改良CTAB法用于提取红麻成熟叶片高质量DNA的研究

红麻处于光合高峰期的成熟叶片中的次生物质含量很高,给DNA的提取造成很大的困难.CTAB法能有效去除多糖杂质,但普通CTAB法用于红麻的DNA提取效果很不理想,为使CTAB法能更好地用于红麻的DNA提取,我们对此方法进行了改进,通过前处理除去大部分的杂质,减小了后续操作的难度.为了验证前处理是否会损失DNA,研究了液氮研磨对材料细胞的破碎程度问题,还讨论了DNA提取中的其它一些相关问题.     

CTAB法提取红麻总DNA技术优化与ISSR和SRAP扩增效果

红麻基因组总DNA的提取纯度，关系到新型分子标记ISSR、SRAP的PCR扩增效果。经反复实验，对CTAB法提取红麻总DNA技术进行了改进，即采集足量的红麻嫩叶、提取时加入β-巯基乙醇、提取过程中使用2．5％CTAB、最后用预冷的无水乙醇沉淀DNA。OD260，OD2踯比值检测结果为平均1．824，而且DNA得率也较高，证明用此法提取的DNA能完全满足ISSR和SRAP分析的要求和获得较理想的效果．本文还讨论了高庸量DNA提取应注意的有关技术环节．     

CTAB法提取红麻总DNA技术优化与ISSR和SRAP扩增效果

红麻基因组总DNA的提取纯度,关系到新型分子标记ISSR、SRAP的PCR扩增效果。经反复实验,对CTAB法提取红麻总DNA技术进行了改进,即采集足量的红麻嫩叶、提取时加入β-巯基乙醇、提取过程中使用2.5%CTAB、最后用预冷的无水乙醇沉淀DNA。OD260/OD280比值检测结果为平均1.824,而且DNA得率也较高,证明用此法提取的DNA能完全满足ISSR和SRAP分析的要求和获得较理想的效果,本文还讨论了高质量DNA提取应注意的有关技术环节。     

玉米丝黑穗病菌DNA提取及UP-PCR反应体系建立

采用CTAB法、SDS法和尿素法,从玉米丝黑穗病菌液体培养物中提取基因组DNA,比较其提取效果。结果表明：改进的CTAB法可有效去除多酚、多糖和色素等杂质对DNA的污染,可获得高质量模板DNA。以此为模板进行UP-PCR(Universally Primed PCR)反应,对UP-PCR扩增反应中的一些重要参数进行了优化,建立适合于玉米丝黑穗菌的UP-PCR反应体系。     

咖啡叶片DNA提取方法的比较研究

以咖啡成熟叶片为材料,进行多种DNA提取方法比较研究,并通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测所提的DNA样品。结果表明,CTAB改良Ⅰ和CTAB改良Ⅱ均可用于咖啡叶片的DNA提取,尤其是CTAB改良Ⅱ法,提取的DNA产量较CTAB改良Ⅰ高,能满足后续分子生物学研究的要求。     

一种高质量的红毛丹基因组DNA提取方法

为了提取高质量的红毛丹基因组DNA，本研究以红毛丹叶片为试材，比较改良CTAB法、改良SDS法和试剂盒法对红毛丹叶片DNA的提取效果。结果表明：3种方法均可从红毛丹叶片中提取DNA，但由于改良CTAB法通过多次洗涤，并联合使用PVP和β-巯基乙醇处理，可有效去除红毛丹叶片中的多糖、多酚和蛋白质等物质，所获得的DNA纯度高且完整性较好，可用于SRAP-PCR等分子标记分析。此结果为后续分子生物学等相关研究奠定了基础。     

槟榔基因组DNA提取方法及RAPD分析体系的初步优化

采用CTAB法、改良CTAB法和高盐低pH法等3种不同的方法比较了槟榔基因组DNA提取的效果,其中改良CTAB法最优,提取的DNA质量高,DNA降解少,杂质含量少。通过对退火温度、DNA模板用量、TaqDNA聚合酶浓度等因素的优化实验,建立了槟榔RAPD分析体系,从PCR扩增程序和反应体系两个方面对槟榔RAPD分析体系进行了优化并验证了优化后的体系扩增谱带清晰、多态性强稳定性好。     

两种辣木DNA提取方法比较

以辣木嫩叶为材料,分别通过改良CTAB和试剂盒法提取7个品系辣木的总DNA,结果表明,试剂盒法提取的辣木DNA在琼脂糖凝胶电泳中条带清晰,DNA纯度高,完整性好,且操作简单,快速,满足分子标记中模板的需要,解决了辣木提取中蛋白杂质多的问题。因此,在辣木分子标记实验中,选择试剂盒法提取辣木总DNA是较为适宜的。     

小麦TILLING突变体检测中基因组DNA提取方法的优化

为了优化小麦高通量TILLING突变体扫描所需基因组DNA提取的方法,对利用SDS法、改良SDS法、CTAB法、改良CTAB法、AxyPrep DNA提取试剂盒、Qiagen DNeasy Plant Mini Kit试剂盒以及再生Qiagen硅胶柱方法提取的小麦基因组DNA进行了系统比较。结果表明,尽管7种方法所提取DNA的纯度及琼脂糖凝胶电泳检测结果均良好,但再生Qiagen硅胶柱方法、CTAB法和改良SDS法的DNA浓度显著高于其他方法。根据小麦细胞分裂素氧化酶基因1(TaCKX1)的DNA序列设计引物,以新鲜DNA样品用于PCR扩增大于1 000bp的片段时,后4种方法扩增效果优于前3种方法;DNA在-20℃下保存100d后重新进行PCR扩增时,则只有Qiagen试剂盒和再生Qiagen硅胶柱2种方法提取的DNA能扩增出大于1 000bp的片段。采用本实验室与新西兰坎特伯雷大学合作建立的再生硅胶柱与自配提取液提取小麦基因组DNA,既保证了DNA的高质量,又降低了使用试剂盒的成本,为小麦TILLING库的构建及其他相关试验提供了一种经济有效的DNA提取方法。     

一种适用于甜菜大规模快速提取DNA的方法

目前甜菜DNA提取通常使用CTAB法,大多数人仍采取研钵研磨的方法,但是在大批量提取DNA的时候,该方法耗时费力,提取效率较低。为了提高提取DNA的效率以适应大规模PCR的需求,我们创新了使用CTAB提取DNA的方法。该方法为先在离心管放入钢珠,然后把样品放入离心管中,放入到液氮中冷冻后直接使用震荡研磨机研磨后,再利用CTAB法进行提取,结果表明,该法点提取的DNA浓度和纯度均表现较好,并且将提取的DNA用于SSR引物的扩增,所得条带清晰,实验结果较好,可提高效率30%。     

大麻基因组DNA提取方法的比较与优化

以大麻的幼嫩叶片和风干叶片为材料,分别采用优化的SDS法、CTAB法、高盐低pH法和碱裂解法这4种不同方法提取基因组DNA,并比较提取质量和效率.结果表明,采用4种提取方法,大麻干样叶和鲜样叶均可获得清晰DNA目的条带,鲜样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为：SDS法＞CTAB法＞高盐低pH法＞碱裂解法,干样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为：高盐低pH法＞SDS法＞CTAB法＞碱裂解法,优化的SDS法适用于大麻鲜样叶基因组DNA提取,而大麻干样叶基因组DNA的提取选用优化的高盐低pH法最适宜.     

茧蜂标本基因组DNA提取及RAPD分析

对茧蜂标本总DNA的3种提取方法进行了比较试验。结果表明，改进的十六烷基三乙基溴化铵(Cetyllrirnethyl Ammonium Bromide，CTAB)法效果最好。在优化反应条件下用25个随机引物对蚜茧蜂亚科下的6种蚜茧蜂供试材料进行RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)技术分析，共得到159条带，各片段长度为200～3000bp。依据RAPD标记数据聚类分析，确定它们之间的亲缘关系，结果与传统分类的一致。     

大豆叶片DNA提取方法的比较研究

以大豆叶片为材料,对大豆基因组DNA提取方法中若干影响因子如提取液、提取液的浓度、蛋白质去除次数、提取步骤等进行比较研究,试图寻找大豆叶片DNA提取的最佳方法.结果表明,碱裂解法提取速度快,但提取的DNA量少,在SSR分析中,银染效果较CTAB、SDS提取液差,CTAB、SDS提取液均能得到较高质量的DNA;在1%～4%CTAB、SDS提取液浓度下,4%CTAB易使DNA产生降解,但不同浓度提取液提取DNA均可用于SSR分析;提取叶片重量在一定范围内时,随抽提次数减少,DNA浓度增加,纯度下降,但即使用氯仿/异戊醇抽提一次,也能够满足SSR分析的需要;不同提取步骤下,使用氯仿/异戊醇抽提2次后使DNA沉出后再溶解抽提2次和直接抽体4次相比,A260/A280值偏大,但A260/A230值较好.     

玉米基因组DNA的提取及SSR分析

采用改良的CTAB法,以玉米的黄化苗叶片为材料提取玉米基因组DNA,提取的DNA经0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明:此法具有快速、高效、DNA质量好和纯度高等优点。对所构建的选育高直链淀粉玉米群体的双亲进行了SSR-PCR检测,得到了清晰的多态性SSR标记,为玉米分子标记辅助育种打下了基础。     

不同方法从大豆不同组织中提取基因组DNA效果的比较

从大豆组织中获得高质量和足够产量的基因组DNA,是进行大豆分子生物学研究的基础.为进行大豆基因组的PCR,RAPD,SSR等分子生物学研究,分别以大豆种子和其叶片为实验材料,采用改良的SDS法和CTAB法对大豆基因组DNA进行了提取.对DNA的提取效果,采用紫外分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳分析及DNA的限制性内切酶图谱分析进行了综合比较.结果表明,在以叶片为材料时,SDS法和CTAB法的大豆基因组DNA的提取效果差别不大,SDS法稍好于CTAB法.在以大豆种子为材料时,SDS法的提取效果明显优于CTAB法,SDS法可从大豆种子中提取到能够充分满足各种分子操作的高质量和数量的大豆基因组DNA.     

玉米叶片DNA快速提取方法改进研究

分子生物学研究需要大量的DNA样品,DNA的快速提取是提高研究效率的关键。研究比较多种植物DNA的提取方法,对部分实验步骤做了修改,建立了适于玉米叶片DNA微量快速提取的新方法。该方法不仅操作步骤简单、速度快、省时间,而且可以确保提取的玉米基因组DNA有足够的浓度和纯度。利用此方法,在一般实验室条件下每人每天可以提取150～200个DNA样品,一个DNA样品可供50～60次PCR反应使用,DNA 质量可以确保一般的PCR扩增,适用于玉米遗传多样性、分子标记辅助选择、引物筛选和分子标记定位等多种研究目的。     

剑麻核酸的高效提取及应用

针对剑麻组织中多糖、多酚和次生物质含量高的特点,对其总RNA和基因组DNA提取进行研究。比较了改良SDS法、改良CTAB法提取总RNA和SDS法、CTAB法提取基因组DNA的效果,结果表明：改良CTAB法提取总RNA效果较佳,所得RNA OD260／OD280高于1．8,OD260／OD230大于2．0,而CTAB法提取基因组DNA纯度和完整性较好。基于RNA和DNA水平,分别对剑麻的苯丙氨酸解氨酶基因（PAL）RT—PCR和RAPD反应体系进行优化,均得到理想条带。此方法提取剑麻的核酸可运用于后续分子生物学研究,为其它材料核酸的分离提供参考依据。