牛病毒性腹泻病毒研究进展

牛病毒性腹泻病毒是黄病毒科瘟病毒属的代表种,主要感染牛并引发疾病,造成严重的经济损失.自该病毒发现至今,已有60余年研究历史,随着生物学理论及技术不断发展,特别是反向遗传技术以及蛋白组学在病毒研究领域的应用,人们对该病毒产生了一些新的认识.论文从牛病毒性腹泻病毒的病毒粒子结构组成及功能、病毒复制周期及蛋白裂解过程、细胞损伤及免疫逃逸机制三个方面阐述了近几年牛病毒性腹泻病毒分子生物学研究的进展,重点讨论了病毒复制周期、多聚蛋白裂解、致细胞病变效应和免疫逃逸机制.     

牛冠状病毒、牛轮状病毒和致病性大肠杆菌混合感染致犊牛腹泻的研究

为了明确新疆石河子某规模化奶牛场犊牛腹泻病死率较高的原因。本研究对腹泻犊牛的粪样及病死犊牛肠道内容物进行病原检测,并对分离菌株进行毒力基因检测、耐药基因检测、动物致病性试验及药敏试验。最终明确病因主要由牛冠状病毒(BCoV)和牛轮状病毒(BRV)和大肠杆菌混合感染引起。药敏试验表明,分离到的大肠杆菌对28种抗生素产生了严重的耐药,仅对多粘菌素和呋喃妥因敏感,并且发现该菌同时携带2种毒力基因和10种耐药基因。本研究分离的一株大肠杆菌携带有丰富的耐药基因,具有多重耐药性,为该奶牛场上临床治疗加大了难度。而本试验结果为该养殖场提供科学的临床药物指导,为该牛场治疗此次犊牛腹泻提供了依据,同时为新疆犊牛腹泻混合感染的防控提供了病例参考和技术资料。     

Concurrent Bovine Virus Diarrhea and Bovine Papular Stomatitis Infection in a Calf

A case of concurrent infection with the viruses of bovine virus diarrhea and papular stomatitis in a calf is reported. The difficulties posed by such situations are described and the criteria used for diagnosis outlined. The two diseases are reviewed briefly and the possible mechanisms whereby bovine virus diarrhea virus is suspected of facilitating infection by other agents are discussed.     

Physicochemical Characterization of a Neonatal Calf Diarrhea Virus

Physicochemical characteristics of two isolates of a neonatal calf diarrhea virus were investigated. Neither isolate was sensitive to ether or chloroform, both were stable at pH 3.0, were relatively heat resistant, but were thermolabile when heated to 50°C for one hour in the presence of 1.0 M MgCl₂. Multiplication of virus was not inhibited by concentrations of 5-iodo-2'-deoxyuridine (IDUR) up to 500 µg/ml, which indicated that the nucleic acid was ribonucleic acid (RNA). Also, multiplication was not inhibited by concentrations of actinomycin D (AD) up to 0.5 µg/ml. Thermal denaturation studies demonstrated that the nucleic acid had a high melting temperature.

Resistance to lipid solvents, stability at an acid pH, relatively high thermostability, type of nucleic acid, plus previous reports from this laboratory on general morphology and cytopathogenicity suggest that the virus may belong to the diplornavirus (reovirus) group. However, thermolability in the presence of 1.0 M MgCl₂ is not consistent with characteristics of this group.

     

Cell Culture Studies of a Neonatal Calf Diarrhea Virus

The effects of a neonatal calf diarrhea virus on cell cultures were investigated. Bovine embryonic kidney cell cultures were the most satisfactory for production of virus. Cytoplasmic changes detected after inoculation with a high multiplicity of virus were: 1) cytoplasmic vacuoles; 2) some eosinophilic cytoplasmic inclusions; and 3) some degeneration of cells and detachment from the monolayer. Cultures stained with fluorescein-labeled antibody showed cytoplasmic fluorescence as early as four hr after infection with the maximum fluorescence at five days. No cross reactions were observed between the neonatal calf diarrhea virus and reovirus type 1 or type 3 by the fluorescent antibody technique. Plaques were small and were not produced consistently. The optimal adsorption time was one to two hr. The maximum titer was reached at 18 hr, with the cell-associated titer remaining higher than the cell-free titer until that time. An interferon was produced by cultures infected with either ultraviolet-inactivated or untreated virus.     

抗BVDV卵黄抗体的制备

采用牛病毒性腹泻病毒（BVDV）免疫产蛋母鸡,然后用水稀释法成功地从卵黄中分离出抗BVDV免疫球蛋白（抗-BVDV IgY）。建立起测定鸡蛋中特异性抗BVDV活性的间接ELISA方法,并采用此方法检测每次免疫后第10天的抗体滴度。结果表明,蛋鸡在首次免疫后第10天,卵黄中可以检测到抗-BVDV IgY;5次免疫后,抗体效价达到1：6400,半年后仍能维持在该水平。     

抗BVDV卵黄抗体的制备

采用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)免疫产蛋母鸡,然后用水稀释法成功地从卵黄中分离出抗BVDV免疫球蛋白(抗-BVDV IgY)。建立起测定鸡蛋中特异性抗BVDV活性的间接ELISA方法,并采用此方法检测每次免疫后第10天的抗体滴度。结果表明,蛋鸡在首次免疫后第10天,卵黄中可以检测到抗-BVDV IgY;5次免疫后,抗体效价达到1:6400,半年后仍能维持在该水平。     

牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测

采用Svanova公司牛病毒性腹泻病毒血清抗体ELISA抗体检测试剂盒对采自新疆10个不同地区的875份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测,共检出抗体阳性血清759份,最高阳性率为100％,最低为55.0％,平均为86.7％.检测结果表明该病已在新疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律.根据ELISA检测结果,从...     

The Properties and Classification of Bovine Viral Diarrhea Virus

Examination of the C24V (Oregon) and MAC A (Ontario) strains of bovine viral diarrhea viruses have shown them to be ribonucleic acid containing viruses, with essential lipid and having compound helical symmetry with the diameter of the helix being in the neighbourhood of 180 A. Because of these properties it is suggested that the virus should be considered a member of the Myxovirus group. Hog cholera virus is related to bovine viral diarrhea virus by means of a “soluble” antigen, and also possesses essential lipid. It is therefore suggested that hog cholera virus represents still another veterinary myxovirus.     

牛病毒性腹泻病毒致病机理研究进展

牛病毒性腹泻病毒（BVDV）是危害养牛业的重要病原之一。BVDV感染能够引起广泛的临床症状，包括牛病毒性腹泻、粘膜病、持续感染与免疫耐受、繁殖障碍、血小板减少与出血综合征等，其相应的致病机理也非常复杂。持续感染是妊娠母畜在怀孕早期通过子宫内感染非致细胞病变（NCP)型BVDV引起的，是BVDV在自然环境中维持存在的一种重要形式。当持续感染动物再次感染抗原性相似或同源的致细胞病变（CP）型病毒时就会发生粘膜病。本文将粘膜病发生过程中CP型病毒的来源机制概括为五点：①外源细胞序列的插入；②病毒基因的重排和拷贝；③外源细胞序列插入同时伴有病毒基因的复制；④缺陷干扰粒子；⑤点突变。BVDV感染导致奶牛繁殖力下降的机制可能有两条：一是造成卵母细胞的质量下降，二是使性腺类固醇激素生成机制受到破坏，导致血浆中雌二醇、黄体酮等激素紊乱。血小板减少和出血性综合征是BVDV感染引起的又一重要临床症状，其致病机理主要有两种：①BVDV进入到外周循环，使外周循环中血小板受损程度增加，病理检查表现为血小板体积平均值较正常有明显增大；②BVDV感染造成骨髓生成血小板的能力下降，病理检查表现为血小板的体积平均值较正常减少。     

牛病毒性腹泻病毒及其进化研究进展

牛病毒性腹泻病毒(Boyine viral diarrhoea virus,BVDV)在我国发现有20多年,而在世界范围来讲已有近100年的历史.由于牛病毒性腹泻病毒造成奶牛生产性能下降、繁殖障碍、持续感染等,是导致集约化奶牛场严重亏损的重要原因.且牛病毒性腹泻导致的黏膜病致死率几乎100%,已经严重阻碍养牛业的发展,但目前我国对牛病毒性腹泻还没有好的防控措施.文章对牛病毒性腹泻的发生历史总结,便于在牛病毒性腹泻病毒的诊断和预防中参考.     

牛病毒性腹泻病毒及其进化研究进展

牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhoea virus，BVDV）在我国发现有20多年，而在世界范珏来讲已有近100年的历史。由于牛病毒性腹泻病毒造成奶牛生产性能下降、繁殖障碍、持续感染等，是导劐集约化奶牛场严重亏损的重要原因。且牛病毒性腹泻导致的黏膜病致死率几乎1000A，已经严重阻碍养斗业的发展，但目前我国对牛病毒性腹泻还没有好的防控措施。文章对牛病毒性腹泻的发生历史总结，便于石牛病毒性腹泻病毒的诊断和预防中参考。     

牛传染性鼻气管炎弱毒与牛病毒性腹泻弱毒抗原免疫干扰的研究

本试验使用3~6月龄健康易感牛9头(牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原、抗体均阴性),共分3组,每组3头犊牛。第1组首免肌肉注射IBRV-LNM弱毒疫苗株种毒,接种1周后,每头牛接种BVDV-SM弱毒疫苗株;第2组只接种BVDV-SM弱毒疫苗株种毒,接种时间同第1组;第3组为对照组,接种MDBK细胞培养液。接种BVDV-SM疫苗毒后每周采血至疫苗毒接种后28 d,测定接种后BVDV抗体效价,并采用BVDV-JL检验用强毒进行攻毒试验。结果表明,第1组与第2组试验动物血清中牛病毒性腹泻病毒抗体水平无明显差异,能够抵抗BVDV-JL强毒攻击达到免疫保护的效果,说明牛传染性鼻气管炎病毒IBRV-LNM弱毒疫苗株接种后在牛体内对牛病毒性腹泻病毒BVDV-SM疫苗毒不产生免疫干扰作用。     

致犊牛腹泻大肠杆菌对小鼠致病性及药物敏感性试验

为探讨近年来新疆地区犊牛腹泻的发病原因,于2009年4月至2010年8月,对新疆地区部分集约化奶牛场110头严重腹泻犊牛及11头病死犊牛进行病料采集,从121份病样中分离出102株大肠杆菌;分离菌株进行小鼠腹腔注射均能造成小鼠发病,LD50从3.7768×108到1.888×107之间;所分离的大肠杆菌对氨苄西林、复方新诺明、庆大霉素、氯霉素、环丙沙星敏感性分别为22.5%、30.4%、40.2%、41.2%、46.1%,对阿米卡星、头孢噻吩、头孢孟多、头孢他啶、头孢西叮的敏感性分别为70.6%、75.5%、84.3%、98%、100.0%。表明新疆地区近两年来犊牛腹泻主要是由致病性大肠杆菌引起,其对头孢西叮敏感性较高,对其它抗生素均率产生不同程度的耐药性。     

致犊牛腹泻大肠杆菌对小鼠致病性及药物敏感性试验

为探讨近年来新疆地区犊牛腹泻的发病原因,于2009年4月至2010年8月,对新疆地区部分集约化奶牛场110头严重腹泻犊牛及11头病死犊牛进行病料采集,从121份病样中分离出102株大肠杆菌;分离菌株进行小鼠腹腔注射均能造成小鼠发病,LD50从3.7768×108到1.888×107之间;所分离的大肠杆菌对氨苄西林、复方...     

1株牛病毒性腹泻病毒分离毒株的基因组特征

旨在从宁夏某奶牛群持续感染牛分离牛源牛病毒性腹泻病毒（BVDV）,并解析其基因组特征,为研究我国不同地区BVDV分离株遗传演化规律提供理论依据。利用BVDV抗原检测试剂盒检测宁夏回族自治区银川市某示范区的240头高产奶牛间隔两周的双份抗凝血,筛选持续感染牛,分离血液淋巴细胞制备裂解液接种牛肾细胞（MDBK）,分离鉴定获得BVDV株,克隆测序获得全基因组序列,比较分析其遗传演化关系。从该示范区高产奶牛筛选获得2头持续感染牛,分离获得1株非致细胞病变型BVDV,命名为NX2019/01。测序获得基因组全序列（12 107 nt）,其中ORF长11 703 nt,编码3 898个氨基酸。在基因组水平,NX2019/01株与我国SD-15、ZM-95、XC、LN-1等1m亚型分离株相似性较高（92.17%~93.84%）,但E^rns、E1以及E2基因存在较大差异。示范区同群牛急性感染BVDV时,毒株E2蛋白N端编码区核苷酸突变可导致第9位或第67位氨基酸变异。重组分析表明,NX2019/01株E2基因179—288位核苷酸区段以及ZM-95株E1基因168位—E2基因332位核苷酸区段存在相似的重组信号,可能由主要亲本SD-15株与次要亲本LN-1株重组形成,表明NX2019/01株、ZM-95株在演化进程中与SD-15株以及LN-1株或早期流行的高度相似毒株存在密切关联。本研究从持续感染高产奶牛分离获得了牛源BVDV-1m亚型毒株,在基因组水平厘清了BVDV-1m亚型毒株的进化关系,并首次发现同亚型BVDV毒株基因同源重组,为进一步研究BVDV在我国的演化规律奠定了基础。     

牛病毒性腹泻病毒检测技术研究进展

牛病毒性腹泻(BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)所致牛的一种接触性传染病,呈世界性流行,该病主要表现为腹泻、急慢性黏膜感染、繁殖障碍等,对畜牧业危害严重,是国际贸易中动物检疫的重要疫病之一。快速准确的检测手段,有利于该传染病的早期发现和及时控制。目前,用于检测牛病毒性腹泻病毒的方法很多,论文对近年来国内外应用的等温核酸扩增技术(IAT)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、指数富集配体系统进化技术(SELEX)、多重PCR技术、多重连接探针扩增技术(MLPA)、RT-PCR抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光试验(IFA)等进行简要介绍,为我国动物检疫工作提供参考。     

BPIV-3和BVDV双重RT-PCR快速检测方法的建立

参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)全基因序列,分别针对BPIV3特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物,经优化反应条件建立了快速鉴别BPIV-3和BVDV的双重RT-PCR诊断方法。最佳扩增条件为94℃30s,56.2℃30s,72℃1min,循环30次;72℃延伸5min,16℃10min;BVDV引物浓度为1.0μmol/L,BPIV-3引物浓度为0.5μmol/L。采用该方法检测BPIV-3和BVDV参考病毒株,能同时扩增出预期为425bp和294bp大小的特异性片段,而扩增牛传染性鼻气管炎病毒、牛合胞体病毒、猪瘟病毒以及牛支原体、致病性大肠埃希菌、多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和鼠伤寒沙门菌等均呈阴性反应。对参考病毒株进行梯度稀释检测,结果证明该方法检测BPIV-3的灵敏度可达10-3 TCID50/0.1mL,而BVDV的灵敏度达102 TCID50/0.1mL。