阿维菌素高产工业菌株的推理选育研究

[目的]通过推理选育,获得高产的阿维菌素工业生产菌种。[方法]以Biok AV-023为出发菌株,首先采用常规紫外诱变筛选出正突变菌株,再通过添加L-异亮氨酸诱导推理选育方法选育高产阿维菌素生产菌株。[结果]经紫外诱变和L-Ile定向筛选表明,L-Ile筛选浓度以0.5%最佳,经复筛后获得的高产突变菌株AV60s-32最高效价可达4 520 IU/ml,与出发菌株相比提高了23.4%。[结论]采用紫外诱变和L-Ile推理选育相结合的方法可有效提高阿维菌素菌种发酵效价。     

阿维菌素Bla组分高产菌株的高通量选育

为筛选阿维菌素高产菌株,建立了阿维菌素高产菌株的高通量初筛及复合诱变技术选育高产菌株的方法.初筛首先采用24孔板培养突变株,发酵培养5 d,甲醇直接浸提固体培养物,最后利用96孔板-酶标仪检测浸提液在紫外波段245 nm吸收.以阿维链霉菌(Streptromyces avermitilis)编号为AV-X-95的阿维菌素产生菌作为出发菌株,通过紫外线(UV)照射45 s和亚硝基胍(NTG)处理60min的组合诱变方法对出发菌株的孢子悬液进行了连续的诱变处理.研究结果表明,1 728株突变子的经高通量初筛后得到8株高产菌株,经摇瓶复筛和稳定性考察得到高产菌株AW4-329,其Bla产量较出发菌株提高了15.1%.     

阿维菌素B1a组分高产菌株的高通量选育

为筛选阿维菌素高产菌株,建立了阿维菌素高产菌株的高通量初筛及复合诱变技术选育高产菌株的方法。初筛首先采用24孔板培养突变株,发酵培养5 d,甲醇直接浸提固体培养物,最后利用96孔板-酶标仪检测浸提液在紫外波段245 nm吸收。以阿维链霉菌(Streptromyces avermitilis)编号为AV-X-95的阿维菌素产生菌作为出发菌株,通过紫外线(UV)照射45 s和亚硝基胍(NTG)处理60 min的组合诱变方法对出发菌株的孢子悬液进行了连续的诱变处理。研究结果表明,1 728株突变子的经高通量初筛后得到8株高产菌株,经摇瓶复筛和稳定性考察得到高产菌株AW4-329,其B1a产量较出发菌株提高了15.1%。     

诱变育种推理选育类球红细菌CoQ10高产菌株正突变库的研究

以类球红细菌NM-FZ-47为出发菌株,采用紫外线和NTG2种诱变,利用叠氮钠、对羟基苯甲酸、罗红霉素及卡那霉素等抗性筛选因子,实现快速推理选育辅酶Q_(10)高产菌株,成功构建了2个正突变库,并从库中筛选出产量提高15%以上的6株辅酶Q_(10)突变株UV-LH-37、UV-NaN3-44、NTG-LH-28、NTG-NaN3-17、NTG-PHB-54、NTG-LN-67,作为进一步基因组改组育种的出发菌株。     

曲酸高产菌株的选育及发酵培养基的优化

以米曲霉为出发菌株,通过物理、化学及复合诱变得到一株曲酸高产菌株ENTG-206,并对该菌株的发酵条件进行了初步研究。结果表明:该菌株的最佳发酵培养基配方为玉米水解糖12%,麦根-豆饼粉0.6%,MgSO4.7H2O 0.05%,KH2PO40.2%,pH值6.0。以优化后的培养基进行30L摇瓶发酵,发酵4d产酸可达49.8mg.mL-1。     

植酸酶产生菌的筛选与选育

经大量菌种初筛和复筛,得到一株产植酸酶较高的菌株Ｇ２,酶活达２．６千单位,菌种经ＵＶ和ＮＴＧ诱变处理,并采用高主磷霉素作筛子,得到了一株液体发酵产酶达１３．５千单位的菌株Ｇ２．１．１．５．７。     

D-核糖耐高糖高产菌株的选育研究初报

以产D-核糖的枯草芽孢杆菌(Bacillius subtilis)BFD-100810为出发菌株,通过紫外线、硫酸二乙酯诱变处理,获得一株D-核糖高产突变株BFD-101106。该菌株能在发酵液原料糖浓度为180g·L-1的培养基上生长良好,产量高达85g·L-1,转化率提高到47%,该菌株较出发株表现出在高浓度原料配比中能积累更高产物。将BFD-101106菌株连续传代10次后,测定其遗传稳定性和产核糖能力,D-核糖产量在84～89g·L-1,没有发生显著变化,表明BFD-101106是一个稳定的突变株。     

单菌落效价测定在阿维菌素菌种筛选中的应用研究

为减少阿维菌素菌种筛选的工作量,缩短筛选时间,提高筛选效率,本文对阿维菌素菌种单菌落效价进行测定,用单菌落效价初步表达菌株的产抗能力,探索固态下单菌落效价与液态下摇瓶效价的相关性。结果表明,阿维菌素菌种固态下产抗能力和液态下产抗能力正关联,相关系数r=0.924。可以只对菌落效价高的菌株做进一步的摇瓶培养及效价测定,减少筛选工作量,提高筛选效率。     

纤维素酶高产菌株选育的研究进展

本文综述了纤维素酶的类别及产纤维素酶的微生物菌种。研究了不同菌株通过各种方法诱变选育获得高产纤维素酶能力的菌株。旨在为更好地利用产纤维素酶高的菌株提供参考。     

乙醛脱氢酶高产菌株Z07-J01的选育与酶学特性

通过紫外线和He-Ne激光诱变醋酸菌,选育出1株乙醛脱氢酶高产菌株Z07-J01,该正突变株24 h发酵酶活为1 008.00 U/g湿菌体,比出发株提高了276%,且酶活在10代内稳定。该突变株所产乙醛脱氢酶的最适作用pH为7,最适作用温度为50℃;在25℃保温30 min,该酶酶活不受影响;在65℃保温30 min,该酶完全失活;2 mmol/L Cu2 能使该酶完全失活,2 mmol/L Mn2 则对该酶有较强的激活作用。     

阿维菌素高产菌的育种研究进展

阿维菌素是阿维链霉菌产生的具有杀虫活性的大环内酯类抗生素,在农业和畜牧业中应用广泛。对近年来的研究概况,从产特定组分阿维茵素菌种选育、阿维菌素高产菌选育和阿维菌素的改造创新等方面进行了综述。     

抗性筛选在抗生素高产菌选育中的应用

抗生素产生菌的产抗能力与其对抗生素的抗性之间具有一定的相关性,这为抗生素高产菌株的定向筛选提供了一种有效方法,即抗性筛选。综述了抗生素高产菌选育中抗性筛选的机理及其应用。     

2.4%阿维·氯氰微乳剂的研究

介绍了阿维菌素与氯氰菊酯混配的一种新剂型品种——2.4％微乳剂,简述了该剂型的特点、贮藏稳定性、质量指标及药效试验结果,表明该微乳剂成本低、药效好、使用安全、具有良好开发应用前景。     

高产壳聚糖酶菌株的筛选及诱变育种

目的]研究利用紫外线和硫酸二乙酯（DES）诱变得到产壳聚糖酶活性较高的菌株。[方法]利用以壳聚糖为唯一碳源的选择性培养基,从自然界中筛选得到1株产壳聚糖酶活较高的菌株,对其进行鉴定,并且利用紫外线和DES诱变方法来提高该菌株的产酶能力。[结果]经初步鉴定,大致判定产壳聚糖酶的Y-4菌株为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）。经紫外线和DES诱变处理分别得到2株壳聚糖酶活性明显提高的突变株,其酶活分别为8.92和8.12 U/ml,分别是出发菌株Y-4（3.00 U/ml）的3.0和2.7倍。2株突变株经连续传代10次后均具有较高的产酶稳定性。[结论]紫外线诱变较DES诱变效果好。     

阿维菌素废水的絮凝研究

[目的]研究几种无机絮凝剂以及复配入有机絮凝剂聚丙烯酰胺（PAM）对阿维菌素厌氧废水的絮凝效果,并确定最佳的絮凝条件,为工程应用提供理论支持。[方法]采用FeCl3、Fe2（SO4）3、Al2（SO4）2、KAl（SO4）2以及和PAM的复配处理阿维菌素厌氧出水,研究絮凝剂处理后废水的COD、色度的去除率。[结果]FeCl3＋PAM复配絮凝剂为最佳絮凝剂,即投加量为每吨废水125 g FeCl3与5 gPAM时,COD和色度的去除率分别为53.51%和65.81%,絮凝剂以分析纯计算,FeCl3＋PAM复配絮凝剂的处理成本为2.52元/t废水。[结论]复配入PAM后,无机絮凝剂的处理效果大幅提高;FeCl3＋PAM复配絮凝剂为阿维菌素厌氧出水的最佳絮凝剂。     

梧宁霉素高产菌株选育的研究

亚硝酸与紫外线复合诱变、紫外线诱变、亚硝酸诱变对菌株WN-4的孢子依次进行处理,采用链霉素抗性突变株筛选和琼脂块筛选法,得到一株梧宁霉素高产菌株W11;其生物效价是出发菌株的1.27倍。     

阿维菌素防治地黄跳甲试验研究

研究了阿维菌素对地黄跳甲的田间防治效果和对天敌的影响,以及在地黄中的残留动态。结果表明,1.8%阿维菌素乳油5 000倍液药后10 d对地黄跳甲防效好,与对照药剂40%辛硫磷乳油1 000倍液和10%吡虫啉可湿性粉剂5 000倍液的防效相当,而且对天敌影响小。药后15 d在地黄叶片和根茎中的残留量分别为0.013 4 mg/kg和0.016 4 mg/kg,降解率分别为95.69%和92.42%,满足在食品中最高残留限量国家标准的要求。可作为控制地黄跳甲危害的有效药剂,建议与辛硫磷混配使用。     

阿维菌素高产菌的诱变育种研究

[目的]选育B1a组分较高的阿维菌素高产菌株。[方法]通过紫外线-氯化锂(LiCl)和紫外线-亚硝基胍(NTG)对阿维链霉菌N-5-6进行了复合诱变处理。[结果]以1.00 mol/L的LiCl和60s的紫外线照射时间以及以45 s的UV照射时间和0.8 mg/ml的NTG浓度分别对出发菌株进行复合诱变处理,通过筛选得到13株总效价比出发菌株提高了20%以上的突变株,经HPLC检测,其中7株B1a组分含量较高,均在45%以上。菌株H02180的B1a含量达到了51.35%,比出发菌株N-5-6的B1a含量提高了65.1%;菌株H02108的B1a含量达到了51.26%,比出发菌株N-5-6的含量提高了64.8%。[结论]采用紫外线和氯化锂、紫外线和亚硝基胍这2种复合诱变方法对于阿维链霉菌的高产菌株的选育是有效的。     

纳他霉素高产菌株的诱变选育

以褐黄孢链霉菌(ATCC13326)为出发菌株,紫外诱变后,结合链霉素抗性筛选法选育纳他霉素高产菌株.原始菌株活化后,测定其最小链霉素抑制质量浓度为8 μg/mL.采用90% 的紫外致死剂量,照射108 mL-1 ATCC13326孢子悬液,诱变后涂布于8 μg/mL链霉素选择培养基上,筛选链霉素抗性突变株.通过形态指标初步选择5株突变株进行发酵性能测定,种子培养26 h,摇瓶发酵96 h,用紫外分光光度计在303 nm下测定其吸光值,计算纳他霉素发酵产量.结果表明原始菌株纳他霉素发酵产量为1.229 g/L,诱变获得的两株高产突变株纳他霉素发酵产量分别为1.552和1.776 g/L,分别高出原始菌株26.3%、44.5%.