烟草转基因研究进展

综述了近十年来的烟草转基因研究各方面取得的进展和存在的问题。重点对烟草转基因方法、外植体选择、烟草转抗旱基因研究、转抗病基因研究、转抗寒基因研究、转耐盐基因研究、转抗虫基因研究、转抗金属逆境基因研究和其它烟草转基因相关领域研究现状进行综述,探讨了目前烟草转化工作中存在的问题并对其进行展望。     

转烟草花叶病毒复制酶基因烟草的病毒抗性研究

对用根瘤农杆菌双质粒法导入烟草花叶病毒复制酶基因的转基因烟草后代的研究表明：转基因烟草抗烟草花叶病毒和马铃薯Ｘ病毒,但感染马铃薯Ｙ病毒,抗病毒的转基因烟草存在某种机制限制着病毒在植株内的转移,转烟草花叶病毒复制酶基因烟草植株内不产生该复制酶,其抗病毒的确切机制有等进一步研究。     

烟草转基因研究的动态和展望

本它述了烟草的转基因研究的方法、应用及近几年烟草转基因研究的动态,并对存在的问题进行了分析。     

转基因烟草植株对南方根结线由的抗性测定

 烟草根结线虫病是烟草的主要病害之一，病原线虫主要为四种常见根结线虫，即南方根结线虫〔Meloidogyne incognita (Kofoid and White) Chirwood]、爪哇根结线虫[M.javanica (Treub) Chitwood]、花生根结线虫〔M.arenaria (Neal) Chirwood]和北方根结线虫(M.hapla Chitwood)，其中，以南方根结线虫危害较普遍，尤其是南方根结线虫1号小种.防治烟草根结线虫病的有效方法之一是利用抗病品种.     

ChIFN-α基因在烟草中的表达及转基因烟草对TMV的抗性

动物α干扰素具有高效广谱的抗病毒作用,通过农杆菌介导法将35S驱动的干扰素基因ChIFN-α转化烟草,Southern杂交和Western杂交进行目的基因的转化、表达检测,重组蛋白的数量通过ELISA测定,对获得的转基因烟草植株进行TMV接种实验,结果表明ChIFN-α基因的转化赋予了转基因烟草对TMV的抗性,进一步的荧光定量PCR差异表达检测结果表明,该抗性可能与转基因烟草体内防卫基因PR-la、抗病N基因和信号转导MAPK基因受到上调表达有关。     

烟草转基因工作的研究进展

综述了烟草转基因研究各方面取得的进展和存在的问题,并对其进一步的研究作出了展望。     

转基因烟草植株的检测

对采用叶盘法以质粒PBLGC为介导转化烟草的3个品种。经Kan抗性筛选获得的119株转化的烟草再生植株分别以启动子CaMV35S、几丁质酶基因和β—1，3-葡聚糖酶基因的引物进行PCR检测，分别获得91、72、47株阳性植株。其中，同时具有几丁质酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因的植株有36株。对部分转化植株进行PCR—Southern杂交实验的结果表明，外源基因的转化频率与植物品种、外源基因片段的大小有关。又对4株转基因植株后代(T1)进行了PCR、PCR—Southern杂交，结果发现，几丁质酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因已经稳定地遗传给后代，但二者的遗传传递率不同，β—1，3-葡聚糖酶基因似乎比几丁质酶基因更易于传递。另外，对转化植株T0代几丁质酶活力检测结果表明，转基因植株中几丁质酶活力显著增强，含有几丁质酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因的植株内切几丁质酶活力最强。     

马铃薯Y病毒复制酶基因的转基因烟草对PVY的抗性

将农杆菌LBA4404/pAL4404、pBin438双元载体上的NIb基因正义序列、反义序列、5''-缺失序列及新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)转入烟草品种NC89的染色体,获得抗卡那霉素的转化再生烟草植株.经抗性筛选、PCR检测、无性扩繁和大量重复抗病鉴定,结果表明,转化烟草植株DNA中整合了外源目的基因;NIb基因正义序列、5''-缺失序列转化再生植株中,均出现抗10μg/mlPVY侵染的植株;NIb基因反义序列转化再生植株仅部分抗5μg/mlPVY侵染.ELISA分析认为抗性植株无病毒累积.初步筛选出对PVY侵染具有较高抗性的转基因烟草植株.     

抗TMV、CMV转基因烟草的初步选育

将烟草花叶病毒复制酶54 KD蛋白基因构建到质粒pSSZ32.54K,导入根癌农杆菌EHA105株系,用农杆菌介导的叶盘法转化含CMV CP基因的纯合系烟草,获得了含CMV CP基因和TMV RepE基因的转基因烟草,以及只含TMV RepE基因的转基因烟草.以繁殖于新鲜普通烟叶片上的TMV为毒源,机械摩擦接种含双基因的烟草和只含CMV CP基因的烟草.接种15 d后,观察植株发病情况,发现转双基因的烟草无花叶症状出现,而对照植株(只含CMV CP基因)出现花叶症状.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测病毒含量,发现转基因植株体内无病毒积累,而对照植株体内有病毒积累.因此,含RepE基因的烟草对TMV有一定抗性.     

抗烟草花叶病毒(TMV)转基因烟草的初步选育

 病毒病是云南烤烟生产上的重要病害,目前尚无有效的防治手段,本研究试图采用植物基因工程技术,将TMV54KD蛋白基因转人云南烤烟栽培品种,获得抗TMV的转基因植株,减少由TMV危害造成的重大经济损失,用携带植物抗病毒基因表达载体的根癌农杆菌LBA4404菌株转化云南烤烟栽培品种红花大金元,获得了大量转基因植株,戴体质粒上含有卡那霉素抗性标记基因(NPTII)和CaMV35s启动子控制的烟草花叶病毒(TMV) 54KD蛋白基因,烟草叶片与携带载体质粒的根癌农杆菌共培养后,将其转移到含50μg/ml卡那霉素(Km)的MS+2.0mg/m16-BA+0.1mg/LNAA培养基上培养筛选,2-3周后分化出芽,切下小芽转移到含50μg/ml卡那霉素的MS+0.2mg/ml NAA的培养上进一步培养基筛选并使转化体生根,再对生根植株叶片进行Km抗性鉴定,结果表明,Km抗性标记基因(NPTII)在烤烟植株中已得以表达,间接证明TMV54KD蛋白基因已整合到烤烟植株的基因组中,抗性鉴定结果表明,转基因植株对TMV摩擦接种表现出明显抗性,选择抗性植株,单株收种子,以对其后代抗性的遗传稳定性研究.     

珙桐的外植体的选材及组织快繁启动

珙桐(Davidia involucrata)是一种濒危的孑遗植物,由于其花形优美,在园林绿化中具有很大的应用价值。但珙桐种子繁殖或扦插等繁殖方式都非常困难,无论从种质保护还是经济应用的需要,开展珙桐的快速繁殖组织培养技术研究都十分重要。本研究对珙桐组织培养的外植体选择、消毒液升汞的不同浓度和基本培养基进行了详细研究。结果表明,选择春季的鳞芽及半木质化的带芽枝条效果较好,75%的酒精消毒10 s 及0.1%升汞消毒10 min 基本能达到要求,而基本培养基以WPM培养基效果最好。研究结果构建了珙桐的以芽繁芽技术体系,但组培苗的生根需要进一步研究。     

抗病毒病转基因烟草的研究进展

综述了近年来国内外在抗病毒病转基因烟草方面的研究方法和进展以及烟草抗病毒病转基因研究的缺陷和前景。     

转基因玉米研究进展

植物转基因技术开辟了作物遗传改良的新途径。转基因玉米是植物基因工程领域研究的热点之一。近年来,应用转基因技术已经获得抗虫、抗除草剂和其他有用性状的转基因玉米。在此,就玉米转基因在受体系统、目的基因及转化方法方面的研究成果,尤其是近年来玉米转基因研究方面存在的问题、解决途径以及其他类型玉米的转基因研究进展做了综述。     

外植体、基本培养基和生长调节剂对红掌愈伤组织诱导影响的研究

研究不同外植体、基本培养基和生长调节剂对红掌愈伤组织诱导的影响。结果表明:不同外植体愈伤组织诱导从易到难依次为茎、叶柄和叶片,最佳基本培养基是改良Nitsch,1.0 mg/L6-BA和0.2 mg/L2,4-D生长调节剂组合最有利于红掌愈伤组织的诱导。     

表面活性剂对转枯草芽孢杆菌纤溶酶基因烟草根系BSFE分泌表达的调节

0.05%~8%(w/v)浓度的常用表面活性剂Triton×100、SDS、DMSO和Tween20可使转枯草芽孢杆菌纤溶酶(Bacillus subtilis fibrinolytic enzyme,BSFE)基因烟草增加BSFE在根系中的分泌或增加其在水培液中的稳定性,从而促进转BSFE基因烟草水培液BSFE活性的增加。其单位根体积下水培液BSFE活性与培养天数呈抛物线型变化趋势,可模拟为二次回归模型。这种促进作用与表面活性剂的浓度有关。一定浓度的Triton×100、SDS、DMSO和Tween20可作为转BSFE基因烟草根系分泌表达的有效化学调节剂。     

转基因烟草蛋白表达系统的研究进展

随着分子生物学和基因工程理论等技术的迅速发展,转基因烟草可以表达越来越多的外源蛋白。就转基因烟草作为蛋白表达系统的基本方法、研究状况及发展前景进行概述。     

相思类树种外植体繁殖研究进展

相思类树种生长速度快,适应性强,养地能力强,在中国南方广泛引种栽培,是南方大力发展短周期工业原料林的重要树种。根据近年来研究报道,笔者主要讲述了相思类树种的外植体在组培快繁和扦插繁殖中的应用情况,并在此基础上提出了当前利用外植体繁殖研究的发展建议,为今后解决中国相思类树种在推广和应用中的种苗问题提供借鉴和参考。     

核桃外植体的组织培养

[目的]研究核桃组织培养与快速繁殖的方法。[方法]以＂金薄香＂1号带腋芽的茎段为外植体进行试管繁殖。[结果]腋芽萌生最佳培养基：DKW＋BA1.5mg/L;分化及继代最佳培养基：DKW＋BA0.4mg/L＋IBA0.01mg/L;生根最佳培养基：1/2DKW＋IBA1.0mg/L,不过生根率只有23.3%,效果不太理想;二步生根法效果不错,生根率可达到36.7%。[结论]该研究筛选获得适宜＂金薄香＂1号核桃快繁的最佳培养条件,为建立核桃快繁体系、扩大核桃苗繁育规模奠定基础。     

芦笋花药离体培养技术研究

[目的]提高芦笋的产量。[方法]以不同阶段的芦笋花蕾为外植体,筛选花粉的最佳生长阶段（即最佳材料）,研究不同浓度激素配比对芦笋芽分化及生根的影响。[结果]以花粉处于单核期的花蕾为最佳试材,芽分化的最佳培养基为MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA1.0 mg/L;最佳生根培养基为MS＋KT 0.1 mg/L＋NAA 0.20 mg/L。[结论]该试验结果为芦笋的快速繁殖奠定了基础。     

抗除草剂转基因水稻及其生物安全性的探讨

抗除草剂转基因水稻在转基因水稻的研究和利用中占主导地位,其安全性问题也成为人们关注的焦点。文章简述了稻田中主要使用的几种除草剂及其作用机理,水稻抗除草剂基因的转化方法及抗性机理,讨论了抗除草剂转基因水稻的应用及生物安全性问题,并对今后的研究与应用进行了展望。