马铃薯疮痂病新致病种Streptomyces galilaeus致病毒素组分分析

【目的】 研究马铃薯疮痂病新致病种S.galilaeus菌株CPS-2致病毒素的产生条件、毒素活性和毒素组成情况。【方法】 经适宜产毒素培养基和培养时间筛选后大量获取毒素;通过乙酸乙酯萃取、薄层层析、高效液相色谱(HPLC)等技术纯化毒素,所得色谱纯毒素进行质谱分析;采用萝卜幼苗法、小薯片法和幼薯法检测毒素活性。【结果】 确定菌株CPS-2的适宜产毒素培养基为燕麦麸皮培养基,产毒素高峰时间为接种后第9 天。获得了两个可显著抑制萝卜幼苗生长的毒素组分Ⅱ和Ⅲ,梯度稀释后活性测定结果表明毒素浓度与活性呈正相关,且组分Ⅱ可使小薯片和幼薯组织褐变坏死。质谱分析测定组分Ⅱ的分子量为437.1810,组分Ⅲ的分子量为313.1。【结论】马铃薯疮痂病新致病种S.galilaeus菌株CPS-2可产生致病毒素,至少有两种毒素组分在该病原菌的致病过程中起作用。     

灰葡萄孢诱变菌株毒素的除草活性研究

 对灰葡萄孢BC4菌株进行紫外线诱变得到了15个诱变菌株, 经测定筛选出BC4-1、BC4-2和BC4-15等3个诱变菌株中以BC4-1菌株效果最好。试验发现，用于毒素产生的PD培养基的pH 值对产毒能力影响很大，以pH 4.0最优。用三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯萃取培养滤液制备BC-粗毒素，生物测定结果表明，以乙酸乙酯萃取所得粗毒素对杂草种子萌发及生长抑制作用最强。通过柱层析法和HPLC法分离和纯化除草活性组分,得到1个在271 nm有最大UV吸收的化合物,该组分在100 mg·L-1浓度下对马唐的生长具有强烈的抑制作用，在50 mg·L-1浓度下可完全抑制马唐和反枝苋种子的萌发。     

小麦雪霉病菌粗毒素的提取及其致病性鉴定方法的研究

研究结果表明,以粉碎的玉米粒扩大繁殖菌种,其产抱量最多;雪霉病菌粗毒素对小麦离体叶片、种根及芽均具有很强的致毒作用;其强弱视粗毒素溶液的浓度、作用时间的长短及品种的不同而有明显差异,经生物检测发现,用带顶部2片叶(含穗)的穗节插入盛粗毒素溶液的三角瓶中进行测定,是鉴定粗毒素对小麦叶组织致害作用的一种较好方法,测定用的粗毒素溶液浓度以25%左右为宜,调查时间以插后第4天为宜.     

棉花黄萎病菌液体培养特性及其毒素的生物测定

对16株陕西来源的棉花黄萎病菌代表菌系液体培养性状的观察和测定结果表明,菌株培养液颜色、分生孢子浓度及蛋白含量等性状差异明显。菌株毒素生物活性的研究表明,毒素对抗、感病品种的毒害作用差异显著,毒素浓度与致萎强度呈正相关性,50μg/ml毒素浓度处理36 h是观察棉苗发病的最佳浓度、时间组合。菌株液体培养特性与毒素生物活性有一定关系,菌株培养滤液蛋白含量与其致萎强度具有相关性。     

冬枣黑疔病病原菌毒素致病机制研究

利用不同浓度的冬枣(Zizyphus jujuacv.Dongzao)黑疔病病原菌毒素提取液处理冬枣果皮组织,通过测定其对果皮组织细胞膜透性、丙二醛(MDA)含量变化、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)和过氧化氢酶(CAT)活性的影响,研究该毒素在致病机制中的作用。结果表明:经毒素处理后,果皮组织浸出液的相对电导率随毒素浓度增大而增加;细胞内丙二醛含量增加,高于对照,随毒素浓度的增大而升高;细胞内CAT活性在处理9 h内低于对照,随处理时间延长呈总体下降趋势,APX、POD活性在处理中期呈下降趋势,APX活性与对照差异不明显,POD活性在中后期与对照差异明显。     

大豆疫霉根腐病菌毒素的提取及生物活性测定

对大豆疫霉根腐病原菌的主要致病因子之一—毒素的提取方法进行了探讨,并用抗感不同大豆品种的切根苗进行了毒素生物活性及最佳浓度的测定、筛选。结果表明:毒素的提取采取弱极性的有机溶剂萃取的方法比较理想,尤其是用乙醚萃取;用稀释100×浓度的毒素处理抗感不同的大豆品种的切根苗可以产生与病原菌下胚轴接种法相同的症状,同时也证明该毒素是一种非寄主专化性毒素     

水稻纹枯病菌毒素提取及其对水稻的毒性

致病力不同的3个水稻纹枯病菌株在改良的Richard培养基中培养能产生毒素,培养液过滤后经灭菌、活性炭吸附、甲醇洗脱和浓缩得到粗毒素。用3种毒素处理不同类型的水稻种子,测定发芽率、对胚根和胚芽生长的影响。结果表明,不同致病力菌株产生的毒素毒性差异明显,3个菌株粗毒素对不同类型水稻种子的发芽率、胚根和胚芽生长均有一定抑制作用,且浓度越高,抑制率越高能力越强。不同类型的水稻品种在同种毒素相同浓度下受到的抑制也有显著差异。     

叶霉病菌粗毒素对番茄的生物活性测定

测定了番茄叶霉病菌产生的糖蛋白毒素粗提物对不同番茄品种种子萌发,胚根、胚芽生长的抑制作用和对叶片的致病性。测定结果表明,针刺处理,叶片可产生褪绿斑;浸渍处理,叶片褪绿,边缘变褐,对幼苗有致萎作用;不同品种对毒素粗提物的敏感性具有一定的差异;同一品种毒素浓度越高,对种子的萌发抑制率,胚根、胚芽生长抑制率也越高。     

葡萄白腐病毒素研究

本文通过对葡萄白腐病毒素研究,明确了该菌经培养后可产生毒素物质,粗提纯后,该毒素在278nm处有吸收高峰,初步推测该毒素可能是一种蛋白质;将毒素用针刺法接种叶片,可产生和病原菌相似的症状,说明毒素是白腐病致病的一个重要因子;经超微结构观察表明,毒素可使寄主组织的细胞壁变薄或消失,叶绿体膜或线粒体膜破裂,内部组织崩解、细胞内原生质流失或凝集,各种细胞器分辨不清。     

根腐病病原菌粗提物胁迫下黄芪幼根代谢变化初探

为明确黄芪根腐病致病机制,探索感病植株在物质代谢上对毒素的响应,将分离所得茄病镰刀菌毒素粗提物稀释成不同浓度胁迫处理黄芪幼根,对处理后的幼根蛋白质含量进行了测定。结果表明,随着毒素胁迫时间的延长,黄芪幼根蛋白质含量均快速下降,这可能是随着毒素作用时间的延长,破坏了植株体内的正常代谢,进而抑制了蛋白质的合成。毒素胁迫后黄芪幼根可溶性糖含量降低得快,说明植株体内呼吸作用加强;脯氨酸含量则随着胁迫时间和毒素浓度的增加而增加,说明黄芪幼苗对毒素危害表现为敏感响应。     

稻曲毒素A的相对含量分析及其与致病力的相关性

【目的】明确稻曲菌粗毒素的主要活性组分;比较不同地区稻曲球的稻曲毒素A含量;研究不同稻曲菌菌株产毒素A量与致病力的相关性。【方法】分别用丙酮、甲醇、水等不同极性溶剂从稻曲球中萃取制备粗毒素,并用小麦胚根抑制法检测其活性;高效液相色谱（HPLC）检测采集自全国224份稻曲球样品的毒素A含量,紫外扫描及液相色谱-质谱（LC-MS）验证稻曲毒素A;用人工接种的方法,测定52个稻曲菌株对感病品种两优培九的致病力;应用SPSS统计软件对稻曲菌产毒素A量与致病力进行相关性分析。【结果】用水和甲醇萃取得到的粗毒素活性较高,丙酮最低;质谱测定组分Ⅱ的分子量为673.9,结合紫外吸收光谱初步证明粗毒素的主要活性成分是稻曲毒素A。采集自不同地区的224份稻曲球样品的毒素A含量有明显差异。不同稻曲菌株的产毒素A量与致病力相关性不显著（相关系数R=0.222,显著性概率P=0.114）。【结论】稻曲球的活性成分中含有稻曲毒素A;不同地区稻曲球中的毒素A含量有显著差异;稻曲菌菌株的产毒素A量与其致病力没有显著相关性。     

桐粕脂溶性粗毒素测定方法的建立

采用乙醇溶液对桐粕进行脱毒，再用乙酸乙酯溶液对脱出毒素溶液进行提取、分离，然后用紫外分光光度计对其进行测定，建立了桐粕脂溶性粗毒素测定方法。该方法简单、快速、准确度较高，相对偏差小于5％。     

玉米全蚀病菌毒素的初步研究

玉米全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis var.maydois,Yao,Wang et Zhu)在碎玉米粒培养基上能够产生毒素。培养物经甲醇浸提,活性炭柱吸附层析获粗提纯毒素结晶,生物活性测定表明:该粗毒素对玉米胚根生长有明显的抑制作用;对玉米幼嫩的种子根和4叶期幼苗的离体叶和活体叶有致萎作用;同时能损伤玉米叶片细胞膜。用毒素接种后,寄主表现出病原菌侵染相似的症状。     

紫草的乙醇提取及其紫外可见光谱研究

[目的]用乙醇提取紫草中乙醇可溶成分,研究其紫外可见光谱性质。[方法]以95%乙醇为溶剂,室温浸提紫草,旋转蒸发浓缩,得紫草乙醇提取物,薄层色谱分析成分。定性研究浓度、酸碱度、氧化剂、自由基、紫外光、溶剂、温度和时间等对乙醇提取物的紫外可见光谱的影响。[结果]薄层色谱分析获得5种主要成分,紫外可见光谱分析有4个特征吸收峰,溶液温度及加热时间、紫外光照射、自由基、氧化剂、酸度对该提取物特征吸收峰位置没有明显影响;碱度和金属离子改变了其特征吸收峰位置。[结论]该研究为紫草的应用提供了一定的理论依据。     

"毒邪致痫"之我见

脑为清窍,不容毒侵,侵之染之,有损元神,元神失控,发为癫痫。毒邪致痫,有内外毒之分：“外毒”包括物理与化学因素毒物、寄生虫毒、药物聚毒、湿热疫毒;“内毒”包括痰瘀内阻、血败脑腐、气机不利酿为毒,风火逆乱、灼伤脉络、升降失宜酿为毒;此外,禀赋不足、脾运不健、湿浊内聚酿为毒,胎产不当、胞元受损、形败难救酿为毒。临床治之多以解毒治痫之法以应对。     

坪草腐霉枯萎病菌(Pythium aphanidermatum)的生物学特性及诱变菌株毒素的除草活性研究

为了明确坪草腐霉枯萎病菌PA1菌株的生物学特性及其诱变菌株所产生毒素的除草活性,对PA1菌株的生长适度、保存条件及孢子囊和藏卵器的产生条件进行了研究,测定结果发现,PA1菌株菌丝生长的最适温度为34℃,菌种保存的适宜温度为10℃～15℃;20℃条件下,在CMA培养基和燕麦粉液体培养基中可以大量产生藏卵器和卵孢子;5℃～15℃条件下,可以产生孢子囊。利用紫外线对PA1菌株的菌丝进行紫外诱变,得到了18株诱变菌株(PAM 1～18)。通过生长速率测得,PAM1菌株的生长速率最快,诱变菌株所得粗毒素对马唐和反枝苋的生长抑制作用结果表明,以PAM1的除草活性最高。对PAM1诱变菌株进行了发酵试验,在72 h的发酵过程中,发酵液的pH值逐渐降低;用发酵液制备所得粗毒素对马唐、反枝苋具有很好的除草活性。     

小麦品种抗赤霉病与抗(耐)赤霉菌毒素关系的研究

以赤霉菌毒素对不同小麦品种的胚根、胚芽的生长抑制率和胚根细胞膜的损伤度为指标,研究了小麦品种抗赤霉颊与抗赤霉菌毒素能力之间的关系。结果表明,抗病品种抗（耐）毒素能力强,感病品种抗（耐）毒素能力强,中抗、中感品种的抗（耐）毒素能力居中,表现小麦品种的抗病性和抗（耐）毒素能力之间呈明显的正相关性。这一结果在小麦品种的抗赤霉病性鉴定方面具有良好的应用前景。     

麦类赤霉病病麦毒素对小麦毒性作用的研究

通过对15个不同来源的禾谷镰刀菌菌株在麦粒培养基上产生粗毒素的量与其致病力的比较研究,发现致病力强的菌株产毒量高,致病力弱的菌株产毒量低。笔者利用毒素对胚根伸长的抑制、对叶片组织浸出液电导率的变化等方法,及病理切片观察,搞清了毒素的作用主要是破坏细胞膜和堵塞导管。发现抗病品种对毒素有强的忍耐性,而感病品种较为敏感。建议利用这种特性进行品种抗病性鉴定。根据毒素作用的植物种类与病菌寄主范围的比较,认为赤霉病病麦毒素是一类非专化性毒素。     

嗜水气单胞菌重组Aer毒素的纯化和抗原性分析

对原核表达的重组嗜水气单胞菌Aer毒素进行初步纯化,比较了它与天然Aer毒素的抗原性,为建立检测该毒素的免疫学方法奠定了基础。将原核表达的重组Aer毒素经SDS-PAGE后,切下目的蛋白,利用电洗脱法将蛋白洗脱出来,后经透析、PEG8000浓缩、定量,对獭兔进行免疫,采集血清,提纯IgG,在W estern b lotting试验中可与天然Aer毒素起反应,说明,体外表达的重组Aer毒素保留了天然Aer毒素所具有的抗原性。同时,将嗜水气单胞菌AHCS02菌接种于兔鲜血平板,30℃、培养15 h后,将具有β-溶血的单菌落于LB液体培养基中培养后,用饱和硫酸铵法提取上清液中的天然Aer毒素,用甲醛脱毒后,以同样免疫方法免疫獭兔,免疫结束后,采集血清提取IgG,在W estern b lotting试验中,可以检测到重组Aer毒素。试验说明:原核表达的重组Aer毒素和天然Aer毒素诱导獭兔产生的血清IgG抗体可以互相识别重组Aer毒素和天然Aer毒素,重组Aer毒素和天然Aer毒素有相似的抗原性。