微卫星PAGE银染法及其干胶的简易制备

为了使微卫星PCR扩增的DNA片段能得到较好的分离和长期保存实验胶片 ,研究利用 1 5对猪的微卫星引物 ,经PCR扩增 ,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,银染法显色 ,然后制成了干胶。结果表明 ,聚丙烯酰胺凝胶具有很好的分离微小差异DNA片段的能力 ,而且银染后制成的干胶可长期保存。此法尤其适用于不具备凝胶成像系统和干胶机的实验室使用。     

用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行球虫同工酶的研究

用聚丙烯酰胺凝胶电泳,对柔嫩艾美耳球虫和斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,进行了乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖磷酸同分异构酶(GPI)和6—磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGD)同工酶的初步研究。结果表明柔嫩艾美耳球虫和斯氏艾美耳球虫的LDH和GPI同工酶酶谱存在明显差异,6PGD同工酶酶谱则一致。柔嫩艾美耳球虫的LDH、GPI和6PGD均为1条带,而斯氏艾美耳球虫的LDH为2条带,其位置与柔嫩艾美耳球虫明显不同,斯氏艾美耳球虫的GPI呈现2条带,其中1条的位置同柔嫩艾美耳球虫基本一致。作者认为,聚丙烯酰胺凝胶电泳可作为球虫同工酶研究的一种方法。讨论了同工酶技术在球虫虫种、虫株的鉴定,在致弱株、耐药株的确定,以及在遗传学、免疫学等方面的应用前景     

微卫星PCR产物PAGE与银染改良方法

对湘西黄牛的2个微卫星座位IDVGA44、IDVGA27 PCR,进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染。结果表明,在凝胶制备时,采用3%和8%两层凝胶结合的方法,能使电泳条带更加清晰,容易判读。按本文的方法配置试剂和染色,条带清晰,背景着色浅,染色效果理想。     

利用正交设计对简易银染法的优化研究

用正交设计研究了DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)凝胶的简易银染中各因素对银染效果的影响,通过PCR技术扩增了山西白猪第六世代15个耳组织基因组的两条微卫星DNA序列,这些序列经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和500ladder Marker标记跑板后,利用正交法设计简易银染法各因素的组合,对凝胶进行染色。试验结果表明,染色液用AgNO3浓度0.10%、显色用含NaOH1.50%、甲醛0.40%混合液、水温30℃时对PAGE凝胶染色的效果最好。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳快速鉴定牛乳蛋白质的研究

试验利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对牛乳进行快速质量检测研究,通过对样品稀释倍数、电压条件、染色时间、漂洗时间及次数等条件进行摸索,获得了条带清晰的牛乳蛋白电泳图谱.结果表明,快速聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定牛乳蛋白质的最佳条件是,用8%分离胶在120V电压下电泳.使用超级灵敏度蛋白质电泳快速染液染色,煮沸染色1 min,振荡10min,可实现快速鉴定牛乳蛋白的目的.     

DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染方法的探讨

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是聚合酶链反应、单链构象多态(PCR-SSCP)分析中不可缺少的技术,多用于单链DNA碱基移位、插入或缺失等基因变异情况的筛查,还可以广泛用于遗传育种、基因定位、种子活力测定等方面。银染方法的建立,始于1979年对蛋白质的染色,以后逐渐应用于核酸。对蛋白质与核酸的检测灵敏度可达到纳克水平,促进了生物大分子结构与功能的研究。电泳完毕后,首先用固定剂将核酸或蛋白固定到凝胶上,然后使银染剂中的银离子与之牢固结合,再通过还原剂将银离子还原,从而发生银棕色显色反应。1材料和方法1.1材料垂直板电泳系统,PC…     

江西地方黑鸡血清蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

对泰和乌黑鸡及南城五黑鸡血清的SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳后发现，同一品种内，相同日龄的不同个体之间的血清电泳图谱不完全相同。泰和乌黑鸡4月龄的1份、3月龄的2份、5月龄的1份与南城五黑鸡3月龄的1份血清电泳图谱一样，都为5条区带，各蛋白质亚基所处位置也相同，其蛋白质组成相同。南城五黑鸡3月龄的1份、4月龄的2份血清电泳图谱找不到与之完全相同的血清电泳图谱     

聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定禽呼肠孤病毒

从感染禽呼肠孤病毒的细胞中,以SDS和酚提取病毒核酸,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法将分节段的核酸分开,经银染色显示,呈3-3-1-3分布,此法可用于禽呼肠孤病毒的快速检测、鉴定。同样方法未能使传染性法氏囊病毒核酸显示。     

牛精子全蛋白二维电泳等电聚焦程序优化及染色方法的比较

以牛精子全蛋白为试验材料进行二维电泳试验研究,优化和改进了一向等电聚焦参数,比较了不同的染色方法,并运用Image Master 6.0软件分析了二维电泳图谱。结果表明,采用24 cm,pH3～10线性IPG胶条进行牛精子全蛋白二维电泳,等电聚焦80000 Vh和结合硝酸银染色方法可得到较多蛋白点和较高分辨率的二维电泳图谱。     

银染mRNA差异显示方法在致突变实验中的初步应用

为建立在药物致突变研究中应用银染 m RNA差异显示的方法 ,试验提取未经过 /经过环磷酰胺处理的 Balb/c小鼠肝组织的总 RNA ,并以此为模板 ,采用 d T1 2 CG、d T1 2 AG、d T1 2 GG为锚定引物 ,通过反转录、差异显示 PCR反应 ,以 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离差异条带 ,回收后将其再扩增。结果表明 ,RNA投入量为 3μg、镁离子浓度为 1.5～ 2 .0 mm ol/L、退火温度为 4 0℃时 ,扩增的片段条带清晰、背景低 ,差异条带明显 ,再扩增条带单一。银染 m RNA差异显示技术可成功应用于药物致突变的研究。     

兔豆状囊尾蚴的压片技术及染色方法研究

为了详细观察豆状囊尾蚴头节的形态结构,通过屠宰检验或病兔剖检采集的豆状囊尾蚴的囊泡,制作压片后用不同的染色方法进行了比较.结果表明,制作豆状囊尾蚴头节压片的关键是载玻片要洁净、干燥,从囊泡中取出的头节应完整无损,并尽量除去黏附在头节上的囊液.将带有头节的结节放在载玻片的中部,再在其上放一载玻片,两手在载玻片的两端均匀用力挤压,待结节全部展开即可.为了观察头节的正面结构,在压制玻片前,应用手术刀片除去原始颈节与体节部分.通过常用的几种单染色和复染色法对压片进行染色,证明单染色更有利于详细的观察头节的结构,而且几种单染色之间有互补染色效果.     

牛4-细胞期胚胎mRNA的RT-PCR检测

凝胶银染法快速检测RT-PCR产物,有利于研究附植前胚胎的基因.选择体外培养的牛单个附植前胚胎,以锚定引物和随机引物RT-PCR扩增,用不同浓度聚丙烯酰胺凝胶在不同电压条件下电泳,2 g/L硝酸银染色,可以直接观察到大小不同的电泳条带,扩增的片段大多数在500 bp以下.研究表明,60g/L聚丙烯酰胺凝胶90 V电压电泳,电泳条带之间具有适当的距离,有利于差异条带分离和回收,是一种分离和检测DNA的有效方法.     

利用CTC染色进行猪精子不同体外获能方法的比较

为了探讨不同方法对猪精子体外获能的影响,本试验以猪的新鲜精液为研究对象,分别经肝素上游法、钙离子载体诱导法和咖啡因诱导法进行精子不同获能时间的处理,并利用金霉素荧光染色法（chlortetracycline,CTC）对其获能效果进行检验。结果表明,采用肝素上游法孵育40 min处理后,精子的获能比例显著高于其他各处理组（P<0.05）,说明肝素上游法可以较好地诱发猪精子在体外获能。     

猪6种血清蛋白质多态型一次淀粉凝胶电泳测定法

通过对江西１２个地方猪种７３９头猪的表样品进行试验，摸索出一种简便、可靠，而且有同时测定血清淀粉酶（Ａｍ）、血液结合素（Ｈｐｘ）、铜蓝蛋白（Ｃｐ）、转铁蛋白（Ｔｆ）、前白蛋白的（Ｐａ）和后白蛋白（Ｐｏ）等６种蛋白南多态 淀粉凝胶电泳地。     

An improved method for discriminating between Japanese Nagoya chickens and others

Recently, we reported a method for identifying the Nagoya, a Japanese chicken breed. Here we describe an improved method suitable for use in conventional laboratories. Five microsatellite markers fixed in the Nagoya breed were amplified by multiplex polymerase chain reaction (PCR). The PCR products were digested with CEL I nuclease and electrophoresed in a ready‐made gel. The fragment‐length polymorphisms of each marker were detected clearly in the gel, and the resultant exclusion probabilities were almost equal to that in our previous data. This method can be used in laboratories without a DNA sequencer for routinely discriminating between the Nagoya breed and other chickens.     

Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis of Canine Urinary Proteins for the Analysis and Differentiation of Tubular and Glomerular Diseases

A preliminary investigation was performed to evaluate the use of a new, noninvasive technique for the localization of canine renal lesions by electrophoresis of urinary proteins. Urine specimens from six clinically healthy, nonproteinuric dogs and 12 dogs with persistent proteinuria were examined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS PAGE). Urine electrophoretic patterns of proteinuric dogs were classified as glomerular (n=4), tubular (n=2), or mixed (glomerular and tubular) (n=6), based on the number and molecular weight of the silver-stained protein bands. Renal tissues from biopsies or necropsies were obtained from eight of the dogs with proteinuric disease. Interpretation of seven of eight electrophoretograms agreed with the histologic interpretation of renal lesions. We concluded SDS PAGE is a potentially valuable technique for detection and localization of renal lesions in dogs with proteinuric disease.