液、气管液、肠液、胆汁中免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量以及泪液、胆汁HI抗体滴度，均较未感染免疫雏鸡明显减少。表明眼部、呼吸道和消化道局部粘膜免疫防御能力减弱。     

新城疫病毒HI抗体效价与流行株感染排毒之间的相关性

为了分析免疫鸡群中新城疫强毒感染流行的原因,明确抗体效价与流行株感染排毒率之间的关系,本研究以LaSota为抗原制备新城疫灭活疫苗,并以0.02mL和0.4mL的量分别免疫3周龄的SPF鸡10只。免疫后7、14、21d分别测定免疫鸡血清中的抗体HI效价。免疫后21d以基因Ⅶd亚型新城疫流行株JS5/05进行攻毒,攻毒后每天观察试验鸡的临床症状,并于攻毒后3、5、7d采集试验鸡的喉气管与泄殖腔棉拭样品进行病毒分离,结果显示,免疫3周后0.02mL和0.4mL疫苗免疫组鸡的血清HI抗体平均效价分别为5.4log2和8.2log2;0.02mL免疫组在攻毒后的排毒率达到100%,且排毒时间较长,而0.4mL免疫组在攻毒后的排毒率明显降低,且排毒时间较短。上述结果表明新城疫抗体效价与流行株感染排毒率之间存在明显的负相关。     

黄芪、白术水煎剂对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

探讨鸡口服黄芪、白术水煎剂对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响。给7日龄健康梅岭土鸡连续7 d饮用口服黄芪或白术水煎剂,12.5 g/kg.d,后分2次间隔14 d滴鼻接种鸡新城疫Ⅳ系弱毒苗(LaSota株)。分别在首免前、及免疫后1、2、3、4周采血,分离血清,用血凝抑制试验检测鸡新城疫抗体效价(HI)。结果显示,口服中药组的鸡血清HI效价高于未服中药对照组,黄芪水煎剂组于二免后1周,白术水煎剂组于二免后1、2周,HI效价显著高于未服中药对照组。结果表明,在疫苗免疫之前给鸡口服白术水煎剂或黄芪水煎剂可以显著增强免疫效果。     

怀牛膝多糖对雏鸡疫苗免疫效果的影响

150羽14日龄蛋公鸡随机均分成3组,用新支二联弱毒苗点眼滴鼻免疫的同时,2个试验组分别肌肉注射高、低剂量的怀牛膝多糖溶液,对照组注射生理盐水,每天注射1次,连续注射3次。分别于免疫后第7、14、21、28、35和42天各组随机抽取8只鸡翼下静脉采血,分离血清,用微量法测定新城疫血凝抑制（HI）抗体效价,于免疫后第10、20、30、40和50天每组随机抽取5只鸡心脏采血,分离淋巴细胞,用MTT法测定淋巴细胞增殖的动态变化,流式细胞仪双染色法检测CD^4＋、CD^8＋T淋巴细胞含量,并放血致死称取体重和胸腺、脾脏、法氏囊的质量,计算器官指数。结果表明,怀牛膝多糖高剂量组的HI抗体效价、CD^4＋/CD^8＋比值和免疫器官指数都明显高于对照组,并且高剂量怀牛膝多糖可以显著促进T淋巴细胞增殖。提示怀牛膝多糖对鸡新支二联疫苗的免疫效果有明显的增强作用。