卡那霉素筛选小麦转基因后代方法的优化

[目的]优化卡那霉素筛选小麦转基因后代的方法。[方法]以普通去离子水和0.5×Hoangland营养液为卡那霉素(Kan)的溶解介质,对Kan的浓度进行多梯度筛选,确定Kan的最低有效浓度,并针对不同小麦基因型材料进行验证。[结果]0.5×Hoangland营养液是Kan的理想溶解介质,既降低了Kan对小麦幼苗生长的抑制作用,又提高了Kan的筛选效果。30 mg/L是Kan作用于小麦NC221的最低有效浓度。不同小麦基因型对Kan的敏感性稍有不同,对大多数小麦基因型来说,Kan的最低有效浓度为30~45 mg/L,即在该浓度范围内进行处理可除去90%的未转基因植株。[结论]0.5×Hoangland营养液作溶解介质时,Kan用于筛选小麦转基因后代的最低有效浓度为30~45 mg/L。     

利用卡那霉素筛选烟草转基因植株的技术研究

待供试材料转基因和非转基因云烟87烟株长至5~7片叶时,在第3片叶上连续5 d喷施400 mg/L的卡那霉素溶液,喷后2 d观察,结果非转基因云烟87烟株叶片全部产生黄色斑点,而带有卡那霉素抗性标记基因的转基因云烟87烟草叶片表现正常。利用此方法对转基因烟草T2代3个株系进行筛选,筛选出22株转基因烟草植株,并用PCR方法对此方法的准确性进行了验证,结果表明,此方法对转基因烟草是一种简单快速的筛选方法。     

卡那霉素在转基因小麦后代筛选中的应用研究

从转基因小麦后代分离群体中选择含有外源基因的目标植株是培育转基因小麦的重要环节。用卡那霉素筛选西农1376和西农2611小麦,结果表明,80mg/L卡那霉素能有效抑制非转化小麦幼苗的正常生长;小麦不同基因型对卡那霉素的敏感性稍有差异;经PCR检测,80mg/L卡那霉素筛选出抗性苗的阳性率达到90％。     

转基因玉米的抗旱性鉴定方法与评价指标研究

从抗旱性的鉴定方法(田间鉴定法、温室分子鉴定法、干旱棚或抗旱池法)及各方法的鉴定指标(形态指标、穗部性状指标、产量指标、生理生化指标和生长发育指标)等方面对转基因抗旱玉米的抗旱性进行了综述。     

不同基因型玉米自交系耐除草剂筛选试验

本研究系统地对7个基因型的玉米自交系进行了除草剂致死浓度的筛选,这对转基因植株后代的筛选及转抗除草剂基因玉米的回交转育工作具有重要借鉴意义。     

转基因玉米抗卡那霉素筛选方法研究

为了建立简单有效地筛选抗卡那霉素标记基因玉米的方法,分别用玉米自交系"昌7-2"和杂交种"郑单958"为试验材料,用不同浓度、不同体积的卡那霉素溶液分别浸种3、4 d后播种,调查播种10 d后的玉米幼苗白化率,确定玉米对卡那霉素的抗性,结果表明用卡那霉素浸泡玉米种子,玉米苗的白化率不但与卡那霉素浓度有关,而且与浸种的用液量有关,杂交种和自交系之间差异并不大,利用100 mL浓度为200 mg/L的卡那霉素溶液浸种3 d后播种,白化苗率基本可以达到100%,用100 mL浓度为150mg/L的卡那霉素溶液浸种20粒种子3 d后播种进行抗性筛选,经过对玉米T1代转基因植株的筛选试验进行验证准确度达到了84.8%,表明该方法可行,可作为筛选玉米转化抗卡那霉素标记基因的一种简便方法。     

加工番茄品种卡那霉素抗性的筛选

利用4个加工番茄品种,研究了加工番茄外植体及幼苗对不同浓度卡那霉素(Kan)的抗性。结果表明,在一定浓度范围内,卡那霉素对加工番茄外植体及幼苗正常生长产生抑制作用,随着Kan浓度增加,抑制作用增强。Kan对加工番茄子叶、下胚轴外植体及幼苗筛选的适宜浓度在75 mg/L左右。幼苗对卡那霉素比子叶外植体敏感,而子叶外植体对卡那霉素又比下胚轴外植体敏感。     

卡那霉素筛选转基因小麦种子关键技术研究

对影响小麦卡那霉素筛选效果的培养基质和药剂处理方式进行了比较研究.结果表明:在种子吸胀阶段进行充分有效的卡那霉素浸种处理是提高卡那霉素筛选效果的关键技术;种子不经卡那霉素溶液浸种吸胀而直接在蛭石基质上,或用水浸种吸胀后再在蛭石等培养基质上进行卡那霉素处理,会降低小麦卡那霉素抗性筛选的效果.小麦种子幼苗的卡那霉素筛选,可用100 mg/L卡那霉素浸种至露白后再放到装有蛭石的培养皿上浇水即可,不需要再浇卡那霉素溶液.     

玉米中转基因成分筛查策略

根据商业化转基因玉米外源基因元件信息,构建玉米转基因检测分子特征矩阵,并根据元件信息建立转基因玉米的筛查检测策略。结果表明:利用CaMV35S启动子、NOS终止子2个元件的组合,可完成对现有转基因玉米转化事件的筛查检测,检测灵敏度可达到1g/kg。该筛查方法可对玉米中的转基因成分进行快速、高灵敏度的筛查。     

转基因玉米PCR检测体系的优化研究

以转基因玉米为研究材料,从模板DNA的提取质量、Mg2＋浓度、退火温度、引物用量等方面对PCR检测体系进行优化,建立了检测转基因玉米中外源基因的有效PCR反应体系。在优化体系中,25mm ol/LMg2＋用量由1.5μl降低为1.2μl,12.5mm ol/L引物用量由1μl降低为0.5μl,退火温度提高2℃。TouchDown PCR反应条件：95℃5m in;95℃1m in,62.5℃1m in（以后每个循环递减1℃）,72℃1m in,循环15次;95℃1m in,57.5℃1m in,72℃1m in,循环20次;72℃延伸7m in。     

转Bt基因玉米对亚洲玉米螟的抗性评价

转Bt基因抗虫玉米为诺华公司含Bt11转化系的杂交种NX4777,能全株表达Cry1Ab杀虫蛋白,以其非转基因受体玉米品种NX4906为对照。在玉米生长至心叶中期(50~60cm高)、抽雄前期和抽丝散粉期分别进行人工接亚洲玉米螟[Ostriniafurnacalis(Guenée)]初孵幼虫40~60头。以食叶级别、存活幼虫数、蛀孔数、隧道长度和雌穗被害级别等,分别作为评价玉米心叶期和穗期的抗性标准。结果表明,Bt玉米食叶级别仅为1级,显著低于对照的7级。Bt玉米平均每株存活幼虫0.04~0.20头、蛀孔0.11~0.15个、隧道长度0.13~0.41cm,雌穗被害级别为0,植株折茎率为0,而对照玉米平均每株存活幼虫6.19~12.41头、蛀孔4.48~7.05个、隧道长度12.41~24.09cm,雌穗被害级别为5.9,植株折茎率高达73.6%~95.5%。室内生测结果亦表明,取食Bt玉米心叶、雄穗的初孵幼虫3d全部死亡,取食花丝7d死亡率达到99%,相比之下取食常规玉米的存活率在88.7%以上。表明表达Cry1Ab杀虫蛋白的Bt对亚洲玉米螟具有很高的抗虫性,能够保护玉米全生育期免受玉米螟的危害。     

基于专利分析的转基因玉米发展态势分析

转基因玉米是转基因领域最热门的作物之一,其转基因技术具有一定的代表性。为了更好地了解和掌握转基因玉米研究的发展状态,文章通过应用Innography专利检索分析数据库,对世界范围内的转基因玉米领域的专利进行了申请年度分析、竞争对手分析、发明人分析以及核心专利分析,从而展现了转基因玉米领域发展现状及趋势。     

转基因玉米研究进展

植物转基因技术开辟了作物遗传改良的新途径。转基因玉米是植物基因工程领域研究的热点之一。近年来,应用转基因技术已经获得抗虫、抗除草剂和其他有用性状的转基因玉米。在此,就玉米转基因在受体系统、目的基因及转化方法方面的研究成果,尤其是近年来玉米转基因研究方面存在的问题、解决途径以及其他类型玉米的转基因研究进展做了综述。     

陕西临潼富硒鲜食玉米品种筛选试验

为研究不同鲜食玉米品种对硒的富集能力,2019年6月25日在陕西省富硒农作物种植示范基地（临潼）开展了19个鲜食玉米品种的天然富硒栽培试验。主要调查了物候期,病虫害和杂草种类,并测定了农艺性状和硒的含量。试验结果表明,同一播期下糯玉米的物候期明显短于甜玉米;而病虫害和田间杂草情况在甜、糯玉米品种之间未见明显区别;甜玉米和部分糯玉米的硒含量达到陕西省富硒食品标准（DB61T 556-2012）,其中糯玉米陕K818硒含量最高（1.16 mg·kg^-1）。结合田间产量、品质、以及含硒量等综合分析,在临潼进行天然富硒鲜食玉米品种推广,糯玉米建议选用陕K818和郑黑糯1号;甜玉米建议选用华耐甜玉23和陕甜1500两个品种。     

转Bt基因玉米对亚洲玉米螟的抗性研究

以普通玉米杂交组合N3030为对照,通过田间调查、盆栽接虫试验、室内饲养和组织切片,系统研究了转B t基因玉米杂交组合N3030B t对亚洲玉米螟的抗性表现.结果表明,转B t基因玉米N3030B t上的虫孔率、百株幼虫数、百株隧道数和百株隧道长均极显著低于对照;1-3龄幼虫取食转B t基因玉米后1-2 d死亡,死亡率达90%以上;4龄以后死亡率为0,但其生长发育均受到一定的抑制;组织切片观察表明,亚洲玉米螟幼虫取食转B t基因玉米后,中肠肠壁细胞端部的微绒毛出现不同程度的溶解,大部分肠壁细胞排列松弛,细胞体缩短,细胞层变薄.该结果表明转B t基因玉米对亚洲玉米螟幼虫具有稳定的杀虫作用.     

Screening of Transgenic Soybean Transformed by Means of Pollen-tube Using Kanamycin

Kanamycin was used to screen T0 seeds of the variety Dongnong 46 transformed by means of pollen-tube method. The results showed that 400 mg·L-1 kanamycin could inhibit growth of non-transgenic plants, and 2 positive plants were gotten combined with Gus dyeing and PCR detection. It is proved that this method is e-conomic and effective in preliminary screening the transgenic plants.     

转基因玉米的定性PCR检测

根据玉米内参照基因zSSIIb和转基因玉米中常见的CaMV35S、NOS、Bt、hpt等基因的特异性结构,设计5对定性PCR引物,经定性PCR检测,可以准确地将转基因玉米的目的基因检出,说明这5对引物具有较高的特异性和准确性。由此建立了一套转基因玉米定性PCR检测方法,用于转基因玉米及其产品的筛查、抽检。     

利用实时荧光PCR快速筛查玉米中转基因成分

玉米是拥有转基因转化体数量最多的作物,多样的转化体增加了玉米中转基因成分筛查的难度。为了建立玉米中转基因成分的快速筛查方法,利用Taqman探针实时荧光PCR方法,通过对玉米样品中CaMV35S启动子(P-35S)和NOS终止子(T-NOS)2个元件组合的检测,完成对现有玉米转化体的筛查。建立的Taqman探针实时荧光PCR方法灵敏度可达到0.1%,检测时间较普通PCR方法缩短1h以上。同时提出了转基因玉米转化体鉴定路线图。该筛查方法可对玉米中的转基因成分进行快速、高灵敏度的筛查。     

玉米灌浆期抗旱性鉴定形态指标的筛选

以9个玉米品种为试验材料,在大田设置自然干旱胁迫试验与正常灌水试验,对叶面积、株高、干物质、穗位高等8个形态指标进行测定,用8个指标的相对值与抗旱指数进行相关分析.结果表明:叶面积可作为抗旱性鉴定的一级指标;株高、干物质、雄穗分支数、雄穗大小可作为抗旱性鉴定的二级指标;其余指标可作为抗旱性鉴定的三级指标.     

转Bt基因玉米研究进展

对转Bt基因玉米的研究概况,转化方法,转化体的鉴定方法,遗传评价及存在的问题进行了综述。