不同解冻方法对奶牛冻精活力的影响

将 5头荷斯坦种公牛细管冻精在不同温度、不同时间下进行解冻 ,对解冻后的精液品质进行检测。结果表明 :解冻后顶体正常率、精子活率随解冻温度升高而升高 ,而畸形率随解冻温度升高而降低 (P<0 .0 1) ;高温(37℃ ,75℃ )下随着解冻时间延长 ,活率增高 (P<0 .0 5 ) ;低温 (5℃ )、室温 (15℃ )下解冻 ,活率与解冻时间长短没有明显关系 (P>0 .0 5 ) ;精子顶体正常率、畸形率、存活时间与解冻时间无显著关系。在实践中建议使用 75℃ 2～6 s解冻。     

细管冻精不同解冻方法对荷斯坦牛受胎效果的影响

为研究探讨奶牛细管冻精不同解冻方法对荷斯坦牛受胎效果的影响,试验对奶牛细管冻精经不同方法解冻后精子活力、有效存活时间以及输精后第一情期受胎率进行了研究,结果表明:(1)在5℃和15℃解冻时精子活率低于0.35,差异不显著(P>0.05);90℃解冻后活率显著低于40℃、75℃组(P<0.05),其中75℃解冻3 s精子的活率最高,解冻效果最好;在40℃解冻20 s效果较好.(2)在40℃和75℃解冻后,精子存活时间随解冻温度升高而缩短,其中40℃解冻后精子有效存活时间较75℃差异极显著(P<0.01).(3)冻精采用75℃3 s解冻后输精较40℃解冻20 s第一情期受胎率高5.45%,差异不显著(P>0.05).     

不同解冻方法对奶牛细管冻精活力的影响

研究探讨了不同解冻方法对0.25 mL奶牛细管冻精解冻后的影响,细管冻精分别在5,15,40,75,90℃下不同时间（1～120 s）进行解冻操作,通过评定精子冻后活率、顶体完整率、尾膜完整率,筛选出最佳的奶牛细管冻精的解冻方法。结果表明：（1）奶牛细管冻精采用75℃解冻3 s,精子的活率最高,解冻效果最好;其次在接近体温40℃解冻20 s,效果也较好;在低温5℃和室温15℃解冻,精子活率低于0.3;在90℃高温解冻条件下不稳定,不适合生产使用;（2）90℃解冻精子的顶体完整率、尾膜完整率明显低于40℃和75℃,差异显著（P＜0.05）,但是精子畸形率却高于40℃与75℃的处理组（P＜0.05）,而后两者间差异不显著（P＞0.05）;（3）不同解冻温度解冻后精子在37℃时保持有效存活时间存在较大差异,表现为：40℃＞75℃＞90℃。因此,在生产实践中对奶牛细管冻精进行解冻时,可根据具体情况选用适合的解冻方法。若解冻后立即输精的,建议采用75℃下3 s解冻;解冻后不能立即输精的,为了使精子在较长时间内保持活力,宜采用40℃下20 s解冻。     

山羊精液冷冻保存技术研究

[目的]探索山羊精液的冷冻方法。[方法]以甘油为冷冻保护剂,采用细管法冷冻保存山羊精液,探讨甘油浓度和添加时间、冻结方法和解冻温度对山羊精液冷冻效果的影响。[结果]在稀释液中添加6%和7%甘油的处理组中,冻后精子活率与复苏率均显著高于添加3%、5%甘油的处理组。配液时添加6%甘油的处理组中冻后精子活率与复苏率均显著低于在4℃平衡后添加的处理组。把平衡的山羊精液分别在离液氮面3 cm处熏蒸9 min和-80℃冰箱中冻结9 min,前者的精子复苏率显著低于后者。在解冻温度分别为40、45和50℃的处理组中精子冻后活率与复苏率显著高于解冻温度为55和60℃的处理组,说明解冻温度以40～50℃为宜。[结论]在山羊精液冷冻保存中,甘油的最佳添加时间为4℃平衡后冻结前。     

解冻温度对大额牛(Bos frontalis)精子活率及形态的影响

分别用32、35、38、41和44 ℃水浴解冻大额牛细管冻精,解冻后在常温(平均温度18.06±1.50 ℃,相对湿度46.64±4.52 %)下保存40 h,分别在0、6、12、18、24、30、36、38、39和40 h取样在显微镜下观察记录精子活率和活力;并在解冻后0、6、12、18和24 h用姬姆萨染色,在显微镜下观察记录精子形态,统计分析5个时段的精子畸形率.研究结果:①35 ℃解冻的精子复苏率为68.80 %,极显著高于44 ℃解冻的54.2 %(P<0.01),但与其它3个解冻温度比较差异不显著(P>0.05).②以38～44 ℃解冻的精子存活时间在38～39 h之间,以32 ℃解冻的存活时间最短,仅为36 h.④解冻后0 h的精子活率在42.50 %～50.00 %之间,不同解冻温度间差异不显著(P>0.05);保存6、12和18 h时,分别以35、38和41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后,各解冻温度间差异不显著P>0.05).④解冻后0 h的精子活力以35 ℃极显著高于44 ℃(P<0.01);保存6 h以32～41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存18 h,以32和41 ℃高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后各解冻温度间差异不显著(P>0.05).⑤用41和44 ℃解冻的总精子畸形率极显著高于38 ℃(P<0.01),显著高于35 ℃(P<0.05),32、35和38 ℃间及32、41和44 ℃间差异不显著(P>0.05),用35和38 ℃解冻对精子形态损伤较小.研究表明:解冻温度越高大额牛冻精的精子活率和活力降低速度越快,精子畸形率也高,且解冻温度对精子头部和尾部形态的影响最大;大额牛细管冻精宜用38±3 ℃水浴10s解冻,解冻后在18 ℃以下常温下保存6h对其精子活力等影响不大.     

冷冻稀释液渗透压、抗冻剂和平衡时间对鸡颗粒冻精冻后活率的影响

4个不同渗透压水平(280、320、360、400 mOsm)的鸡精冷冻稀释液,以甘油(GL)、二甲基亚砜(DMSO)和N,N二甲基乙酰胺(DMA)分别作为抗冻剂进行了冷冻试验.结果表明,添加8%甘油、4%DMSO和11%DMA的冷冻稀释液,4个不同渗透压间冻后精子活率均有显著差异(P<0.05),而且精子活率随冷冻稀释液渗透压的升高而升高;添加5%和10%甘油的冷冻稀释液,渗透压对解冻精子活率影响不显著;在400 mOsm渗透压条件下,8%甘油组冷冻后精子活率高于其他抗冻剂组;3种抗冻剂4个渗透压水平冷冻,平衡时间长短(30 min和90 min)对解冻后精子活率没有影响.     

稀释液·清洁剂·冷冻程序对猪精液冷冻效果的影响

探讨了稀释液、清洁剂及冷冻程序对猪精液冷冻保存效果的影响。结果显示:①稀释液Ⅳ保存鲜精,精子活率明显低于其他组(P<0.05);但其作为冻精的解冻稀释液时,效果最佳(P<0.05),说明猪精液冷冻保存时可采用第Ⅰ～Ⅲ组稀释液,而解冻时采用第Ⅳ组较佳。②稀释液中于不同阶段添加SDS(Sodiumlaurylsulfate,十二烷基硫酸钠)或OEP(OrvusESPaste,清洁剂)均能显著提高冷冻精子活率(P<0.05),SDS与OEP对冻精活率的影响无显著差异(P>0.05)。③精液冷冻程序采用-70℃、液氮熏蒸与直接液氮熏蒸在对解冻后冻精精子活率上无显著差异(P>0.05)。添加咖啡因能有效提高冻精的解冻后活率。     

保存温度对奶牛细管冻精解冻后有效活力的影响

为探讨0.25 mL奶牛细管冻精解冻后的最佳保存环境和适宜的输精时段,本试验对奶牛细管冻精40℃下20 s解冻后在0℃～4℃,14℃～16℃,25℃～27℃下分别保存2,4,6,8,10h的活力进行了测定.结果表明:在本次实验中,奶牛细管冻精解冻后在0℃～4 ℃和14℃～ 16℃保存到10h精子活力0.434±0.0167和0.423±0.0196与初解冻精子活力(0.441±0.030)差异不显著(P＞0.05);在25℃～27℃随保存时间延长精子活力呈下降趋势,保存6h精子活力和初解冻相比差异显著(P＜0.05),保存8,10h差异极显著(P＜0.01).从而得出,奶牛细管冻精解冻后在0℃～4℃和14℃～16℃保存10h以内,精子活力仍然维持在一个较高水平,符合输精要求,在此温度和时间范围内进行长距离携带,对精液质量影响小,可以达到预期的输精效果;环境温度在25℃左右时,冻精解冻后宜于6h以内进行输精.     

猪精液冷冻与常温保存技术的研究

为研究冷冻保存和常温((17±0.5)℃)保存后猪精子活率、活力和顶体完整率,比较了猪精液冷冻稀释液中2种甘油含量细管法的快速冷冻效果,以及不同解冻温度对冷冻精液的影响,采用细胞计数法、FDA-PI双重染色法与Giemsa染色方法检测精子的活率、活力和顶体完整率。结果显示:3%(体积分数,下同)甘油冷冻解冻后精液的活率、活力(38.54%、52.24%)显著(P<0.05)高于2%甘油组(15.63%、28.22%),但3%甘油组顶体完整率(11.55%)显著(P<0.05)低于2%甘油组(21.71%)。38℃水浴解冻后的精子在39℃培养箱中4 h内活率高于0.3,而50℃水浴解冻后1 h后的活率低于0.3。精液稀释液Anderohep和BTS在常温((17±0.5)℃)保存新鲜猪精子的活率与顶体完整率上效果相似,保存3 d内精子活率达0.6以上,保存6 d内精子活率为0.3以上。结果表明,使用3%甘油冷冻保存及2种常温保存稀释液均可以较好地保存精子。     

不同解冻温度对精子活力的影响

温度是精子最敏感的外界因素之一。人们的注意力多集中在稀释液和冷冻方法的研究,对冷冻精液的解冻方法和技术的研究不足。但实践证明,牛精液冷冻效果好坏与解冻温度有很大关系。长期以来,人们沿用冷冻精液的解冻温度38～40℃解冻冷冻精液。为此,可以通过本试验了解不同解冻温度对牛冷冻精子复苏的影响,找出适宜牛细管冷冻精液的最佳解冻温度。     

猪精液0.5 ml细管快速冷冻和解冻方法的优化

 【目的】优化冷冻-解冻方法,提高0.5 ml细管快速冷冻保存猪精液的质量。【方法】冷冻方法：分别将细管水平置于液氮面上方3、5、7、9和11 cm处,每一水平位置细管分别熏蒸3、5、10、15和20 min后投入液氮保存,37℃×30 s水浴解冻,确定最优冷冻方法;在选择最优冷冻方法的基础上,分别采用37℃×30s(对照组)、42℃×25 s、47℃×20 s、52℃×15 s、57℃×10 s和62℃×5 s共6种方法水浴解冻,确定最佳解冻方法。【结果】采用3 cm×10 min冷冻方法,解冻0、8 h精液中精子活率、质膜完整率和顶体完整率均最高。采用相对“高温短时”解冻,精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位均较高,同时丙二醛浓度降低;57℃×10 s和62℃×5 s解冻的精子各项指标无显著差异（P＞0.05）,但前4项指标显著高于对照组（P＜0.05）,丙二醛浓度显著降低（P＜0.05）。【结论】优化猪精液0.5 ml细管快速冷冻的冷冻和解冻方法可以显著提高解冻质量,采用3 cm×10 min冷冻、57℃×10 s或62℃×5 s解冻方法效果最佳。     

不同温度对瓶装公猪精液品质影响的探讨

以杜洛克公猪塑料瓶装精液为试验材料,研究了25、28、30、32℃共4个不同温度对公猪精液的影响,结果表明:在不同温度的影响下,精液的色泽没有明显的变化;猪精液在温度达到25℃和28℃时的气味较浓,明显散发出腥味,猪精液外观品质性状表现较好;当温度>25℃时,精子密度降低、畸形率逐渐增高、活率降低。各温度处理间的精子活率变化差异均极显著(P<0.01),当温度达到30℃时,精子活率降至7级以下,且活率下降很快。25℃时精液的各项指标表现最好。     

小尾寒羊冷冻精液制作保存技术研究

在制作小尾寒羊冻精颗粒时,我们对其冷冻稀释液和甘油浓度进行了研究。结果表明, 2号稀释液效果最好(P<0.05),甘油浓度为6 %时的冷冻效果最佳(P<0.01);在40～50 ℃解冻后,其活力可达0.5以上。     

波尔山羊个体精子抗冻性研究

为了加速贵州省地方山羊品种改良,2000年9月试验采用常规的精液冷冻解冻方法,通过鲜精活力、畸形率、冻精活力、解冻后4 h存活指数、顶体完整率、谷草转氨酶(GOT)释放量等指标研究了3只波尔山羊精子的抗冻性,结果3只试验公羊精子抗冻性存在明显差异,968号公羊生存指数显著高于2022和098号(P<0.05),098号公羊谷草转氨酶释放量显著低于2022和968号(P<0.05),但其鲜精品质全部达到常规制作冻精的要求,配种试验,65.77 %(146/222)的受胎率也验证了3只公羊适宜制作冻精。     

玻璃化法超低温保存龙眼胚性愈伤组织的初步探讨

采用玻璃化法对不同基因型的龙眼胚性愈伤组织超低温保存进行了初步探讨.将保存一定时间的胚性愈伤组织于常温下用60%玻璃化溶液(2PVS2)装载30 m in,再于0℃下用PVS2溶液平衡60 m in;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存;48 h后化冻.结果表明,具有原胚分化的胚性愈伤组织保存后的存活率明显高于普通胚性愈伤组织;40℃温水浴、25℃左右室温和自来水冲洗等3种不同的化冻方式对龙眼胚性愈伤组织玻璃化超低温保存后的存活率具有同样的效果.     

猪精液冷冻方法试验

试验表明,初冻温度是影响猪精液冷冻效果的重要因素。冻前及冷冻过程中,不同温度下制作的冻精活率差异极显著(P<0.01)。精液降至8℃、采用-70～-90℃的初冻温度,冷冻效果最好,不同剂型和剂量的冷冻效果差异不显著(P>0.05),本试验,30毫升块状和15毫升塑料安瓿冷冻后精子活率达0.39～0.40,复苏率达57％。     

冻精解冻温度、离心速度及精卵共培养时间对延边黄牛卵母细胞体外受精的影响

进行延边黄牛冻精解冻温度、离心速度及精卵共培养时间等因素对延边黄牛体外受精效果影响的研究,旨在找出适用于延边黄牛体外受精的技术体系,为延边黄牛体外胚胎的产业化生产奠定基础．结果表明,在39℃下解冻精子,其顶体反应率和受精率分别为85．47％和75．85％,高于37,38和40℃等处理组,差异显著（P〈0.05）;采用1500r／min离心速度对精子进行离心处理,其顶体反应率和受精率分别为82．47％和72．15％,高于900和1800r／min处理组,但差异不显著（P〉0．05）;精卵共培养24h时卵母细胞受精率为75．33％,高于6和12h组,但差异不显著（P〉0．05）．