芸薹属作物在发根农杆菌介导下的最适转化条件

光照和温度对甘蓝、花椰菜和油菜在发根农杆菌介导下的离体遗传转化具有很 大的影响。光下培养的下胚轴切段比暗中培养的下轴胚切段诱发出较多的转化根,而暗中培 养的毛状根比光下培养的毛状根具有较强的侧根分生和伸长生长能力。在25℃的温度条件 下,甘蓝切段的转化频率最高,然而在28℃的温度条件下,甘蓝毛状根的相对生长速度最 高。在5.2～6.7的范围内,pH值对毛状根的生长速率无明显影响。根据环境条件的不同反 应,可以将转化过程分为两个阶段:根诱导阶段和根生长阶段。     

农杆菌介导的长春花毛状根诱导及培养技术

研究了发根农杆菌介导下的长春花毛状根的诱导及培养。不同的菌种、外植体部位、培养基和代谢产物对毛状根诱导效果不同，最高诱导率分别为：Ａ４菌２５．３％；下胚轴２４．１％；１／２ＭＳ培养基２３．３％。农杆菌诱导转化时间１５～２０ｄ。完成了长春花毛状根的筛选克隆及培养     

青蒿植物的遗传转化研究

为了建立利用发根农杆菌诱导青蒿植物Artemisia annuaL.毛状根的培养系统,分别用发根农杆菌Ri1601、ATCC15834感染青蒿无菌苗的子叶、下胚轴、叶片、叶柄等外植体获得毛状根,并比较不同因素对毛状根诱导和生长的影响。发根农杆菌诱导青蒿毛状根的有效方法被建立,借此为青蒿大规模遗传转化提供了理论基础。     

发根农杆菌介导芸芥的遗传转化及其次生代谢物的研究

[目的]研究发根农杆菌介导芸芥的遗传转化条件,并测定次生代谢物的含量。[方法]通过发根农杆菌R1000介导的遗传转化,建立芸芥发状根的诱导和培养体系,采用氯化钯分光光度法和高效液相色谱法对该发根培养物合成硫苷的能力进行初步分析,并分析乙酰丁香酮（As）、浸染液pH值和浸染时间等因素对发状根转化频率的影响。[结果]子叶的转化率明显高于下胚轴;AS最佳浓度为100mg／L,浸染液最佳pH值为5．4,最佳浸染时间为20min。PCR的鉴定结果表明,发根农杆菌R1000的rolB基因已成功地转入并整合到该发根培养物的基因组中。[结论]该方法建立了芸芥发状根培养体系,并初步分析了该发状根中硫苷的含量,为以后的研究奠定了一定的基础。     

根癌农杆菌介导Bt杀虫基因对花椰菜的转化初报

采用 Ti质粒 p KSB带有 Bt杀虫蛋白基因、NPT 选择标记基因及 GUS基因 ,通过根癌农杆菌 L BA40 44菌株的介导 ,将 Bt杀虫基因导入花椰菜品种中。试验以花椰菜下胚轴为外植体 ,将下胚轴切段置于分化培养基 (MS+ 6 - BA1 .0～ 2 .0mg/L + NAA 0～ 0 .5 mg/L)上 ,对影响转化的种种因素进行了试验。得到了转化的愈伤组织及再生植株 ,用组织化学法检测 GUS活性 ,观察到愈伤组织内的转化细胞呈阳性蓝色反应     

柑桔高效离体再生系统研究

研究了植物激素、刻伤、放置方式等因子对广柑子叶和上胚轴切段离体再生的影响 ,建立了一个高效的再生系统 .该系统的最佳条件是 :采用实生苗子叶和上胚轴茎段作为外植体 ,MS无机盐 B5维生素 5%蔗糖 0 .8%琼脂 7.5mg/ L BA 1mg/ L NAA(p H5.7)作为不定梢诱导培养基 ;子叶沿中间纵切为二 ,同时在非切面部分横向刻伤 ,切面朝下与培养基表面接触放置 ;上胚轴则切成 0 .5～0 .8cm长的切段 ,横放于培养基上 .培养条件为恒温 (2 6± 1)℃ ,首先在黑暗下培养 15d,而后转移至16 / 8h光 /暗周期下 ,共经过 70 d培养 ,95%子叶外植体均能发生不定梢 ,平均每个外植体上发生不定梢数为 11.11个 ,96 %的上胚轴切段能发生不定梢 ,平均每个外植体上发生不定梢数为 5个 .这一系统再生频率高 ,操作简便 ,适用于广柑的遗传转化     

柑桔高效离体再生系统研究

研究了植物激素、刻伤、放置方式等因子对广柑子叶和上胚轴切段离体再生的影响,建立了一个高效的再生系统。该系统的最佳条件是：采用实生苗子叶和上胚轴茎段作为外植体,MS无机盐＋B5维生素＋5%蔗糖＋0.8%琼脂＋7.5 mg/L BA+1 mg/L NAA（pH 5.7）作为不定梢诱导培养基;子叶沿中间纵切为二,同时在非切面部分横向刻伤,切面朝下与培养基表面接触放置;上胚轴则切成0.5～0.8 cm长的切段,横放于培养基上。培养条件为恒温(26±1) ℃,首先在黑暗下培养15 d,而后转移至16/8 h光/暗周期下, 共经过70 d培养,95%子叶外植体均能发生不定梢,平均每个外植体上发生不定梢数为11.11个,96%的上胚轴切段能发生不定梢,平均每个外植体上发生不定梢数为5个。这一系统再生频率高,操作简便,适用于广柑的遗传转化。     

发根农杆菌Ri质粒T-DNA对杜仲的遗传转化研究

杜仲是中国特有的经济树种,杜仲毛状根能够合成与杜仲含量相当的次生代谢产物。本实验用发根农杆菌ATCC15834分别感染杜仲Eucommia ulmoides Oliv的子叶、叶片、叶柄、下胚轴和根5个营养器官,结果表明杜仲植物的5个营养器官均能单独诱导出大量的毛状根。经PCR检测,发根农杆菌ATCC15834Ri质粒的rolB基因已转入杜仲毛状根基因组中。说明用发根农杆菌诱导杜仲产生大量的毛状根的方法有效,为大规模用发根农杆菌Ri质粒转化到杜仲植物中提供了理论基础。     

番茄下胚轴组培中器官发生的全息现象

以番茄“矮黄”,“鲜丰”品种的下胚轴１／４切段为外植体,用不同浓度的ＺＴ,ＢＡ,ＫＴ进行芽器官诱导和用不同浓度的ＮＡＡ,ＩＡＡ,ＩＢＡ,２,４－Ｄ进行发根培养实验,结果发现番茄下胚轴切段在离体培养时存在全息现象,无论是芽的诱导还是根的产生,其器官发生的部位及数量、频率的梯度变化都遵循生物全息律。     

农标菌介导的花椰菜遗传转化体系研究

以花椰菜栽培品种“春秋”无菌苗的子叶和下胚轴为外植体 ,在携带 Ca MV Bari- 1基因 的根癌农杆菌菌种 GV310 1的介导下 ,对影响花椰菜遗传转化的诸因素进行了研究 ,建立了较为完善的转化体系 ,其转化率分别达 2 .31%和 2 .5 6 %。在这一转化体系中 ,首先将过夜培养的农杆菌用 MS无机盐液体培养基稀释 5倍或 10倍 ,感染经 2～ 3d预培养的子叶和下胚轴外植体 30 s,然后进行黑暗共培养 1d,外植体经表面灭菌后转接到含 5 0 0mg/ L 羧苄青霉素的分化培养基上。 3周后 ,将分化的不定芽切成 0 .5 cm见方的小块 ,接种在选择培养基上 ,经筛选的转化芽再诱导成苗     

罗汉果遗传转化受体再生体系的建立及发根农杆菌转化初探

以罗汉果品种“青皮果”试管苗的茎段和叶片为外植体,研究适合于遗传转化的受体再生系统, 并进行了发根农杆菌转化的初步研究。试验结果表明茎段的再生能力强于叶片,且对农杆菌敏感,是 进行遗传转化合适的受体材料。在MS基本培养基附加BA 1mg/L、KT 1mg/L、NAA 0．2mg/L、蔗糖30 mg/L培养基中,20d龄的茎段不定芽诱导率为100％,平均每个外植体诱导的不定芽数达到9．7个,移 苗成活率90％以上;外植体培养前的割伤处理有利于提高出芽数;发根农杆菌转化茎段诱导出毛状 根。罗汉果毛状根的诱导和培养将为罗汉果药用成分的研究和开发提供新的途径。     

农杆菌介导法将硝酸还原酶基因转入大白菜的研究

[目的]建立大白菜的硝酸还原酶基因（NR）转化体系。[方法]以大白菜北京小杂印为材料,通过农杆菌LBA4404介导,将硝酸还原酶基因（NR）转入大白菜,对获得的转NR基因苗进行PCR检测、Southern杂交检测以及硝酸盐含量测定。[结果]试验初步建立了一套大白菜的转化体系,即以预培养2d苗龄4d的大白菜不带柄半子叶为外植体,在OD600值nm约为0．6的农杆菌工程菌液中浸染8min,然后在pH值为5．8且不加抗生素的分化培养基中将子叶与菌共培养2d,其后经过诱导、抗生素筛选、生根生长等过程,获得抗性植株,转化频率为6．48％。对抗性植株采用分级筛选,获得8株转NR基因苗。[结论]试验证实,NR基因已整合进大白菜的基因组中并得到表达,植株体内的硝酸盐含量均低于对照。     

优化白菜类蔬菜遗传转化体系的研究

采用农杆菌介导法将双元载体质粒pBI35S-AMF分别导入"上海青"白菜和"油青"菜心,对影响转化频率的抑菌剂和感染菌株等主要因素进行比较,优化了白菜类蔬菜的遗传转化体系.结果表明,在白菜类蔬菜的遗传转化体系中,选择氨苄青霉素作为转化农杆菌的抑菌剂为好,其抑菌浓度以300 mg/L为宜;预培养时间和共培养时间分别以3 d和2 d为适;LBA4404/pBI35S-AMF菌株的感染效率远高于EHA105/pBI35S-AMF.对KanR转化植株做进一步的分子检测结果显示,Southern印迹杂交阳性率为82.2%,转化频率达2.8%,且外源片段为多拷贝插入.多批次的转化结果证实,该体系的转化频率稳定.     

Technology of In Vitro production of dihaploid Brassica plants

The conditions of cultivating isolated anthers and microspores are optimized for the purpose of producing haploid rapeseed, white head cabbage, and cauliflower plants under in vitro conditions and the process of direct embryogenesis is studied. It is established that the presence of 1 mg/l kinetin and 1 mg/l naphthaleneacetic acid hormones in nutrient medium B5 stimulated the process of direct embryogenesis in rapeseed as well as the formation of secondary and tertiary embryoids on hypocotyl and leaf segments of sterile sprouts. A cytological analysis of regenerant plants (count of the number of chloroplasts in stomatal guard cells and chromosomes in root meristem) confirmed the haploid nature of the rapeseed plants. Regenerants are obtained from callus tissue of cabbage microspores.     

豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化花椰菜的研究

通过根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入花椰菜无菌苗的下胚轴和子叶中,卡那霉素(Kan)的筛选质量浓度为15mg／L,抑制农杆菌生长的抗生素选用羧苄青霉素(carbencillin),质量浓度为500mg／L,对所获得的转基因植株进行PCR扩增,结果显示大多数为阳性;FCR-Southern及Southern分子检测分析,结果证明CpTI基因已被整合到花椰菜植株的基因组中,转基因植株叶片的离体饲虫初步试验结果表明,埘鳞翅目害虫菜青虫的生长发育育一定的抑制作用。     

大白菜高效稳定遗传转化体系的建立

以无菌苗下胚轴为外植体,建立了大白菜高效、稳定再生和遗传转化体系,获得了转基因抗性芽。结果表明,转化效率最高的基因型为Seoul,最佳筛选培养基为MS＋2mg／L6-BA＋1mg／LNAA＋2mg／LAgN03＋300mg／L Car＋10mg／LHyg,共培养基pH5．2,完全黑暗培养,侵染液浓度OD600=0．5,侵染时间为10min,在此条件下转化效果最好。GUS染色结果表明,GUS基因已整合到抗性芽细胞的染色体中,能够稳定表达。     

Determining Crop and Pan Coefficients for Cauliflower and Red Cabbage Crops Under Cool Season Semiarid Climatic Conditions

The aim of this study was to estimate the evapotranspiration of cauliflower and red cabbage crops grown under cool season semiarid climatic conditions from Class A pan evaporation. Actual evapotranspiration （ETc） of cauliflower and red cabbage crops was calculated according to the water balance approach. Reference evapotranspiration （ETo） was calculated with FAO Penman-Monteith equation. Pan evaporation （Epan） was measured by using Class A pan. Seasonal ETc was determined as 475 mm for cauliflower and 556 nun for red cabbage. Seasonal pan coefficient （kp=ETo/Epan） was determined as 0.82, and the seasonal crop coefficient （kc=ETc/ETo） was determined as 0.84 for cauliflower and 0.83 for red cabbage. So the evapotranspiration of cauliflower and red cabbage crops was estimated as 70% Class A pan evaporation.     

大白菜子叶高频再生体系的建立

以大白菜(Brassica campestrisL ssp.pekinensis)为材料,MS为基本培养基,研究了不同基因型、不同外植体类型、不同激素组合及预培养处理条件对不定芽再生的影响。结果表明:基因型、外植体类型、激素组合和预培养条件对不定芽的形成均具有十分明显的影响。3个基因型间,‘85-1’的再生频率最高,‘天津青麻叶’次之,‘北京新三号’最低;2种外植体中,带柄子叶的再生频率显著高于下胚轴;22个激素组合中,TDZ 0.7 mg/L+NAA 0.5 mg/L组合的再生频率最高(72.5%,‘85-1’带柄子叶);7个预培养处理中,0.5 mg/L 2,4-D预培养1d的效果最好,不定芽再生频率达到87.7%,且芽数多、质量好。