蓝藻伪空胞的测定及其前处理方法研究

[目的]探讨蓝藻伪空胞的测定及其前处理方法。[方法]改进了测定伪空胞的毛细管压力法,对改进后的装置进行了检测限和精密度测试,并研究了2种浓缩方法和2种保存方法对3种蓝藻细胞数量和伪空胞含量的影响。[结果]改进后的蓝藻伪空胞测定装置其检测限达到0.001 8μl/m l藻液,同一样品测定结果相对标准偏差小于1%。采用过滤和离心2种浓缩方法时,分散单细胞的微囊藻细胞损失都大于50%,其中小群体的微囊藻采用离心的方法细胞损失较小,而丝状的颤藻采用过滤的方法损失较小;这2种方法对伪空胞含量的影响均可忽略。3种蓝藻在直接冷藏和添加鲁哥试剂保存7 d后,其细胞浓度和单位细胞的伪空胞含量均未发生明显改变,其中对于伪空胞,直接冷藏的损失更小;对于自然水体样品,宜添加鲁哥试剂进行保存。[结论]为研究蓝藻浮力调节机制及其暴发机理提供了理论依据。     

离心·冷藏对牟氏角毛藻再培养的影响

[目的]探索牟氏角毛藻经浓缩运输和冷藏保存后再作藻种和饵料的可行性效果。[方法]通过离心和低温冷藏2种方法处理牟氏角毛藻,然后再继续进行再培养,以此来延长牟氏角毛藻的储存时间并减小运输量。[结果]试验表明,经不同离心速度和不同离心时间处理后的角毛藻进行再培养,生长速率不同。在3000r／min的转速下离心7min的角毛藻再培养效果最好,最大生长率可达0．83,并且在此离心条件下的藻泥静置5d之内再添加培养基进行培养仍生长良好。但是经4℃冷藏后的角毛藻常温下再培养效果不好。[结论]低温冷藏会影响藻细胞的正常生长,而且随着冷藏时间的延长,细胞再培养愈来愈困难。因此,建议科研及生产中不采用此种方法作为保种技术。     

离心·冷藏对牟氏角毛藻再培养的影响

[目的]探索牟氏角毛藻经浓缩运输和冷藏保存后再作藻种和饵料的可行性效果。[方法]通过离心和低温冷藏2种方法处理牟氏角毛藻,然后再继续进行再培养,以此来延长牟氏角毛藻的储存时间并减小运输量。[结果]试验表明,经不同离心速度和不同离心时间处理后的角毛藻进行再培养,生长速率不同。在3000 r/min的转速下离心7 min的角毛藻再培养效果最好,最大生长率可达0.83,并且在此离心条件下的藻泥静置5 d之内再添加培养基进行培养仍生长良好。但是经4℃冷藏后的角毛藻常温下再培养效果不好。[结论]低温冷藏会影响藻细胞的正常生长,而且随着冷藏时间的延长,细胞再培养愈来愈困难。因此,建议科研及生产中不采用此种方法作为保种技术。     

产毒微囊藻PCR检测方法的建立

[目的]建立产毒微囊藻的PCR检测方法。[方法]根据GenBank上发表的mcyA基因序列保守区域设计一对引物,建立和优化检测产毒微囊藻的PCR方法,并以此方法检测产毒和非产毒微囊藻参考株系。[结果]经PCR检测,产毒藻株出现特异性扩增条带,而不产毒株未出现特异性条带;以10倍系列稀释纯培养的蓝藻细胞作为PCR反应的模板,检测限均为2.46×103细胞/ml;运用建立的方法从天然水体中检测到了产毒微囊藻,对PCR产物序列进行比对,发现PCR扩增片段与铜绿微囊藻(PCC7806)核苷酸序列的同源性为98%。[结论]该研究为水华产毒微囊藻的监测提供了一种新方法。     

铜绿微囊藻臭氧化以及藻毒素去除研究

[目的]研究臭氧杀藻机理和藻毒素去除效能,探索富营养化水体藻类处理的可行技术。[方法]采用臭氧氧化技术,针对太湖蓝藻中典型的产毒株——铜绿微囊藻(FACHB-912)进行了杀藻、藻毒素去除效果研究。[结果]臭氧杀藻能够破坏铜绿微囊藻细胞壁,导致胞内物质流失,很少量的臭氧就能够对藻细胞造成损伤,抑制其正常生长代谢。臭氧氧化可以去除藻毒素(MC-LR、MC-RR),10min去除率,LR为82.25%,RR为74.28%。臭氧去除藻毒素受溶液TOC影响,在同样条件下,对分离纯化后藻毒素的去除率LR为95.68%,RR为86.03%。[结论]臭氧化去除铜绿微囊藻效果显著。臭氧对于MC-LR、MC-RR去除效果明显,LR的臭氧降解效率要高于RR。     

4种水生植物水浸提液对水华微囊藻生长的影响

[目的]为了研究芦苇、红蓼、穗状狐尾藻和香蒲4种水生植物水浸提液对水华微囊藻生长的抑制效应。[方法]培养水华微囊藻细胞,制备4种水生植物的水浸提液,处理后通过藻细胞密度的测定计算抑制率。[结果]芦苇、红蓼、穗状狐尾藻和香蒲水浸提液对水华微囊藻的生长都表现出一定的抑制作用,其中芦苇的抑制效果最明显。[结论]利用水生植物分泌的化感物质抑制水华微囊藻生长是一种有效的控藻方式。     

EGCG对铜绿微囊藻的抑制效应及机制研究

[目的]本文旨在研究EGCG对铜绿微囊藻的抑制效应,初步揭示其抑藻机制,为高效环保型抑藻剂的开发利用奠定基础。[方法]表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶叶中组分最高的一种儿茶素,对铜绿微囊藻具有高效而持续的抑制作用。分别用8、12和16 mg·L-1的EGCG处理对数生长期的铜绿微囊藻培养液,测定藻细胞的生长状态和生理生化活性。[结果]EGCG处理后藻细胞生长受到不同程度的抑制;光合作用效率下降;细胞内活性氧水平升高,抗坏血酸能缓解氧化胁迫。电镜观测结果显示:EGCG处理导致藻细胞内类囊体结构遭到破坏,细胞皱缩变形;藻细胞培养液中的藻毒素含量在处理前后没有显著变化,细胞内藻毒素含量显著下降。[结论]EGCG对铜绿微囊藻的生长和繁殖造成很强的抑制作用,是一种很有潜力的抑藻剂。     

不同pH值条件下铜绿微囊藻与附生假单胞菌磷代谢研究

[目的]探讨pH值对铜绿微囊藻的生长代谢及其与附生假单胞菌磷代谢关系的影响。[方法]通过不同pH值条件下（8～10）铜绿微囊藻的吸磷试验和不同pH值（7.0～9.0）对铜绿微囊藻与假单胞菌磷代谢的影响试验,测定了短时间内铜绿微囊藻的吸磷情况,以及较长时间内微囊藻的生长曲线、水中磷浓度的变化和微囊藻中总磷含量的变化。[结果]短时间内,pH值对铜绿微囊藻的吸磷能力有影响,随着pH值的升高,吸磷能力增强。在较长一段时间内,pH值越高,藻的生长速率越快,生长情况越好。铜绿微囊藻有自我调节pH的能力,能很好地利用假单胞菌释放到水体中的磷。在藻、菌、水的系统中,菌中的磷起缓释磷源的作用,尽管浓度很低,但有利于藻的生长。[结论]pH值是影响藻-菌-水系统中磷元素循环的因素。     

不同试验条件对藻蓝蛋白提取效率的影响

以实验室培养的水华蓝藻单种[铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa,M.A)、水华微囊藻(Microcystis flos-aquae,M.F)、惠氏微囊藻(Microcystis wesenbergii,M.W)、鱼腥藻(Anabaena sp,A.s)]以及野外新鲜水华蓝藻为研究对象,通过设置不同细胞破碎方法和提取剂种类,筛选并优化藻蓝蛋白荧光分析法的前处理技术。结果表明,冻融试验中,冷冻温度与提取剂添加顺序对蓝藻细胞破碎率无显著影响;以去离子水为提取剂时,冻融2次即可达到最佳破壁条件;在冻干试验中,蓝藻真空抽滤在滤膜上能提高蓝藻细胞的破碎率;综合比较冻融和冻干,后者对蓝藻细胞的破碎效率高于前者;对比3种提取剂对藻蓝蛋白的提取效率,去离子水对藻蓝蛋白的提取效率最高。     

水杨酸对铜绿微囊藻的化感抑制作用

[目的]探讨外源水杨酸对铜绿微囊藻生长及光合系统的影响,为将水杨酸应用于除藻剂研发提供参考依据.[方法]通过人工[培养的方法,利用分光光度计和各类试剂及试剂盒等对经不同浓度(0.02、0.04、0.06、0.08、0.10和0.12 g/L)水杨酸处理铜绿微囊藻的各指标进行测定,包括生长抑制率、叶绿素a、藻胆蛋白及总可溶性蛋白含量.[结果]水杨酸浓度越高,对铜绿微囊藻的抑制作用越明显,以0.12 g/L水杨酸的抑制率最高,且抑制作用随时间的延长而不断增强,48h后抑制率达95.66%.经0.10 g/L水杨酸处理后,铜绿微囊藻的叶绿素a、藻胆蛋白及总可溶性蛋白含量基本维持在初始水平;0.12 g/L水杨酸能有效抑制铜绿微囊藻的叶绿素a含量,促使铜绿微囊藻中的藻蓝蛋白(PC)含量相对降低、别藻蓝蛋白(APC)含量相对上升,但藻红蛋白(PE)含量基本维持在初始水平.[结论]水杨酸通过抑制铜绿微囊藻的叶绿素a等光合色素,阻遏其对光的捕获及吸收,扰乱藻胆蛋白各组分构成,从而致使藻类生长受抑,甚至死亡.即藻类叶绿素a是水杨酸抑制铜绿微囊藻生长的一个作用位点.     

气相色谱法测定蔬菜中有机磷的研究

[目的]建立检测蔬菜中有机磷的气相色谱方法。[方法]采用气相色谱-火焰光度检测器检验蔬菜中的有机磷。[结果]结果表明,农药的加标回收率为73.88%~108.90%,相对标准偏差为2.07%~5.08%,检出限为0.017 3~0.039 5μg/ml。[结论]该方法操作简便、快速,方法回收率和精密度较好。     

原子荧光光度计测定硒的检出限和精密度

[目的]验证原子荧光法测定硒的检出限和精密度的准确性。[方法]运用双道原子荧光光度计AFS-9730测定硒的检出限和精密度,检验其是否满足环境保护部新颁布的《水质汞、砷、硒、铋和锑的测定原子荧光法》(HJ 694—2014)对检出限和精密度的要求。[结果]原子分光光度计测定硒的检出限为0.005 2μg/L,相对标准偏差为0.78%。[结论]原子分光光度计测定硒的检出限和精密度满足环境保护部新颁布的《水质汞、砷、硒、铋和锑的测定原子荧光法》(HJ 694—2014)的要求。     

液相色谱串联质谱检测动物源性食品中莫西丁克残留

[目的]建立动物源性食品中莫西丁克残留的检测方法。[方法]首先对样品净化方法和试验参数进行了优化。利用乙腈对样品中莫西丁克进行提取,利用分散型固相萃取净化莫西丁克,利用液相色谱串联质谱测定动物源性食品中莫西丁克的含量。[结果]最佳质谱条件为：离子源温度300℃、喷雾针压力15 Psi、干燥气流速6 L/min。在此条件下,子离子峰的响应值最高。该方法的检测限为0.005 mg/kg,当在添加浓度0.005～0.02 mg/kg时,回收率为81.08%～113.72%,RSD为4.21%～9.69%。[结论]该方法步骤简单、可操作性强、有机溶剂用量少、成本低、杂质干扰少,有良好的精密度及较低的方法检测低限,适于动物源性食品中莫西丁克的快速测定。     

气相色谱法测定地奥司明中吡啶残留的研究

[目的]建立测定地奥司明中吡啶残留的气相色谱分析方法。[方法]采用氢火焰离子检测器和DB-WAX色谱柱(30.00 m×0.25mm,0.25μm),在分流比30∶1、进样口温度250℃、检测器温度250℃、柱温采用程序升温、载气氮气总流量55.50 ml/min、进样量1μl的条件下,用气相色谱法测定了地奥司明中的吡啶残留。[结果]吡啶在1.965～23.586μg/ml浓度范围内与峰面积的线性回归方程为:Y=698.4X+51.853,相关系数为0.999,线性关系良好,检测限为0.05μg/ml,定量限为0.25μg/ml,回收率在95.08%～100.05%。[结论]该方法精密度较高、稳定性较好,可用于地奥司明中吡啶含量的检测。     

几种稻田固氮蓝藻挥发物的气相色谱-质谱分析

[目的]分析稻田固氮蓝藻挥发性成分,评估其应用潜力。[方法]采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析方法对5株稻田固氮蓝藻的挥发性化学成分进行分析与鉴定。[结果]固氮蓝藻挥发性成分中有多种生物活性功能的烷烃、酚类和酯类物质,具有抗动植物病原微生物、抑制有害藻类、抗草、杀虫等作用。[结论]稻田固氮蓝藻在生物源药物、杀藻剂和农药等生产领域具有应用价值。     

氢化物发生—原子荧光法测定沼液中铅含量的研究

[目的]为评价沼肥利用的安全性以及深入研究沼肥的安全使用提供参考依据。[方法]采用氢化物发生—原子荧光光谱法测定沼液中的铅含量。[结果]沼液中铅含量为0.029 4 mg/L。该方法的检出限为0.169 6μg/L,加标回收率为97.8%～101.0%,相对标准偏差为2.1%。[结论]该检测方法具有灵敏度高、精密度好、检出限低、结果准确的优点,适用于实验室测量沼液中铅含量。     

云南普洱茶主产区茶叶中农药残留的GC-NCI-MS-SIM分析

[目的]建立云南茶叶中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药残留量气相色谱-负化学离子源-质谱-选择离子监测(GC-NCIMS-SIM)同时测定的新方法。[方法]以有机磷、有机氯、拟除虫菊酯这些含电负性原子的农药为检测对象,建立了云南茶叶中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类农药残留GC-NCI-MS-SIM同时测定的分析方法。[结果]在10~200μg/L浓度时,定量离子的峰面积与浓度有很好的相关性,相关系数都在0.999以上,方法加标回收率在70.65%~103.52%,RSD在1.13%~8.94%,方法最低检测限远远低于国家标准和欧盟残留限量标准。应用GC-NCI-MS-SIM方法分析云南茶叶中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯这些含电负性原子的农药,在最低检出限、选择性和抗干扰能力等方面均具有明显优势。[结论]该方法高效、准确、选择性好、抗干扰能力强,在云南茶叶农药残留分析领域具有较好的发展前景。     

O-乙基磷酰二氯气相色谱分析方法研究

[目的]建立药物中间体O-乙基磷酰二氯的定量分析方法。[方法]采用气相色谱法,以十一烷为内标物,用氢火焰离子化检测器对O-乙基磷酰二氯进行定量分析。[结果]采用气相色谱法定量分析药物中间体O-乙基磷酰二氯,O-乙基磷酰二氯在一定浓度下的线性相关系数R2=0.999 3,标准偏差为0.173 3,变异系数为0.179 4%,平均回收率为99.74%。[结论]气相色谱法定量分析药物中间体O-乙基磷酰二氯,方法简单、快速,结果准确,灵敏度、精密度和检测限均符合药物残留分析的要求。     

糙米中丁硫克百威及其代谢物的残留测定

[目的]监测与评价糙米中丁硫克百威及其代谢物克百威、3-羟基克百威的残留量。[方法]建立凝胶渗透色谱（GPC）净化、气相色谱-质谱（GC-MS）同时测定糙米中丁硫克百威及其代谢物克百威、3-羟基克百威残留的方法。样品中的待测农药组分采用环己烷-乙酸乙酯（1∶1,V/V）提取,GPC和中性氧化铝（A l2O3）小柱净化,GC-MS测定。[结果]丁硫克百威和克百威的最低检测量均为2.0×10-11g,3-羟基克百威为1.0×10-10g;最低检出质量分数均为0.1 mg/kg,各组分的添加回收率为77.8%～94.6%,变异系数为3.86%～6.58%。[结论]凝胶渗透色谱净化-气相色谱质谱法测定丁硫克百威及其代谢物在糙米中的残留方法灵敏度、准确度、精密度均符合农药残留分析的要求,可用于检测糙米中丁硫克百威及其代谢物的残留量。