陕北地区土壤中残留农药——氧化乐果高效降解菌的筛选

[目的]筛选具有降解氧化乐果能力的菌株。[方法]以延安市宝塔区枣园长期施用氧化乐果的蔬菜和果园土壤为菌源,以氧化乐果作为唯一碳源和能源,采用逐渐加量的方式,分离可降解氧化乐果的菌株,对其进行形态观察和生理生化特征鉴定。[结果]经过富集、驯化,共得到16株能在含氧化乐果的基础培养基上生长的菌株,其中有3株菌在含有亚适量葡萄糖的氧化乐果培养基内有较高的生长量,均在24h内OD600值达到0．6左右。生理生化实验显示这3株菌株有较强的将氧化乐果降解为小分子化合物的能力。[结论]该研究为解决农药污染环境及农药残留问题提供了科学依据。     

氧化乐果降解菌的筛选及降解条件优化

在实验室控制条件下,通过长期驯化从污染土壤中筛选出4株对氧化乐果具有较好的降解性能的菌株,其中曲霉属菌株LG-Y1对氧化乐果降解率达47.81%.利用响应面法对LG-Y1菌株降解氧化乐果体系进行优化,方差分析表明,初始pH值、培养温度、培养转速均是影响氧化乐果降解的显著因素,其中初始pH值对降解率的影响最大.利用回归方程(R2=0.996 6)对降解条件进行分析,结果表明LG-Y1菌在初始pH值6.49、温度30.10℃、转速151.17 r/min的条件下培养7 d后对氧化乐果的降解率可达71.88%.     

氧化乐果降解真菌的筛选及其特性研究

利用氧化乐果无机盐培养基通过长期的摇床驯化培养,从污染土壤中筛选出了可以在高浓度氧化乐果环境下生长的真菌菌株,并通过固体培养实验和液体培养实验以及有机磷显色反应最终筛选出两种生长较好的菌株,初步鉴定为曲霉。进一步研究发现,在50mL氧化乐果马铃薯液体培养基中,初始pH5.5,培养温度30℃,摇床转速150r·min-1,氧化乐果初始浓度2000μg·mL-1,培养时间10d,测得氧化乐果的降解率分别为70.38%和61.28%。研究了外界因素初始pH、培养温度、溶氧对降解菌的生长量和降解能力的影响,结果发现在培养5d,氧化乐果初始浓度2000μg·mL-1,初始pH5～7,培养温度30℃,摇床转速150r·min-1条件下,两降解菌均可达到最佳生长量和降解能力,生长量和降解能力具有正比例相关性变化趋势。     

有机磷农药广谱降解菌A1A18菌株(Brevundimonas sp.)的筛选、鉴定与降解特性分析

从宁夏有机磷农药污染土壤中筛选对毒死蜱、氧化乐果和水胺硫磷等3种常用有机磷农药残留具有降解能力的菌株,确定其降解能力的代际稳定性及其对土壤中有机磷农药的降解特性。采用选择培养法和牛津杯法筛选目标菌株,依据细菌形态学特征、生理生化反应及分子测序结果进行分类鉴定,气相色谱法检测液体培养环境和土壤中有机磷农药的残留量。结果表明:分离、筛选获得1株有机磷农药广谱降解菌A1A18菌株,鉴定为短波单胞菌属(Brevundimonas sp.);在液体培养环境中,A1A18菌株对毒死蜱、氧化乐果和水胺硫磷3种有机磷农药的降解率分别为45.82%、9.52%和13.96%;经10代培养,确定该菌株对3种有机磷农药的降解能力具有很好的遗传稳定性。在有机磷原药质量分数为1.0 mg·kg~(-1)干土的土壤中施用A1A18菌株,降解菌初始数量密度为0.2×10~8 CFU·g~(-1)干土,施药后第21天,土壤中毒死蜱和水胺硫磷的降解率分别达到88.81%和87.75%,较对照提高16.24%和24.62%;施药后第7天,土壤中氧化乐果降解率达86.19%,较对照提高12.69%。短波单胞菌A1A18菌株能促进土壤中毒死蜱、氧化乐果和水胺硫磷的降解,具有较好的田间应用潜力。     

菌剂 PA9 降解农田土壤残留氧化乐果研究

【目的】验证菌剂 PA9 在设施棚中对土壤中残留的氧化乐果降解效果,研究其对土壤理化性质、 番茄生长及土壤微生物等产生的影响。【方法】将氧化乐果降解菌 ZZY-C13-1-9 制备成氧化乐果降解菌剂 PA9,在土壤中添加 100 mg/kg 的氧化乐果并施用 0.1% 菌剂 PA9,进行为期 50 d 的土壤污染修复试验。每隔 10 d 取土样 1 次,采用 HPLC 法测定土壤中残留的氧化乐果含量,通过选择性平板培养观察降解功能菌在土壤中的 定殖,采用高通量测序法监测土壤细菌多样性变化,按国标法测定土壤理化指标,测定番茄生长指标。【结果】 土壤中添加 100 mg/kg 的氧化乐果并施用 0.1% 菌剂 PA9,修复 40 d 后氧化乐果残留量降至 5.3 mg/kg,对照残 留量为 48.79 mg/kg,差异极显著。菌剂 PA9 功能菌株 ZZY-C13-1-9 在氧化乐果污染土壤中可有效定殖,修复 10~20 d 时,在氧化乐果土壤微生物中比例有所增加。土壤中残留的氧化乐果含量显著降低,表明该功能菌株可 在污染土壤中发挥降解氧化乐果的作用。高通量测序结果显示,随着氧化乐果含量降低,假单胞菌在土壤微生 物菌群中的比例也随之降低,表明菌剂 PA9 不会永久改变土壤的微生物多样性分布,修复后的土壤可有效恢复 细菌菌群多样性,土壤全氮、微生物氮、速效磷含量及土壤团聚体 MWD 值较对照显著增加,菌剂 PA9 的使用 对番茄生长无负面影响。【结论】氧化乐果降解菌剂 PA9,可在氧化乐果污染土壤中短期定殖并加速土壤中氧 化乐果的降解,改善污染土壤微生物多样性,对土壤理化性质及种植番茄无不良影响。     

土壤中呋喃虫酰肼降解菌生长特性研究

用选择性培养基筛选土壤中能降解呋喃虫酰肼的菌种,设置不同的农药梯度,研究细菌对不同浓度呋喃虫酰肼的降解。研究结果表明,从土壤中筛选到7株细菌能对呋喃虫酰肼进行降解,7株细菌在含10%呋喃虫酰肼悬浮液培养基中生长的最佳浓度为0.002 g/m L和0.013 g/m L,菌株DDH2在含10%呋喃虫酰肼悬浮液培养基中生长最好。     

氧化乐果降解菌假单胞菌L-3发酵条件优化的研究

为确定氧化乐果降解菌假单胞菌L-3最佳的生长条件和最优的碳氮比,在含一定浓度氧化乐果的液体普通培养基中,对菌株在不同温度、pH值、通气量、接种量条件下发酵培养,通过测定光密度值绘制生长曲线;在氧化乐果的基础发酵培养基中选出最适的碳源和氮源,优化出碳氮源的最佳配比.结果表明,L-3最佳生长条件为30℃、pH7.0、接种量3%(装液量100 mL);最佳的碳源、氮源分别为蔗糖和NH4NO3;最适的碳氮比为6:5.     

高效木质素降解菌株的分离筛选

为筛选能高效降解木质素的菌株,从31份采集的朽木和土壤样品中分离纯化获得155株菌;将纯化获得的菌株接入到含愈创木酚的选择培养基上进行初筛,观察其颜色变化,根据菌落圈和变色圈直径的比值,筛选出9株可降解木质素的菌株;将这9株菌接入产酶培养基中进行液体静止培养并测定木质素酶活力,最终获得2株高产木质素酶的真菌菌株14-7和15-1.将这2株真菌培养7 d后,所产木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶和漆酶的活力分别为0.087、0.060、0.144和0.070、0.059、0.000U·mL-1.     

有机磷农药氧化乐果在土壤中降解规律的试验研究

采用大田、盆栽及室内培养试验，研究了氧化乐果在兰州地区蔬菜土壤中的残留和降解，并研究了土壤微生物、光照、有机肥含量对其降解的影响，比较了不同土壤中氧化乐果的降解速率。结果表明，微生物对氧化乐果的降解作用影响较大，光照的影响次之，土壤有机质的增加对其降解有促进作用，在耕种灌淤土中的降解速率大于自然灰钙土。田间试验得出氧化乐果在自然条件下降解的半衰期为 2- 3 d，需 17 d就可基本降解完毕。     

土壤中黑曲霉降解氧化乐果的研究

在实验室模拟条件下,选择砂壤土和粉黏土为环境介质,研究在不同氧化乐果初始浓度条件下黑曲霉(Aspergillus niger)降解土壤中氧化乐果的特性,评价黑曲霉对受污染土壤的生物修复能力,结果表明,在灭菌土壤中,黑曲霉可有效降解氧化乐果.在氧化乐果浓度较低(15 mg·kg-1dried soil)的受污染非灭菌土中,投加黑曲霉的生物修复强化作用不明显,但在污染浓度较高时(150～500 mg·kg-1dried soil),投加黑曲霉可明显加快氧化乐果降解速率,在氧化乐果初始浓度为500 mg·kg-1dried soil条件下,非灭菌粉黏土中氧化乐果的降解半衰期由8.9 d缩短到4.9 d.氧化乐果生物降解速率提高10.9 mg·kg-1dried soil·d-1.黑曲霉具有耐受并降解较高浓度氧化乐果能力,适合中高浓度(或污染事故)氧化乐果污染土壤的生物修复.     

马拉硫磷降解菌株MN-13的降解性能测定及其培养基优化

为了利用微生物降解土壤中残留的有机磷农药,采用磷钼蓝比色法测定了菌株MN-13降解马拉硫磷及其他有机磷农药的性能,并通过单因素选择、正交优化试验对试验菌株的生长培养基进行了优化。结果表明,试验菌株MN-13对25%马拉硫磷、40%氧化乐果、50%乙基对硫磷的降解率分别达到91.52%、69.24%、49.68%。培养基优化中,通过单因素试验选择的碳源、氮源、NaCl及pH值的中心点分别为葡萄糖1.5%、牛肉膏1.0%、NaCl 0.5%、pH值8.0;以此为基础进行正交试验,优化后培养基组成为葡萄糖1.5%、牛肉膏1.2%、NaCl 0.6%、pH值8.5,菌体OD_(600)比优化前提高了33.1%。综上,MN-13菌株可有效降解马拉硫磷等有机磷农药,其在优化后的培养基中生长量有所提高。     

2种农药在丹参根内与土壤中的降解过程及规律的研究

通过对辛硫磷和氧化乐果2种农药在丹参根内和土壤中的降解过程和残留进行分析,结果表明:2种农药在丹参根内的降解过程都呈单峰曲线,即灌药后1～5d,丹参根逐步吸收农药,表现为根内农药含量呈上升趋势;氧化乐果在灌根后第5天丹参根内的含量达到高峰(6.11mg/kg),随后开始降解,而辛硫磷则在灌根后第10天达到高峰(9.49mg/kg);丹参对这2种农药的吸收量和吸收速度不同。辛硫磷在丹参根内的半衰期为9.2075d,明显高于苹果上使用辛硫磷的半衰期,说明辛硫磷在防治地下害虫时残效期长;氧化乐果在丹参根内的半衰期为4.4d。辛硫磷、氧化乐果在土壤中的降解过程都为明显的衰减曲线,辛硫磷在土壤中的半衰期为16.3709d,比在丹参根内降解的速度慢,而氧化乐果的半衰期为3.4675d,比在丹参根内的降解速度稍快。由此可知,在丹参生产过程中使用辛硫磷是安全的,且可提高地下害虫的防治效果。     

乐果与氧乐果在露地芹菜中的残留动态及安全性评价

为明确在芹菜中喷施乐果的安全性,研究了乐果和氧乐果在芹菜中的残留动态。以40%乐果为喷施药物,设置低浓度(600 g a.i/hm2)和高浓度(900 g a.i/hm2)2种施药剂量,在生长中期施药1次、采收期分别施药2次和3次,采集成熟的芹菜样品进行检测。样品采用乙腈提取,超高效液相色谱-串联质谱检测。[结果]结果表明,在采收期按登记最高剂量喷施乐果1次,乐果的残留量3天后低于芹菜上的允许最大残留限量值（MRL值）,但氧乐果高于MRL值。安全间隔期至少在21天以上,可以保证芹菜中乐果和氧乐果残留量低于MRL值。生长中期喷施乐果,乐果和氧乐果在芹菜中的残留量均低于MRL值。采收期施药2次,喷施2种浓度乐果在芹菜中的残留量在7天时均低于MRL值。施药3次,喷施低浓度乐果的残留量在7天时低于MRL值,喷施高浓度乐果的残留量超过MRL值。无论施药2次和3次,氧乐果的浓度在7天时均高于MRL值。[结论]采收期多次喷施乐果,会造成氧乐果残留超标,建议在芹菜采收期禁止乐果施用。     

基于响应面分析方法的氧化乐果降解条件优化

[目的]采用响应曲面法对影响氧化乐果降解的因素进行优化。[方法]选取5个因素pH值（A）、接种量（B）、装液量（C）、温度（D）和摇床转速（E）的最佳水平范围进行研究。通过对二次多项回归方程求解获得氧化乐果降解的最佳条件。[结果]氧化乐果降解的优化条件为：pH值7.10,接种量9.46%,装液量86.38ml,培养温度30.25℃和摇床转速165.32r/min。在此最优条件下,氧化乐果的降解率最大,响应预测值为71.78%,验证值为71.40%。[结论]该研究为降低氧化乐果对动物体的危害提供科学依据。     

斯氏线虫与常用杀虫剂混用时对东北大黑鳃金龟的毒杀效果

昆虫病原线虫Ｓｔｅｉｎｅｒｎａｍａｃａｒｐｏｃａｐｓａｅ种的Ａ２４品系对４种常用杀虫剂的抗药性测定表明,该线虫对氧化乐果、灭杀毙、辛硫磷均有较强的抗性,而甲基异柳磷对该线虫有较大的毒性。室内试验表明,该线虫分别与氧化乐果及灭杀毙混用对蛴螬（ＨｏｌｏｔｒｉｃｈｉａｄｉｏｍｐｈａｌｉａＢｔｅｓ）的毒杀均有明显的增效作用,它与氧化乐果混用的共毒系数略高于与灭杀毙混用。     

高效液相色谱法检测土壤中氧化乐果残留

采用高效液相色谱法优化了土壤中的氧化乐果残留测定条件,优化结果为:色谱柱为Inertsil QDS-SP4.6*250mm,流动相为甲醇/水(V/V=10/90),溶剂为超纯水,检测波长210nm,柱温25℃,进样量为20μL,总流速1.0mL·min~(-1);氧化乐果在0.1~10.0μg·mL~(-1)范围内,其质量浓度与峰面积呈良好的线性关系(R~2=0.9992),最低检测限0.1μg·mL~(-1)。采用振荡提取法,提取剂为丙酮和乙酸乙酯,提取后的溶液以弗罗里硅土为固相萃取柱,淋洗剂为丙酮/乙腈(1/3)。采用上述方法对土壤样品进行测定,加标回收率为在70%~120%,相对标准偏差在2.08%~8.08%,说明该方法的准确度和精密度均符合农药残留分析的要求,适合土壤中氧化乐果的残留量检测。     

一株核酸酶产生菌的筛选及初步鉴定

以0.5%RNA为筛选培养基的惟一碳源和惟一氮源,对目标微生物施以环境选择压力,从浏阳河地区土壤中筛选一株核酸酶活力较高产生菌株LM-7。经初步鉴定,该菌株为青霉属、二轮不对称青霉类、桔青霉系。结果表明:菌株LM-7在培养温度30℃、摇床转速180 r/min的条件下,以改良的察氏培养基液体发酵2.5 d,发酵液的核酸酶P1活力达283 U/ml。     

甲胺磷降解细菌的筛选与降解特性研究

利用甲胺磷作为唯一碳源和氮源的培养方法,从长期受有机磷农药污染的土壤中分离到一株降解菌MAP-3,初步确定MAP-3为假单孢菌属菌(Pseudomonas)。研究了该菌株降解甲胺磷的降解特性,该菌降解甲胺磷的最适温度为30℃,最适pH值为7.0,降解率达89%。MAP-3除了能降解甲胺磷外,还能降解敌敌畏、氧化乐果等有机磷农药。     

苏云金杆菌H3136菌株防治菜青虫、小菜蛾试验

 用苏云金杆菌H3136菌株制成的粉剂兑水1 000倍液喷雾防治菜青虫和小菜蛾,具有很好的防治效果,防治高峰分别在药后5～7 d,2～5 d,最高防效分别达97.5%,79.8%,都比氧化乐果防效高,同时苏云金杆菌制剂不污染环境,因此可完全取代化学农药用于蔬菜的无公害生产上。