感染新型鸭呼肠孤病毒的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳方法的建立

为建立感染新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳(2-DE)方法。本研究通过对人工感染NDRV的雏番鸭肝脏病变的观察,对肝脏蛋白质提取裂解液的配方、样品上样量、一向等电聚焦(IEF)参数等条件的对比和优化,建立了有效的番鸭肝脏2-DE方法。结果表明：采用攻毒后病变最典型的第5天的番鸭肝脏作为研究样品;采用研磨-超声-裂解液（7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4% CHAPS、65 mmol/L DTT、40 mmol/L Tris-base、0.5% IPG buffer）法提取肝脏蛋白质,结合2D clean-up kit以及去拖尾DeStreak试剂纯化蛋白,按1100 μg上样,设置IEF参数为：50 V 12 h、200 V 1.5 h、500 V 1 h、1000 V 1 h、8000 V 3 h、8000 V 60000 V h、500 V维持,采用胶体考马斯亮蓝染色,能获得分辨率高、重复性好的2-DE图谱。应用建立的2-DE方法和PDQest 8.0分析软件,发现26个与正常番鸭肝脏蛋白表达水平超过3倍的差异蛋白点。该方法的建立为进一步寻找NDRV感染宿主组织相关蛋白以及水禽呼肠孤病毒差异蛋白质组学研究提供了技术支持。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒（DHV-Ⅰ）在鸡胚中的增殖及感染力的测定

摘要：将Ⅰ型鸭肝炎病毒（DHV-Ⅰ）接种9日龄SPF鸡胚尿囊腔（0.2 mL/胚）进行增殖,制备鸡胚成纤维细胞（CEF）,并分别运用CELD50法和TCID50法测定DHV的感染力。结果表明,DHV-Ⅰ在SPF鸡胚内成功增殖,致死鸡胚具有典型临床症状和体表特征,所增殖病毒的CELD50和TCID50分别为10-5.6/0.2 mL和10-5.12/0.1 mL。     

鸡传染性支气管炎病毒HN104株的鉴定及S1基因的分子特征

2010年4月从河南省某疑似患鸡传染性支气管炎鸡场中分离到一株病毒。通过SPF鸡胚致侏儒实验,鸡红细胞凝集试验,干扰新城疫病毒增殖试验和RT-PCR试验确认该病毒为一变异的鸡传染性支气管炎病毒。该病毒尿囊液凝集鸡红细胞的HA价为0,经胰酶处理后为27;EID50（鸡胚半数感染量）为10－5.5/0.1 mL;能够显著干扰鸡新城疫病毒La Sota株在鸡胚中的增殖;动物回归试验结果显示该病毒可致SPF雏鸡出现肾脏肿大,呈花斑肾。其S1基因全长为1617 bp,经序列分析发现与鸡传染性支气管炎疫苗Massachusetts株、T株、4/91株亲缘关系较远低于78%。     

鸡传染性法氏囊病病毒的分离鉴定与培养特性研究

为研究鸡传染性法氏囊病病毒在不同宿主上的培养特性,从河南省某疑似感染鸡传染性法氏囊病病毒的鸡场采集病料,通过琼脂免疫扩散试验初步筛选出IBDV毒株,并将毒株回归易感鸡,在SPF鸡胚及DF1细胞上培养。结果显示：培养出的病毒作为抗原与标准阳性血清之间均出现阳性沉淀线;回归SPF鸡试验显示发病率达100%,死亡达60%,病死鸡只出现法氏囊肿大、出血甚至出现紫葡萄样;该毒株能引起鸡胚CAM增厚、胚体出血,引起DF1细胞变圆脱落;ELD50与TCID50分别为10-4.6/0.1 mL、10-5.5/0.1 mL。试验证实IBDV分离株,属于超强毒株,该毒株可以在鸡胚和DF1细胞上适应增殖,将其命名为HN12号分离株。     

8个鸭群体MC1R基因A399G位点变异分析

为了检测鸭MC1R基因的多态性,并分析其多态性在家鸭、白番鸭、半番鸭各品种中的分布情况,以8个鸭品种/群体共769只鸭为研究对象,采用PCR产物直接测序的方法寻找MC1R基因编码区可能存在的SNP突变位点。结果发现,MC1R基因编码区399 bp处发生了A→G的碱基突变,经分析为限制性内切酶Hin61的识别位点。针对该酶切位点,利用PCR-RFLP方法鉴定A399G位点的基因多态性。结果显示：（1）该位点对羽色未造成影响。半番鸭中,该位点在黑羽半番鸭中表现一种基因型AG,在白羽半番鸭中虽存在AG和GG 2种基因型,但GG频率相当低,只有0.019,差异不显著(P＞0.05);半番鸭母本中,该位点在羽色极端且亲缘关系相近的莆田黑鸭和小型白羽半番鸭母本中只呈现单一基因型GG。（2）该位点对品种产生极显著影响。该位点基因型在白番鸭、家鸭内均呈单态分布,其中白番鸭的基因型全为AA,而家鸭的基因型全为GG;该位点在半番鸭群体中呈低度多态,基因型AG占绝对优势(0.982),GG几乎为零(0.018)。经卡方独立性检验,MC1R基因A399G突变位点各基因型分布在家鸭、番鸭、半番鸭各品种中的分布差异极显著(P＜0.01),这从本质上有效鉴定和区分家鸭、白番鸭和半番鸭三类鸭群体,并为番鸭保种提供了新的方法。     

鸡传染性喉气管炎和鸡痘弱毒在鸡胚皮肤细胞上同时增殖的研究

根据喉、痘病毒易在上皮细胞中增殖这一共同特点,分别进行鸡传染性喉气管炎、鸡痘弱毒适应鸡胚皮肤细胞(CES)和对CES致细胞病变效应(CPE)试验.掌握其规律之后,选择病变快、含毒量高的第三代喉气管炎细胞毒(LTVCES_3)及第三代鸡痘细胞毒(APVCES_3)以1:1的比例同时接种CES细胞,并分别用鸡胚和细胞对喉、痘鸡胚毒、CES细胞毒及混合细胞毒进行毒价测定.喉、痘细胞毒的毒价平均高于同株鸡胚毒0.7—1个滴度,混合细胞毒毒价平均低于同株细胞毒0.25—0.3个滴度而高于鸡胚毒0.5—0.7个滴度,从而达到在同一细胞上同时增殖喉、痘病毒之目的,为研制喉、痘二联苗探索了新途径.     

中药鱼腥草注射液鸡胚接种抗新城疫病毒的研究

用鸡胚培养法和血凝试验,测定了鱼腥草对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分为4组,第1组接种病毒尿囊液与中药鱼腥草混合液,HA滴度0。第Ⅱ组接种新城疫病毒尿囊液与盐酸金刚烷胺混合液,HA滴度5 log₂。第Ⅲ组接种新城疫病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9log₂。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。试验结果表明：鱼腥草对鸡胚无毒性作用;鱼腥草与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

鸡胚接种鱼腥草注射液抗新城疫病毒的研究

为了研究中药鱼腥草是否能抑制新城疫病毒的增殖,用鸡胚培养法和血凝试验,测定了鱼腥草对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分为4组,第Ⅳ组接种病毒尿囊液与中药鱼腥草混合液,HA滴度0。第Ⅳ组接种新城疫病毒尿囊液与盐酸金刚烷胺混合液,HA滴度5 log2。第Ⅳ组接种新城疫病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9 log2。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。试验结果表明,鱼腥草对鸡胚无毒性作用;鱼腥草与病毒同时接种能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

杂交鸭养殖技术

<正>本文介绍的杂交鸭,是指以番鸭(又名麝香鸭、瘤头鸭、西洋鸭)为父本,以北京鸭、樱桃谷鸭为母本杂交而成的,具有抗病力强、肉嫩味美、营养丰富、活动量小、生长繁殖快等特点,5~6月龄体重能达3.5~4千克,最大个体体重可达5千克以上。杂交鸭既可圈养又可散养,规模养殖成本低、用工少、见效快,收入高,是农民致富的好门路。一、选种先将选好的父本、母本种雏鸭合群饲养。1只公鸭     

养殖户要高度重视雏鸭、鹅传染性法氏囊病及其综合防控

正许多养殖户认为鸭、鹅不会感染传染性法氏囊病,其实并非如此。雏鸭、鹅传染性法氏囊病是由接触鸡而感染的,主要发生于1月龄以内的雏鸭、鹅,发病急、传染快,6~10日可波及全群;防控不力又感染高毒株时,病死率可达60%~70%。近年来雏鸭、鹅发生此病趋多趋重,但养殖户重视不够,造成了很大损失,应予以注意。一、病原和流行病原是鸡传染性法氏囊病毒,有亚型多种,免疫时疫苗型号不对就会导致免疫失败。该病     

洞庭湖区H10亚型禽流感监测及其遗传进化分析

为了解洞庭湖区H10 亚型禽流感病毒的流行分布及遗传进化情况,为该地区H10 亚型禽流感的防控及该亚型病毒在禽流感病毒进化中所起的作用提供一些参考。在环洞庭湖地区活禽批发市场和水禽场上采集家禽和环境拭子,对其进行病原分离、鉴定和测序,应用Mega 5 软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制与分析。结果显示：在活禽批发市场上总共分离到11 株H10 亚型禽流感病毒,分离的H10 亚型禽流感阳性样品全来源于鸭拭子;在1 个鸭场分离到2 株H10 亚型禽流感病毒;其中2株分离毒株序列分析显示其HA蛋白的裂解位点为PELMQGR/GLF,属于低致病性病毒,与以往在其他国家（蒙古、瑞典、荷兰、泰国、日本等）野鸟中分离的H10亚型病毒处于同一分支。     

三种鸭源细小病毒的抗原相关性研究

为了明确番鸭细小病毒(MPV F株)、番鸭源鹅细小病毒(MD-GPV PT株)和鸭短喙型鹅细小病毒(SBDS-GPV M15株)的抗原相关性,本研究应用微量中和试验(NT)和胶乳凝集抑制试验(LPAI)测定了三种病毒分别与同源和异源血清的中和抗体和LPAI抗体效价,分析三者之间的抗原相关性。结果显示：3种病毒与同源抗血清的中和效价和LPAI效价均明显高于异源血清;MPV与MD-GPV和SBDS-GPV之间的中和抗体效价R值分别为0.01和0.02,LPAI抗体效价R值分别为0.03和0.04;MD-GPV和SBDS-GPV的中和抗体和LPAI抗体效价R值均为0.35。表明MPV与GPV（包括MD-GPV和SBDS-GPV）之间的抗原相关性较低;MD-GPV与SBDS-GPV抗原相关性较高,为同一血清型的不同亚型。研究结果为有效防控不同鸭源细小病毒感染提供了理论依据。     

三株鸭肝炎病毒1型全基因序列分析

【研究目的】为分析三株1型鸭肝炎病毒（DHV）的遗传变异和进化关系;【方法】采用RT-PCR和5'-/3'-RACE.方法测定三株1型鸭肝炎病毒全基因序列;【结果】研究结果表明,不含poly（A）尾巴的3株病毒的基因组全长为7691~7700 nt,基因组均仅含一个长度为6750 nt的ORF,625~627 nt 5'端非翻译区和325~328 nt 3'端非翻译区(UTR)。将3株病毒株与GeneBank公布的其他DHV-1全基因序列及小RNA病毒科的其它属代表病毒株进行序列分析表明,聚蛋白均被分割成为12个蛋白,其中VP1的变异性最大,180~187位为高变区。3株病毒与DHV-1参考毒株核苷酸序列同源性在93.7%~98.8%,氨基酸序列同源性在96.9%~98.8%,DHV-1各株在小RNA科病毒多聚蛋白氨基酸序列进化树上形成一个独立的进化分支;【结论】DHVs-1病毒间核苷酸和氨基酸仍较保守,它们在进化中可将其归为小RNA病毒科的一个新属。     

牛病毒性腹泻/黏膜病病毒河北分离株的生物学特性

【目的】了解牛病毒性腹泻病毒河北分离株HB株的特性，阐明牛病毒性腹泻/黏膜病致病机理，更好的控制BVDV感染、流行提供理论依据特进行此项试验；【方法】用理化学及生物学方法对BVDV河北分离毒株HB的特性进行检测，与BVDV准毒株Oregon C24V株进行比较，分析了其理化性及生物学特性。电镜负染检查可见直径为40~60nm有突起的圆形或近圆形的病毒颗粒,病毒在蔗糖中的浮密度为1.13~1.14g/cm3。与牛病毒性腹泻－粘膜病病毒颗粒相似。毒力测定TCID50为10-4.5。理化学研究表明，该病毒对氯仿、乙醚、胰酶敏感；不耐酸、对碱具有较强的耐受性。牛病毒性腹泻/黏膜病病毒对56℃ 30min较敏感，56℃ 70min可使其完全灭活。血凝试验表明，该病毒对鸡、兔、猪和绵羊的红细胞均无血凝性；5-碘脱氧尿核苷(5，-IUDR)不能抑制病毒的增殖，核酸分型试验表明该病毒株基因组为RNA；病毒纯化后经SDS—PAGE电泳出现了5条主要结构蛋白带，与BVDV国际标准毒株Oregon C24V株结果一致；【结论】河北分离株HB株为牛病毒性腹泻病毒。     

鸭感染禽坦布苏病毒血清学的检测与分析

为了解中国鸭群感染禽坦布苏病毒流行病学的情况,采用建立的间接酶联免疫吸附试验（间接ELISA）对于2010年6月—2013年9月三年内采自福建、江西、浙江、广东、广西五省（区）发生产蛋异常鸭场的各品种开产种（蛋）鸭、后备种（蛋）鸭及肉鸭血样共6854份进行禽坦布苏病毒抗体的检测,并对结果进行了分析。结果表明：开产种（蛋）鸭、后备种（蛋）鸭及肉鸭中除肉用番鸭血清中未检出禽坦布苏病毒抗体外,其他品种鸭血清中禽坦布苏病毒抗体阳性率高低不一,揭示存在不同程度的禽坦布苏病毒感染,且感染谱扩大到肉鸭,为以上省（区）乃至中国鸭群需做好禽坦布苏病毒感染的预防提供了科学依据。     

河北省番茄黄化卷叶病毒的分子鉴定及序列分析

本研究旨在对河北省发生的番茄黄化卷叶病毒病的病原进行分子鉴定,并对其病原分子的变异和进化情况进行分析。根据已知的番茄黄化卷叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV）基因组序列设计特异引物进行PCR扩增,对获得的特异片段进行回收、克隆和测序,而后根据测定序列重新设计引物扩增病毒样品DNA-A的近全长序列,并进行同源性比较及分子系统进化分析。结果显示利用PA1-F/R引物从采集的4个病毒样品中均扩增得到大小约为645bp的特异片段,DNA-A全长序列测定和分析发现4个病毒样品的全长为2781-2782个核苷酸,共编码6个ORFs。基因组比较发现,4个样品DNA-A与山东、上海、浙江、安徽以及日本、澳大利亚报道的TYLCV的同源性最高,均达99.0%以上,并与美洲、非洲及欧洲报道的TYLCV同属一个大的分支。研究结果表明在河北省采集的4个病株样本均为感染了番茄黄化卷叶病毒所致,而且极有可能同属于TYLCV-Israel株系的分离物。     

Substitution mapping of QTLs for blast resistance with SSSLs in rice (Oryza sativa L.)

Rice blast, caused by fungal pathogen Magnaporthe grisea Barr., is one of the most devastating rice diseases worldwide. It has greatly affected the rice production and quality. Development of resistant cultivars is the most effective and economical way for controlling this disease in rice. In this study, 114 of the single-segment substitution lines (SSSLs) in rice were inoculated at seedling stage by 16 rice blast isolates. The substituted segments in the 114 SSSLs distributed on 12 chromosomes with coverage of 57.32% of rice genome. Fifteen of the SSSLs were different in blast resistance from the HJX74 recipient. The SSSL W23-7-6-5-2-2 showed 100% of resistance frequency. A total of 11 QTLs for blast resistance were detected on chromosomes 1, 2, 3, 6, 10, 11 and 12 in rice. They were mapped at chromosomal intervals of 2.2?C46.2?cM, of which 6 QTLs were mapped at less than 10.0?cM. Six of the 11 QTLs were first reported in this paper.     

甜菜碱对三黄鸡胚胎原代成纤维细胞生长和增殖的影响

【研究目的】研究了不同剂量甜菜碱对三黄鸡胚胎原代成纤维细胞微核和增殖的影响,在细胞水平上揭示甜菜碱对三黄鸡生长影响的机理,为甜菜碱在动物生产中的应用提供依据。【方法】体外分离培养三黄鸡胚胎成纤维细胞,在培养液中添加不同剂量甜菜碱,观察细胞生长及分裂。【结果】①在基础培养液（DMEM+15%NBS）中添加10mM,20mM甜菜碱对三黄鸡胚胎原代成纤维细胞微核率无显著影响;添加30mM,40mM,50mM甜菜碱显著提高三黄鸡胚胎原代成纤维细胞的微核率。②在基础培养液（DMEM+15%NBS）中添加10mM、20mM甜菜碱能促进三黄鸡胚胎原代成纤维细胞的生长和增殖,以在培养液中添加20mM甜菜碱时三黄鸡原代成纤维细胞增殖速度最快。添加50mM甜菜碱时抑制了三黄鸡胚胎原代成纤维细胞的生长和增殖。【结论】低剂量甜菜碱可促进三黄鸡胚胎原代成纤维细胞的生长和增殖,高剂量甜菜碱对细胞分裂构成危害。