玻璃化法超低温保存荔枝胚性愈伤组织及其植株再生

采用玻璃化法对荔枝胚性愈伤组织超低温保存及植株再生进行了初步探讨.将继代保存15 d的荔枝胚性愈伤组织转接到预培养基[MS+50 mL.L-1二甲基亚砜(DMSO)+1 mg.L-12,4-D+20 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂糖]中,在5℃低温下预培养.将预培养后的愈伤组织于常温下用体积分数为60%玻璃化溶液(2PVS2)装载20 min,再于0℃下用PVS2溶液平衡40 min;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存.1周后取出,于40℃温水浴中化冻,弃PVS2,用1.2 mol.L-1蔗糖液+MS基本培养基的洗涤液洗涤3次,再接种到新鲜的培养基中恢复培养,恢复培养后的胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生.     

高山红景天愈伤组织的玻璃化法保存及植株再生

采用玻璃化法对高山红景天的愈伤组织进行了超低温保存研究.高山红景天愈伤组织在8%蔗糖中暗培养5 d后,先用25℃的60%玻璃化保护剂PVS2预处理20 min,转至100% PVS2于-20℃乙醇浴中处理2 h后,投入液氮进行保存,48 h后使用40℃水浴快速化冻.冻存后的愈伤组织用液体培养基MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+40%蔗糖洗涤3次,再转入MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.5 mg/L固体培养基中在22℃条件下进行暗培养,2周后转入光照培养（光照强度800 lx）. 6周后观察到高山红景天愈伤组织呈鲜绿色,长势较为旺盛,存活率可达到78.24%.冻存后的愈伤组织可诱导成苗.      

枣子叶再生植株研究

以枣树‘雄性不育3号’未成熟胚的子叶为材料,建立了枣子叶再生植株体系。子叶愈伤诱导培养基为MS+蔗糖30 g/L+琼脂3.3 g/L,愈伤诱导率达到40%。从愈伤组织诱导不定芽的培养基为MS+蔗糖30 g/L+琼脂3.3 g/L+TDZ 1.5 mg/L,不定芽发生率为88.9%,不定芽数量与愈伤数量之比为3.5。生根培养基为MS+蔗糖30 g/L+琼脂3.0 g/L+IBA 1.0 mg/L,生根率达到33.3%。此外,培养温度显著影响玻璃化苗的生长。在24℃条件下培养30 d,仅有9.7%的玻璃化苗向正常植株转化,而在20℃培养条件下的玻璃化率仅为6.7%。附加30~80 g/L蔗糖的不同培养基上,玻璃化苗向正常苗转化情况无显著差异。     

四川竹根姜胚性愈伤组织诱导和植株再生

选用四川竹根姜的茎尖组织,诱导产生了胚性愈伤组织,建立了高频再生体系。筛选出了适于胚性愈伤诱导及扩增最佳培养基MSN+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT+3.0%蔗糖+0.7%琼脂;胚性愈伤组织分化培养基MS+0.2 mg/L 2,4-D+5.0 mg/L BA+3.0%蔗糖+0.7%琼脂;根状茎形成培养基MS+3.0 mg/LBA+0.1 mg/L NAA+6.0%蔗糖+0.7%琼脂。在3.0%~6.0%的范围内蔗糖浓度越高越促进根状茎形成。     

玻璃化法超低温保存匍匐翦股颖胚性愈伤组织及其植株再生

采用玻璃化法对匍匐翦股颖愈伤组织进行超低温保存条件及植株再生进行初步研究.结果表明:将继代2次的愈伤组织接种到预培养基上,4℃低温预培养5 d.预培养后的愈伤组织在常温下用装载液过渡10 min,再于0℃下用玻璃化溶液PVS2处理50 min后,加入新鲜的PVS2迅速投入液氮中保存1 h以上,取出后在30℃水浴中解冻,用MS+1.0 mol.L-1蔗糖溶液洗涤3次,每次10 min,细胞存活率可达85.6%,接种在恢复培养基上培养,胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生.     

黑莓松散型胚性愈伤组织的诱导

为了诱导出黑莓松散型胚性愈伤组织,试验采用黑莓试管苗叶片、叶柄和茎段为外植体,在含有不同2,4-D及分裂素的MS培养基上进行愈伤组织的初步诱导,从中筛选出松散型愈伤组织的最佳培养基配方;再将诱导出的黑莓松散型愈伤组织转移到含有不同激素种类和浓度的MS培养基上进行松散型胚性愈伤组织的诱导,从中筛选出最佳培养基配方。结果表明,在1/8 MS+3 mg/L 2,4-D+100 mg/L Vc+10 g/L蔗糖的培养基上可以诱导出松散的黑莓愈伤组织;先在MS+2 mg/L 2,4-D+1 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上进行胚性愈伤的诱导继代2~3次,然后转移到MS+0.5 mg/L 2,4-D+2 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上继续培养并继代3~5次后即可诱导出黑莓的松散型胚性愈伤组织。试验结果将为采用黑莓体细胞诱变育种研究奠定基础。     

苜蓿胚性愈伤组织诱导及植株再生研究

以苜蓿5～7 d苗龄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究培养基中不同激素和浓度配比对苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明,MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L愈伤组织诱导率达100%,且愈伤组织状态良好,增殖速度快。MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L为苜蓿胚性愈伤组织诱导的适宜培养基,诱导率为37.8%。胚性愈伤组织分化成苗培养基为MS+6-BA0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L,生根培养基为1/2MS+NAA 0.02 mg/L+蔗糖10.0 g/L。     

香蕉雄花和组培苗假茎胚性愈伤组织诱导的初步研究

从外植体来源、生长调节剂种类及浓度等方面研究影响巴西蕉胚性愈伤组织诱导的因素。结果表明,以未成熟雄花为外植体,MS培养基+1 mg/L 2,4-D+1 mg/L IAA+1 mg/L NAA较适宜胚性愈伤组织诱导,26℃暗培养条件下,未成熟雄花的胚性愈伤组织诱导率为3%～4%。在MS培养基+0.7 mg/L 2,4-D+4 mg/L 6-BA中,以不同品种假茎为外植体的脱分化愈伤组织诱导率最高可达75%,但只有巴西(青杆)和海南本地米蕉可以诱导出胚性愈伤组织,诱导率分别为0.1%和0.5%.     

扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存的初探

[目的]研究包埋玻璃化法对扁桃休眠茎尖超低温保存的影响,为扁桃资源的超低温保存提供理论依据.[方法]采用不同预培养蔗糖浓度和预培养时间、不同装载液处理时间、不同玻璃化液处理时间及不同化冻方式对莎车14号扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存存活率进行比较.[结果]将低温贮藏的扁桃休眠茎尖剥成1～2 mm,用3;的海藻酸钠包埋,在含0.4 mol/L蔗糖的0.1 mol/L CaCl2溶液中固定30 min后形成包埋丸,用含有0.5 mg/L蔗糖的MS培养基预培养3d,放入装载液(MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖)中处理20 min,0℃下用PVS2处理30 min后迅速投入液氮,超低温保存24 h后取出,放入40℃水浴锅中化冻1～2 min,用1.2 mg/L蔗糖的MS洗涤液洗涤20 min,转入含0.3 mg/L 6-BA和0.3 mg/L IAA的MS培养基中培养,存活率达45;.[结论]包埋玻璃化法能够提高莎车14号扁桃休眠茎尖超低温保存的存活率.     

杏离体胚培养与超低温保存的研究

使用包埋玻璃化法对杏离体胚进行超低温保存研究,探讨适宜培养基、蔗糖预处理的时间及浓度、玻璃化保护液的选择及时间对超低温保存后胚成活率的影响。结果表明,胚在0.8 mol/L的蔗糖溶液中预培养24 h后,转入玻璃化保护液B中继续培养30 min ,投入液氮24 h后用40℃水浴快速化冻5 min ,转入MS培养基中在22℃条件下进行暗养,1 d后转移光照培养,最高成活率达80%。     

扁桃茎尖包埋玻璃化超低温保存条件研究

采用包埋玻璃化法对莎车18号扁桃茎尖超低温保存进行了研究。主要探讨低温锻炼、预处理浓度和预处理时间、装载时间和PVS2处理时间对莎车18号扁桃茎尖超低温保存后存活率的影响。结果表明,将低温锻炼4周的莎车18号扁桃茎尖切2 mm长用3%海藻酸钠包埋后,在含有0.3 mg/L蔗糖＋5%DMSO（二甲基亚砜）的MS培养基预培养1 d,装载液处理20min,在0℃条件下用PVS2处理50 min后迅速投入液氮,24 h后取出,放入40℃水浴锅中化冻1～2 min,用1.2 mg/L蔗糖的MS洗涤液洗涤2次,每次10 min,接种于含6-BA0.3 mg/L和IAA 0.3 mg/L的MS培养基上进行培养,暗培养15 d,转移至正常光下,存活率高达52%。     

菠萝茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

以菠萝为试材,建立试管无性系,进行玻璃化法超低温保存及植株再生研究,结果表明,约2.0 ～3.0 cm的菠萝茎尖于含有0.Smol/L蔗糖的培养基上预培养l～2d,剥取含1～2片叶原基(1.0～2.5 mm长)的茎尖,室温(25℃)下用LS装载液预处理50min,再用PVS2溶液于0℃下处理40 min,换入新鲜的PVS2溶液后迅速投入液氪,保存24h后在40℃水浴中迅速化冻90 s,用1.2 mol/L的蔗糖培养液洗涤2次,每次10 min,然后转入含0.3 mol/L蔗糖的MS培养基上,暗培养48 h后转入含BA 0.5 mg/L的MS培养基上,暗培养1周后转移到正常光下,4个菠萝品种(澳大利亚卡因、夏威夷、巴厘、台农16号)的成活率分别为96.5％、95.3％、78.6％、87.7％,再生率分别为93.2％、92.6％、76.7％、87.7％.再生植株生长和分化正常,其形态上与对照一致,生根后可移栽成活.     

冬凌草试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生研究

对冬凌草[Rabdosia rubescens(Hemsl.)Hara.]试管苗茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究。结果表明:1～2cm嫩梢在培养基MS+0.5mol/L蔗糖上培养3d,切取2～3mm茎尖,室温(20℃)下装载液(60%PVS2)过渡30min,0℃下玻璃化液(PVS2)处理45min,投入液氮保存1d后,40℃水浴化冻,1.2mol/L蔗糖的MS培养基洗涤20min,接种于6-BA0.8mg/L、IAA0.05mg/L的MS培养基上,暗处理1周后转到正常光下,成活率达到86%,再生植株生长和分化正常。     

玉米自交系愈伤组织诱导及植株再生体系的建立

玉米的组织培养比较困难,其再生体系还不完善,建立骨干自交系稳定、高效的遗传转化体系是玉米转基因技术的必要前提。以玉米常用自交系齐319、478、502、黄C和7922不同大小（1.0、1.5和2.0 mm）的幼胚为外植体,探讨不同基因型、胚大小和植物生长调节剂浓度对幼胚再生的影响,从而建立玉米高频再生体系。结果表明：以1.5 mm大小的齐319幼胚为外植体,愈伤诱导率最高,达到了86.2%;1.5 mg/L的24-D有利于胚性愈伤的形成和胚性的保持;两步法分化培养可以提高愈伤组织分化、再生成苗。确定了玉米自交系齐319较适合的培养程序为：将1.5 mm大小的幼胚盾片向上接于诱导培养基（N6＋24-D 1.5 mg/L＋L-脯氨酸0.7 g/L＋蔗糖30 g/L＋琼脂粉8 g/L＋硝酸银5μmol/L）,在25℃下暗培养20 d;挑选胚性愈伤组织在温度25℃、暗培养条件下进行继代培养,继代培养基与诱导培养基相同,每14 d继代1次;将愈伤组织继代42 d后转移至分化培养基1（MS＋肌醇100 mg/L＋蔗糖60 g/L＋gelrite 3 g/L）,继续暗培养10 d左右,待愈伤组织形成象牙白色的块状物且有绿点出现时,将其转移到分化培养基2（MS＋肌醇100 mg/L＋蔗糖30 g/L＋gelrite3 g/L）进行光培养,2～3 d即可分化出苗;待幼苗长到4～5 cm高时,移至生根培养基（1/2 MS＋IBA0.8 mg/L＋蔗糖30 g/L）,14～21 d幼苗长出大量的根系,形成完整的植株。     

兰州百合鳞茎再生繁殖体系的建立

[目的]建立兰州百合鳞茎快繁体系,并测定丛芽与鳞茎的淀粉含量,为系统研究兰州百合鳞茎离体再生过程中淀粉的代谢奠定基础.[方法]以兰州百合鳞片为外植体,探讨不同消毒剂组合、激素与蔗糖用量对鳞茎诱导培养过程的影响.[结果]随着75％乙醇（10～30 s）与0.1％升汞消毒时间（7～10min）的延长,外植体鳞片污染数不断下降,但诱导芽数表现为先上升后下降的趋势,以75％乙醇消毒30 s＋0.1％升汞消毒10 min组合的消毒效果最好,外植体污染率和芽诱导率分别为12.33％和91.00％.使用1000倍多菌灵处理10 min后,再使用75％乙醇30 s ＋0.1％升汞7～13 min组合进行消毒,可明显降低鳞片污染率3.00％～5.00％（绝对值）.在MS＋0.03 mg/L NAA＋30.0 g/L蔗糖＋5.0 g/L琼脂培养基中添加6-BA 0.5～1.0 mg/L,可显著提高平均芽诱导数;在MS＋5.0 g/L琼脂培养基中添加30.0～60.0 g/L蔗糖,对外植体芽诱导无明显影响;培养基MS＋1.0 mg/L 6-BA＋0.03 mg/L NAA＋30.0 g/L蔗糖＋5.0 g/L琼脂是外植体芽诱导的最适培养基.MS＋0.50 mg/L 6-BA＋0.03 mg/L NAA＋30.0 g/L蔗糖＋5.0 g/L琼脂为适宜增殖培养基,芽增殖系数达最高,为3.67.在MS培养基中添加60.0～90.0 g/L蔗糖可明显促进鳞茎的形成,以添加90.0 g/L蔗糖处理的鳞茎重量最高（99.30mg）.小鳞茎的淀粉质量分数比丛芽增加62.34％.[结论]以鳞片为外植体建立的兰州百合鳞茎再生繁殖体系具有可行性;在丛芽至小鳞茎形成阶段淀粉含量明显升高,小鳞茎的形成与淀粉含量升高密切相关.     

二球悬铃木的组织培养和体外植株再生研究

以秋季休眠的二球悬铃木枝条的单芽茎段为外植体,接种于MS培养基上。结果表明：MS＋6-BA0.5mg/L＋IBA0.25mg/L（附加0.6%琼脂＋3%蔗糖）最有利于诱导出不定芽,丛生芽诱导期培养温度为28±1℃。MS＋IBA0.25mg/L＋NAA0.1mg/L（各附加0.6%琼脂＋2.7%蔗糖）诱导生根效果相对较好。不定根诱导期培养温度为26±1℃;光照度500～1000lx,光照时间6h/d。     

包埋玻璃化法超低温保存灰杨休眠茎尖的研究

采用包埋玻璃化法,对灰杨休眠茎尖进行了超低温保存研究。将灰杨休眠茎尖包埋在含3%褐藻酸钙的胶球中,研究了预培养中的蔗糖浓度、培养时间和不同玻璃化保护液处理时间对灰杨休眠茎尖存活率的影响。结果表明:含灰杨茎尖的胶球在0.8 mol/L的蔗糖溶液中培养24 h,可获得较高的存活率;胶球经玻璃化保护液[40%甘油+45%(0.4 mol/L)蔗糖+10%聚乙二醇(分子量4 000)+5%二甲基亚砜]在25℃处理20 m in,可以显著提高其存活率,在优化条件下存活率可高达58.3%。     

热带海草海菖蒲不同组织中硝酸还原酶活力的研究

利用活体法研究了海南陵水新村湾热带海草海菖蒲不同组织中硝酸还原酶活力以及酶促反应条件因子pH、温度和KNO3浓度对酶活力的影响;pH设3个水平（7,8,9）,温度（20～40℃）和KNO3（50～250mmol·L-1）浓度各5个水平。研究表明：酶促反应温度和KNO3浓度对酶活力有显著影响,而pH对酶活力没有影响;海菖蒲的最佳酶促反应条件为：100mmol·L-1KNO3,0.5mmol·L-1Na-EDTA、磷酸缓冲液（pH=8.0）、10mmol·L-1葡萄糖和w=0.5%的正丙醇;温度为30℃。在最佳酶促反应条件下,海菖蒲叶、根和茎的鲜质量组织中硝酸还原酶活力大小分别为：1.01,0.08,0.001μmol.g-1.h-1。     

红叶石楠‘红罗宾’组织培养快繁技术的优化

试验以红叶石楠‘红罗宾’茎段为外植体,以MS为基本培养基,探讨了不同的植物生长调节剂及其组合对不定芽的诱导、增殖及生根的影响,从而优化红叶石楠的组培快繁体系。结果表明：（1）适宜的诱导培养基为：MS＋蔗糖30g/L＋琼脂7g/L＋NAA 0.1mg/L＋6-BA 1.0mg/L,诱导率为95%;（2）适宜的增殖培养基为：MS＋蔗糖30g/L＋琼脂7g/L＋TDZ 0.05mg/L＋ZT 0.2mg/L时,分化率达100%,增殖系数为7.1;（3）适宜的生根培养基为：1/2MS＋蔗糖30g/L＋琼脂7g/L＋NAA 1.0mg/L,生根率达95%,平均根数为16;（4）适宜的移栽基质为珍珠岩∶蛭石∶泥炭=1∶1∶1,成活率可达89%。     

文心兰不定芽生根培养基配方的优化与移栽基质筛选

为了优化文心兰生根培养基,以文心兰不定芽为材料,1/2 MS为基本培养基,在(25±1)℃,30μmol·(m2·s)-1,10h·d-1光照时间的条件下优化文心兰生根配方,同时筛选移栽基质。结果表明:IBA是影响文心兰不定芽生根的主导因子,其次是蔗糖;1/2 MS+IBA 0.7mg·L-1+NAA 0.4mg·L-1+蔗糖40g·L-1有利于文心兰不定芽的生根,生根率98.49%、根数9.1条、根长1.24cm、茎高1.49cm、苗高5.08cm、茎粗0.30cm;刨花是文心兰较佳的移栽基质,整体效果高于其它基质,60d后苗高6.75cm,茎粗0.55cm,鲜重1.20g,根冠比0.44。