稻瘟菌粗提物对水稻成熟胚愈伤组织培养的影响

以感病主栽品种C039、丽江新团黑谷为材料,观察稻瘟病病菌粗提物处理对水稻成熟胚愈伤组织培养的影响,以期筛选抗稻瘟病细胞突变体。试验结果表明：粗提物处理,对水稻成熟胚的愈伤组织诱导和分化都有一定的抑制作用,但愈伤组织再生植株的蛋白质含量显著提高。     

粳型恢复系C418转基因再生体系的建立

为水稻转基因育种和突变体库的建立创造有利条件,以粳稻C418成熟胚为外植体,通过植物组织培养技术,考察不同基础培养基(N6、MS、MSN、NMB、NB、MB和NBD)和生长素2,4-D浓度(1mg/L、2mg/L和3mg/L)对外植体愈伤组织诱导效果;将继代培养获得的优良愈伤组织采用农杆菌介导法进行遗传转化,并考察适宜的共培养时间以及不同抗生素(头孢霉素、氨苄霉素和m潮霉素)对愈伤组织的分化效果,以建立北方骨干粳型恢复系C418转基因再生体系。结果表明:在愈伤组织诱导过程中,基础培养基NBD+3mg/L 2,4-D处理粳稻C418成熟胚愈伤组织诱导率最高,达90.38%,愈伤组织生长状态最佳;水稻愈伤组织共培养2d获得的抗性愈伤组织最多,筛选培养基中降低头孢霉素浓度并添加氨苄霉素可提高水稻愈伤组织分化率。通过培养基类型、激素浓度、共培养时间及抗生素种类的最佳组合,成功建立北方骨干粳型恢复系C418转基因再生体系,即水稻外植体经次氯酸钠处理后接种于诱导培养基NBD+3mg/L 2,4-D,获得愈伤组织,再用农杆菌悬浮液(含目的基因)侵染愈伤组织,最后获得含目的基因的转基因植株。     

不同接种方式对水稻成熟胚组织培养的影响

以水稻成熟胚为外植体,采用4种不同的接种方式,对7个水稻品种的成熟胚进行了愈伤组织诱导和再分化试验,分析比较不同成熟胚接种方式的愈伤组织诱导率、愈伤组织质量和植株再生率.结果表明:将胚从种子上切下而直接接种在培养基上的接种方式,愈伤组织诱导率最高,愈伤组织质量最好,可以在短时间内获得大量胚性愈伤组织,其愈伤组织可在较短的时间内分化出较多的再生植株,是一种简单、方便、效果好的诱导水稻愈伤组织和再生植株的理想方法.     

粳稻品系“超2-10”幼胚在不同温度下的诱导和再生研究

以梗型高产水稻品系"超2-10"幼胚为外植体,在26、36、38℃和40℃下进行愈伤组织诱导和继代培养,并完成整个再生过程.结果显示,"超2-10"水稻幼胚在26、36、38℃和40℃环境中均能成功诱导愈伤组织,诱导率达到90%以上,4种温度条件下幼胚愈伤组织诱导率无显著差异;26℃和36℃环境诱导和继代培养的愈伤组织都能够正常生长、分化和再生,而38℃和40℃环境诱导和继代培养的愈伤组织能够生长,但分化和再生都受到影响;尽管36℃环境生长的愈伤组织在继代培养中重量增幅明显低于26℃继代培养的愈伤组织,但36℃诱导和继代培养的愈伤组织再生率明显高于26℃环境培养的愈伤组织.再生率提高40.81%.     

杂交籼稻亲本愈伤组织培养力的研究

对多个重要杂交籼稻亲本愈伤组织培养力的研究结果表明 :不同水稻材料的愈伤组织诱导、继代、分化能力不同 ;不同外植体的愈伤诱导、继代、分化能力不同。成熟胚愈伤组织诱导率最高 ,从幼胚、幼穗获得的愈伤组织的继代和分化能力较强 ,质量也好 ;随着继代时间的延长 ,愈伤组织的质量下降 ;干燥处理有助于愈伤组织分化率的提高。本文还对不同外植体愈伤组织在转基因研究中的作用进行了讨论。     

一个籼稻推广品种优良组培特性的发现

对目前生产上主栽籼型杂交水稻亲本的组织培养特性进行了系统研究，发现优质杂交籼稻丰优香占的恢复系父本R6547的组培特性与粳稻模式品种相似．愈伤组织诱导频率达95％以上，其愈伤组织诱导、继代培养和分化再生水平远高于绝大多数籼稻品种。该品种愈伤组织分化再生频率高达87％；继代4次仍有95％的愈伤组织保持胚性状态，表现出很强的耐继代能力；在用农杆菌介导法转移外源基因时，相对地保持了其优良的组培特性。进一步讨论了利用R6547建立高效转化系统的可能性及其重要意义。     

水稻幼穗胚轴愈伤组织培养力的比较观察

以水稻湘早籼１３号和超丰早１号两个品种的幼穗和胚轴为外植体，进行水稻愈伤组织培养力的比较研究。结果表明，不同基因型与不同外植体来源的愈伤的组织的诱导率，继代培养过程的生长状态和绿苗分化率均有差异两种基因型相比，超丰早１号愈伤组织诱导频率较高，生长状态要好，表现在胚性愈伤组织百分率高，分化率也较高。     

几个光温敏核不育水稻品种组织培养特性的研究

选用了两系杂交稻的母本光温敏核不育系籼稻品种培矮64S、粳稻品种农垦58S和7001S作为材料，对其在组织培养中愈伤组织诱导和植株再生进行了比较研究，结果表明，不同水稻品种和不同外植体状态在愈伤组织诱导上有较大的差异，对籼稻品种而言，幼胚愈伤组织诱导率明显高于成熟胚；而对粳稻品种而言，幼胚与成熟胚愈伤组织诱导率没明显差异．培养基种类对愈伤组织诱导影响不大，但对愈伤组织状态有显著影响．培矮7001S使用MB培养基较好；农垦58S和7001S使用NB培养基较佳．籼稻品种植株再生率明显低于粳稻品种．愈伤组织断代超过3个月，再生频率下降．     

用基因枪法将Bt杀虫基因导入水稻愈伤组织的研究

从水稻成熟胚诱导出的愈伤组织经继代培养后可以产生大量的胚性愈伤组织。本研究采用基因枪法转化上述胚性愈伤组织 ,在附加羧苄青霉素 (5 0 0 μg· m L-1)和卡那霉素 (5 0 μg·m L-1)的选择培养基上进行抗性愈伤组织的筛选 ,在附加羧苄青霉素 (5 0 0 μg· m L-1)和卡那霉素 (2 5 μg· m L-1)的分化培养基上诱导抗性芽。GUS酶活性检测和对基因组 DNA作 PCR检测结果均为阳性 ,证明外源目的基因 (Bt)已在寒地水稻抗性愈伤组织中整合并表达。抗性再生植株的 GUS酶活性及 PCR检测正在进行中     

籼稻成熟胚的组织培养特性研究

籼稻成熟胚培养由于取材容易,因此在转基因研究中具有广泛的应用前景.但籼稻成熟胚愈伤组织诱导率不高,继代易褐化,分化率不高,严重阻碍着基因工程技术在水稻育种中的应用.本研究选用了27不同类型的籼稻品种和常规粳稻品种作为实验材料,在同一培养方式下,分析了不同籼稻品种成熟胚愈伤组织诱导率和分化率之间的差异及籼稻品种与粳稻品种成熟胚愈伤组织诱导率与分化率之间的差异,为目前应用细胞工程和基因工程技术来改良籼稻品种提供理论依据.获得了如下主要研究结果:水稻基因型是影响籼稻成熟胚组织培养力高低的关键因素;籼型杂交水稻不育系和保持系比常规籼稻品种、杂交水稻F1种子和恢复系品种成熟胚的培养力低;杂交水稻F1种子受亲本恢复系基因型的影响较大.     

拟南芥突变体jar1的鉴定及其MeJA感受性分析

为了研究JAR1 (At2g46370)基因在茉莉酸调控机制中的作用,从拟南芥生物资源中心获得JAR1基因的T-DNA插入突变体jar1 (SALK_030821),对突变体中T-DNA插入位点和突变纯合性进行检测,筛选出纯合的jar1突变体。通过qRT-PCR检测jar1突变体中JAR1基因的表达水平,并进行茉莉酸敏感性实验,观察jar1幼苗在含有茉莉酸甲酯的培养基的生长情况。结果表明:纯合突变体中JAR1基因的表达量明显下降,仅为野生型植株的41. 2%; jar1幼苗对茉莉酸甲酯的敏感性显著下降。     

玉米组织培养体系的研究

以玉米的幼胚为外植体，初步研究了培养基、幼胚大小及幼胚的放置方式对愈伤组织诱导的影响。得到了“A188”Ⅱ型愈伤组织，经分化得到再生植株，再生植株的成活率比较高。建立了完善的“A188”幼胚组织培养体系。     

水稻组织培养能力的遗传力和配合力分析

用水稻4个不育系和4个恢复系配成不完全双列杂交进行种胚和幼穗培养,测定了愈伤组织诱导率和绿苗再生率。统计分析表明,基因型变异方差、配合力方差均达到极显著或显著水平,对配合力效应值和遗传力进行了估算。结果表明,水稻组织培养力是可遗传的,愈伤诱导率的基因作用方式以加性为主,绿苗再生率则以非加性为主。种胚与幼穗的愈伤组织发生受不同的基因控制,这可能与两种外植体的生理背景不同有关。     

空间诱变水稻H4成熟胚再生体系的建立

以空间诱变水稻H4成熟胚为外植体,通过调节2,4-D浓度、激素组合和分化途径,建立适宜的再生体系.结果表明:诱导培养基以NMB为基本培养基,添加2.5 mg/L 2,4-D、1.0 mg/L NAA和0.5 mg/L 6-BA,26℃暗培养30 d,愈伤诱导率达91.63％;继代培养基中添加2 mg/L ABA,对胚性愈伤组织的形成及后续分化率有一定的促进作用;两步分化法可提高愈伤组织的分化效率,分化率达84.76％,植株再生率为77.67％.初步建立了H4成熟胚愈伤组织的再生体系,为后续的遗传转化研究奠定基础.     

人参组培过程中SERK和WUS基因的表达特性

为研究人参叶片、愈伤组织以及从愈伤组织诱导出来的芽中与体细胞胚发生相关的基因的表达特性,在已报道的与植物愈伤组织诱导及体细胞胚发育密切相关的2个标志基因SERK和WUS,以actin为内参基因,采用RT-PCR方法分析这2个基因在人参叶片、愈伤组织及从愈伤组织长出来的芽中的表达特性。结果表明:虽然SERK和WUS在所有样品中均有表达,但在叶片和愈伤组织中的表达量无明显差异,而愈伤组织中分化出来的芽当中的表达量明显高于叶片和愈伤组织。     

不同基因型小麦基因枪转化的再生

以3个基因型小麦为材料,通过基因枪对其幼胚进行轰击,研究转化后组织培养的愈伤组织诱导率、分化率和植株再生率。结果显示,不同基因型小麦均能诱导愈伤组织形成,且愈伤诱导率为100%,但分化率和再生率不同基因型表现不同,其中,小麦品种4185的分化率和再生率分别为54.2%和15.6%,较Bobwhite和Attila高。     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生体系的研究

以小麦的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生.研究结果表明,在MS+2,4-D(3.0 mg/L)+VB1(1.0 mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为72.3%,但愈伤组织质量较差;在低浓度2,4-D和添加了ABA的继代培养基中,愈伤组织质量明显改善,胚性愈伤组织增加.筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(4.0 mg/L)+NAA(0.3 mg/L)中,分化率达73.18%.该研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体的小麦组织培养再生体系.     

小麦体细胞无性系的建立及抗赤霉病突变体的诱导

利用小麦鄂恩１号和Ｋ６两个品种的胚轴、胚芽鞘作外植体建立了体细胞无性系，获得了可用于突变体诱导与筛选的胚性愈伤组织细胞。结果表明，不同基因型和不同外植体在愈伤组织诱导率、愈伤组织生长状态以及愈伤组织分化上均有差异，且均匀激素的调控。赤霉菌粗毒素处理后，胚性愈伤组织在培养过程中随毒素浓度升高其生长受抑加剧，褐变增加，有的出现死亡。诱变后的愈伤组织的分化力比对照降低。诱变的再生植株经赤霉菌液感染后在培     

水稻体细胞培养与无性系变异——Ⅰ,不同基因型不同外植体的培养

对水稻5个品种的种胚和11个品种的幼穗在含不同激素浓度的MS培养基上培养,诱导愈伤组织并再生绿苗。品种间在愈伤组织诱导率、绿苗分化率和对激素的诱导效应表现了基因型差异。幼穗愈伤组织诱导率和绿苗分化率高于种胚。种胚的盾片愈伤组织分化能力高于胚轴,胚芽鞘的未分化得绿苗。去分化培养基添加2,4—D2mg/1+KT0.5mg/1,诱导愈伤组织的效果甚佳,并促进绿苗分化。选择胚性愈伤组织继代培养,种胚的培养270天,幼穗的培养210天,仍有部分品种保持较高的绿苗分化率。     

水稻丙二烯氧化物合成酶基因OsAOS1的表达研究

茉莉酸(Jasmonate,JA)为植物病虫害抗性反应中重要的信号分子,茉莉酸类物质生物合成途径中的关键酶为丙二烯氧化物合成酶(Allene oxide synthase,AOS)。已知水稻AOS基因家族包括4个成员,Os-AOS1～OsAOS4。已有研究表明,水稻OsAOS2基因的过量表达提高了内源PR1基因的表达、增强了水稻对稻瘟病的抗性。本研究分析了OsAOS1基因表达的组织和器官特异性以及外源JA处理对OsAOS1基因表达的影响,同时利用转基因技术研究了OsAOS1基因在调控内源PR1基因表达中的作用。研究结果表明:OsAOS1基因表达的组织和器官特异性不同于OsAOS2基因;外源JA处理诱导OsAOS1基因的瞬时表达,然而OsAOS2基因的诱导表达延迟;OsAOS1过量表达抑制烟草中内源PR1基因的表达。据此推测OsAOS1基因可能不参与依赖于PR1的抗病反应。