猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法的建立

根据猪口蹄疫O型流行毒株VP1序列设计出5条合成肽,以固相法合成并以此合成肽作为包被抗原建立猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性、重复性等进行验证。结果表明:该检测方法敏感性为96.0%,特异性为99.1%,批内与批间重复试验变异系数小于10.0%。比对试验结果显示,该检测方法与UBI猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒符合率为93.2%,与中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒符合率为85.7%。该猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法敏感性好、特异性强、稳定性高、操作简便,可用于检测O型口蹄疫抗体水平。     

牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法的建立

根据牛口蹄疫O型3个拓扑型VP1序列设计3条合成肽,以此为包被抗原建立牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性和重复性进行验证。结果显示,该方法敏感性为96.7%,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别为2.1%~9.8%和3.5%~10.7%。与2种商品化试剂盒比较,符合率分别为93.5%和85.9%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、稳定性高,可用于牛口蹄疫O型抗体水平检测。     

猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测

为了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果,选用了两个厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗,对80头试验仔猪进行了免疫注射,并在6、7、8、9、11、13、20周龄采血,通过ELISA检测抗体水平的变化。结果显示,猪口蹄疫O型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体;疫苗的免疫副作用小;使用VP1ELISA和LPB-ELISA检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体试验相关性较好。     

四种试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体的对比试验

使用国产的4种猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒(VP1-ELISA)、猪口蹄疫O型液相阻断ELISA检测试剂盒(LB-ELISA)、猪口蹄疫正向间接血凝试剂盒、猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒(O-ELISA)同时检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后的50份血清样品,阳性率分别为98.0%、94.0%、54.0%、90.0%。同时使用农业部规定的3种试剂盒分别检测20份血清样品的抗体滴度发现,VP1-ELISA试剂盒和LB-ELISA试剂盒阳性符合率为95%,平均抗体滴度相差0.7,与IHA试剂盒符合率为55%,平均抗体滴度相差3.8,故LB-ELISA试剂盒可以用来评价合成肽疫苗免疫的抗体,而IHA试剂盒不能用来检测合成肽疫苗免疫的抗体。     

O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法的建立

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准：抗体效价大于或等于1：32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1：16～1：32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95．5％,84．7％。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100％,免疫猪检出率为86．7％。     

猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果调查

应用猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验（VP1-ELISA）对驻马店境内部分接种猪口蹄疫O型合成肽疫苗的猪群进行了血清学抗体检测,以掌握合成肽疫苗的免疫效果。4个规模化猪场血清检测结果显示其抗体合格率为96．6％,其中种猪95．3％、育肥猪97．8％,说明口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果较好。     

口蹄疫病毒特异性抗体间接ELISA检测方法的建立

以Chap10-VP1融合蛋白为包被抗原。建立了检测口蹄疫病毒特异性抗的间接ELISA方法。抗原包被浓度为50μg／L时。血清最佳稀释度为1：400，病毒与阳性血清的反应可被Chap10-VP1蛋白阻断，检测的灵敏度为1：1600。     

2种猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后抗体水平的动态变化

为明确2种猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果,将65头51日龄四元杂交猪随机分为5组(13头/组),其中1组设为健康对照组,DD组和EE组为二次免疫组,DDD和EEE组为三次免疫组,在首免或二免后4周加强免疫,采用阻断ELISA方法检测首免后2、4、6、8、10及12周特异性抗体的阻断率及抗体阳性率。研究结果表明,合成肽疫苗可诱导机体产生特异性抗体;在4WPI(接种后周数)各组特异性抗体的阻断率均高于50.0%,EE、DD、EEE及DDD组抗体阻断率分别为57.9%,57.3%,52.7%及50.3%,在4WPI之后,除DDD组外,其余3组抗体阳性率均在62%以上(8/13);在6WPI,各组抗体阻断率均高于91%,且接近或达到峰值,抗体阳性率均为100%(13/13);在12WPI,除DDD组外,EEE、DD及EE组的抗体阻断率均高于80.0%,分别为96.3%,94.1%及82.3%;除在10WPI DDD和EEE组抗体阻断率显著高于DD组外(0.010.05)。     

猪口蹄疫O型合成肽与油乳灭活疫苗免疫后抗体水平的比较

为明确猪口蹄疫O型合成肽疫苗与油乳灭活疫苗免疫后的抗体水平,将65头51日龄四元杂交猪随机分为5组(13头/组),其中AA组和DD组分别为油乳灭活疫苗A及合成肽疫苗D的二次免疫组,AAA组及DDD组为相应疫苗的3次免疫组,在首免或二免后4周加强免疫,采用阻断ELISA方法检测首免后2、4、6、8、10周及12周(WPI)特异性抗体的阻断率。研究结果表明,在6 WPI,DD组及DDD组抗体阻断率开始上升,接近或达到峰值,其阻断率分别为94.5%(13/13)和97.1%(13/13),随后DD组抗体水平基本维持稳定,而DDD组抗体水平在10 WPI缓慢攀升至峰值,随后下降至65.7%(11/13);AA组和AAA组在6 WPI尽管抗体阻断率也呈上升趋势,且在10 WPI达到或接近峰值,分别为53.0%(8/13)及45.3%(6/13);综上,与猪口蹄疫O型油乳灭活疫苗2次免疫或者3次免疫相比,合成肽疫苗不仅可使机体获得较高水平的抗体,且抗体维持时间较长。     

以重组mE2蛋白为抗原建立检测猪瘟病毒抗体间接ELISA方法 …

以在Ｅ．ｃｌｏｉ高效表达的猪瘟病毒Ｅ２基因主要抗原编码区为抗原,以辣根过氧化物酶标记的兔抗猪ＩｇＧ为二抗,建立了检测猪瘟病毒抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。经检测筛选出最佳反应条件为;１．２μｇ／孔纯化的Ｅ．ｃｏｌｉ表达的ｍＥ２重组蛋白包被酶标板,用１０％的兔血清或马血清进行封闭,以正常Ｅ．ｃｏｌｉ裂解上清液稀释待检血清。     

某品牌鸽新城疫抗体ELISA检测试剂盒性能评价

为检验市场上鸽新城疫抗体ELISA检测试剂盒的准确性及可靠性,从新疆喀什地区规模化鸽养殖场及鸽养殖合作社采集192份肉鸽血样,同时用血凝及血凝抑制试验以及某品牌鸽新城疫抗体ELISA检测试剂盒进行抗体检测,并以前者的检测结果作为"金标准",对ELISA检测试剂盒的性能进行评价.结果显示:ELISA试剂盒的敏感性为12....     

不同包被液对ELISA检测五号病病毒抗体的比较试验

０．０５ＭｐＨ９．６碳酸盐缓冲液和０．０５ＭＰＨ１３ＮａＯＨ溶液作为包被液，分别用于间接ＥＬＩＳＡ检测乙型五号病病毒抗体。结果表明，用０．０５ＭＰＨ１３ＮａＯＨ溶泡包被可完全灭活五号病病毒抗原而用０．０５ＭＰＨ９．６碳酸盐缓冲液却有８７％的五号病病毒抗原未被杀灭；用于检测时，以０．０５ＭＰＨ１３ＮａＯＨ溶液为包被液在敏感性及检测结果的梯度方面都优于用０．０５ＭＰＨ９．６碳酸盐缓冲液。     

猪脑心肌炎病毒抗体间接ELISA方法的建立及应用

应用纯化的EMCV VP1重组蛋白建立了检测EMCV抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最佳工作条件。结果表明,重组蛋白抗原的最适包被浓度为0.54μg/mL;与间接免疫荧光试验比较,结果表明该方法具有良好的特异性和敏感性。此方法中VP1抗原最佳稀释度为1:100,待检血清的最佳稀释度为1:50,酶标二抗的最佳稀释度为1:800,1%明胶为封闭液,OD450时阴阳性血清的临界值为0.35。对2006年天津7个地区66个猪场295份屠宰猪的血清样本的检测结果显示,天津各地区血清EMCV抗体阳性率在41.67%～93.33%之间,平均84.75%,猪场抗体阳性率在50%～100%,平均93.94%。     

间接ELISA检测抗传染性法氏囊病病毒抗体方法的建立

采用原核表达的传染性法氏囊病毒(IBDV)核衣壳蛋白VP2作为诊断抗原,建立检测IBD血清抗体的间接ELISA方法.抗原最佳包被量为每孔174.67ng,待检血清最佳稀释度为1:40,待检血清样品的D492nm≥0.43Dpos+0.57Dneg判为阳性,反之判为阴性.对采自安徽省部分地区的979鸡血清样品进行检测,IBDV抗体阳性率为39.73%.结果证实,间接ELISA法用于IBDV血清抗体的监测具有良好的特异性,是一种快速简便的血清学方法,值得在基层推广应用.     

犬狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

用狂犬病毒单克隆抗体预包被酶标板,将纯化的狂犬病毒作为检测用抗原,利用捕获包被法建立了间接ELISA法用于犬狂犬病病毒抗体的检测。通过优化ELISA条件,研制试剂盒并应用于犬狂犬疫苗的免疫效果检验。利用研制的试剂盒与RFFIT、商品化同类试剂盒对30份犬血清进行平行检测,总符合率分别为90%和93.33%,与其它几种常见犬病毒抗体阳性血清无交叉反应。试剂盒批内、批间变异系数分别为1.45%～5.79%和2.35%～7.21%,2～8℃保存12个月稳定。基于用单抗预包被后再包被检测抗原,本试剂盒检测样品抗体的灵敏度和稳定性得以显著提高,因此适合于不同来源狂犬疫苗人工免疫犬血清的RV抗体水平监测。     

对虾白斑综合症病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

用将纯化的对虾白斑综合症病毒VP28蛋白免疫BALB/c小鼠,分离免疫鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,经间接ELISA筛选,得到了2株（2G9,3E5）可以稳定分泌抗对虾白斑综合症病毒特异性单抗的杂交瘤细胞株。用纯化的VP28蛋白免疫家兔,按常规方法制备多抗。选用单抗（3E5）包被ELISA板,用兔多抗作为捕获抗体,建立了对虾白斑综合症病毒的双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有良好的特异性和敏感性,为对虾白斑综合症病毒的检测提供了有效工具。     

ELISA法检测非洲猪瘟抗体实验条件的优化

本文以灭活非洲猪瘟病毒为包被抗原,分析了包被浓度、酶标二抗、显色底物对ELISA法检测非洲猪瘟抗体的影响,以期获得最适反应条件。以2个阳性血清和一个阴性血清为待检样品,用不同包被浓度、2种酶标二抗和2种显色底物进行ELISA反应,记录吸光值,分析阴阳性样品吸光值差异,优化阴性样品背景值,计算P/N值。结果表明,包被浓度为15μg/mL、二抗为HRP标记蛋白A、显色底物为OPD时,两个阳性样品P/N值分别为4.920和7.259,为本方法的最适反应条件。     

Development and Evaluation of an Indirect ELISA for Detection of Porcine Epidemic Diarrhea Virus IgA in Pig Serum and Milk Captured by Monoclonal Antibody

For the rapid and accurate evaluation of the IgA antibody level of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) in pig serum and milk,a specific PEDV IgG monoclonal antibody (MAb) 8A3 was screened from four strains of PEDV MAb,which could capture all virus particles (inactivated virus cell culture medium) of PEDV efficiently.In this method,the coating concentration of 6.0 μg/mL showed the optimal performance of MAb 8A3,the cut-off value (D_{450 nm}) was settled as 0.34,it had no cross-reactivity with the positive serums of common porcine viruses.Compared with immune-peroxidase monolayer assay (IPMA),the concordance rates of established ELISA for positive and negative serum detection were 98.7% (152/154) and 98.0% (145/148),respectively.For positive and negative samples of colostrum and milk,the concordance rates of the established ELISA compared with IPMA were 100% (60/60) and 95.8% (23/24),respectively.IgA levels in colostrum and milk samples during lactation detected by established ELISA were highly correlated with trends in neutralizing titers (kappa=0.835).Collectively,the indirect ELISA in this study had high sensitivity and specificity,it was a rapid and objective method suitable for large-scale detection of PEDV IgA in clinical samples.     

用大肠杆菌表达FMDV NSP 3ABC鉴别感染与注苗动物ELISA方法的建立

用大肠杆菌表达的FMDV NSP 3ABC经纯化复性后作为抗原,建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法.用该方法检测了大量的牛血清样品,确定了3ABC-I-ELISA判定标准.3ABC-I-ELISA以(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)来计算待测样品效价.当效价小于0.2为阴性,介于0.2～0.3之间为可疑,大于0.3为阳性.根据此判定标准所测试验感染动物血清都为阳性,敏感性达100%;97.06%疫苗注射动物血清为阴性;98.39%的非免疫健康牛(未感染也未注射疫苗牛)血清为阴性.研究证实感染牛在1年以后仍能检测到3ABC抗体.这说明3ABC-I-ELISA能够鉴别FMDV感染动物和注苗动物,可作为大面积疫情监测的方法应用.     

应用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体方法的建立

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法。应用该方法检测鸡痘阳性血清，其灵敏度为琼脂扩散试验的400～800倍，而且还具有特异性强、操作简便、快速等特点。