亚硝态氮对中华鳑鲏的急性毒性及短期影响

静水试验条件下研究了亚硝态氮对体质量(0.636±0.09) g的中华鳑鲏急性毒性及短期胁迫下对其体内两种酶活性的影响。在水温25℃、溶解氧6.3 mg/L、pH 7.4时,测定亚硝态氮对中华鳑鲏的24 h半致死质量浓度,并设置高、中、低3个亚硝态氮质量浓度组[1.28、0.64、0.43 mg/L(1/10×24 h半致死质量浓度、1/20×24 h半致死质量浓度、1/30×24 h半致死质量浓度)],于0、24、48、72 h采集血样,测定血清中过氧化氢酶和碱性磷酸酶的活性。试验结果表明,亚硝态氮对中华鳑鲏的24 h半致死质量浓度为12.76 mg/L。在亚硝态氮胁迫作用下,中华鳑鲏血清中过氧化氢酶活性先显著上升,48 h后开始下降;碱性磷酸酶活性变化则是先显著下降,在48 h恢复,然后再下降。碱性磷酸酶活性在24 h和72 h均受到明显抑制。亚硝态氮质量浓度和暴露时间两者之间存在显著交互作用,碱性磷酸酶可以作为亚硝态氮毒性检测的生物标记物。     

直链十二烷基苯磺酸钠对中华倒刺鲃SOD和GSH-Px的活性影响

以中华倒刺鲃(Spinibarbus sinensis)暴露于不同浓度的直链十二烷基苯磺酸钠(LAS)中10 d,研究阴离子表面活性剂对鱼类抗氧化酶的影响。结果表明,亚致死浓度(4.9 mg/L)LAS暴露可导致中华倒刺鲃超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性发生变化。当LAS质量浓度为0.01 mg/L时,所有受检组织(血液、肝脏)的SOD和GSH-Px活性在暴露初期均受到不同程度的诱导,但LAS浓度为0.2 mg/L和4.0 mg/L和暴露时间超过4 d时,酶活性均呈明显的下降趋势,提示LAS暴露所引起的酶活性变化与暴露浓度和暴露时间有一定的相关性。     

中华鳑鲏皮肤细胞的分离及其细胞系的建立

采用对传统酶消化法稍进行改进建立了中华鳑鲏皮肤细胞的分离方法,获得RSDCs株(系)以便用于后续关于中华鳑鲏体色细胞研究。结果显示,对中华鳑鲏抑菌暂养8~24 h后,0.25%胰酶—EDTA消化处理3~5 min,用手术刀片顺鳞片方向刮除鳞片,在体式显微镜下解剖获得鱼类皮肤,采用IV型胶原酶—胰酶联合消化皮肤获得单细胞;获得的RSDCs于28°C,5%CO_2条件下进行培养,采用血球计数板计数法测定绘制了RSDCs生长曲线;采用RT-PCR的方法检测RSDCs F_0、F_5和F_(10)上皮标记物(Keratin 18和Vinculin A)和内皮标记物(Collagen I)的表达情况。成功分离获得RSDCs细胞株(系);RSDCs以1×10~4个/cm~2接种,倍增时间为30 h左右,呈典型的"S"型,与贴壁细胞的体外增殖行为一致;RT-PCR结果显示,随着传代次数的增加上皮标记物表达呈现下降趋势,而内皮标记物表达呈上升趋势。研究表明,改良的酶消化法能够成功分离获得RSDCs株(系);获得RSDCs体外培养生长曲线呈典型的"S"型,与贴壁细胞的体外增殖行为一致;分离获得RSDCs由上皮细胞和内皮细胞构成,但随着传代次数的增加,上皮细胞所占的比重越来越小。     

铅、镉污染对中华鳑鲏鱼的急性毒性效应

本试验以野生中华鳑鲏鱼为试验对象,采用静水生物测试法研究了铅、镉单一污染物对中华鳑鲏鱼体的急性毒性效应,确立了铅和镉对中华鳑鲏鱼的24h、48h、72h、96h的半致死浓度。     

氨氮胁迫对不同规格刺参(Apostichopus japonicus)存活及非特异性免疫酶活性的影响

本实验以小[(6.05±0.44)g/头]、中[(14.68±1.76)g/头]、大[(25.64±3.27)g/头]的3种不同规格刺参(Apostichopus japonicus)为研究对象,研究了氨氮胁迫浓度为0、2、4、6、8、l0 mg/L时对刺参体腔液中溶菌酶(LSZ)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响.结果显示,在氨氮浓度为8 mg/L时,第10天后,3种不同规格刺参均出现吐肠、化皮,直至死亡.氨氮浓度为10 mg/L时中规格刺参存活率最低,为86.7％.在氨氮浓度为2 mg/L和4 mg/L时,小、中、大规格刺参的3种非特异性免疫酶活性在第4天显著升高,与对照组(氨氮浓度低于0.05 mg/L)差异显著(P＜0.05);第7、10、13天时,LSZ、CAT、SOD酶活性与第4天相比,差异不显著(P＞0.05).在氨氮浓度为6、8、10 mg/L时,LSZ、CAT、SOD酶活性在第7天达到最高,与对照组差异性显著(P＜0.05).氨氮胁迫对3种不同规格刺参的非特异性免疫酶活性的影响存在差异,在同一氨氮浓度胁迫下,敏感性依次为中规格＞大规格＞小规格.研究表明,氨氮胁迫会对刺参存活与免疫产生一定影响,在刺参养殖过程中,水环境中氨氮浓度最好控制在6 mg/L以内.     

氨氮对牙鲆幼鱼肝中超氧化物歧化酶活性及脂质过氧化物含量的影晌

本实验研究了短期内不同氨氮(NH4-N)浓度(1～4 mg.L-1)暴露对牙鲆幼鱼肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明,在本实验剂量及实验时间范围内,牙鲆肝组织中SOD活性随暴露浓度的增加及时间的延长而升高,表现为明显的诱导效应;NH4-N对牙鲆肝组织中MDA含量变化没有明显的影响。     

水体中锌与镉在中华绒螯蟹体内吸收蓄积的相互作用

在实验室条件下,采用混合体系暴露和顺次暴露的方法,研究了Zn与Cd在中华绒螯蟹各组织器官(鳃、肝胰腺、肌肉)吸收和蓄积过程中的相互关系。结果表明,Zn与Cd的相互作用受暴露浓度、组织器官和暴露次序的影响表现出不同的效应。混合暴露体系中,Zn与Cd在肝胰腺中表现出明显的协同效应;鳃中,低浓度暴露,表现出协同,高浓度暴露,表现出拮抗;肌肉中没有明显的规律。顺次暴露体系中,各组织器官中Zn和Cd的含量与混合暴露体系相比明显减少(P<0.05)。另外,Cd的加入,会减少Zn预暴露体系中中华绒螯蟹鳃和肝胰腺中Zn的含量,且Zn含量与Cd暴露浓度成反相关;肌肉中Zn变化不明显。Zn的加入,会增加Cd预暴露体系中中华绒螯蟹鳃、肝胰腺和肌肉中Cd的含量,且肝胰腺和肌肉中Cd含量与Zn暴露浓度成正相关。     

氨氮对南方鲶两种抗氧化酶和抗菌活力的影响

采用静水生物试验法,人工添加氨氮并检测与南方鲶免疫相关的两种抗氧化酶及抗菌活力的变 化,进行氨氮对南方鲶免疫水平影响的试验。结果表明：在本试验剂量范围内,氨氮在一定浓度时对南方鲶 超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)以及抗菌活力均表现出诱导作用;在氨氮浓度高于30 mg/L 时 各组 SOD 及 POD 活力均出现显著高于正常水平(P＜0． 05) 的活力值,之后随时间延长活力逐渐下降;高浓 度氨氮水平(150 mg/L与120 mg/L)对抗菌活力主要表现为抑制作用。试验表明氨氮对南方鲶存在一定的 “阈值”,只有水体实际氨氮浓度超过这一作用“阈值”(30～60 mg/L 之间)时才会表现出诱导作用。     

氨氮胁迫对中华绒螯蟹免疫指标及肝胰腺组织结构的影响

以中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)为研究对象,蟹初始体质量为(71.25±1.13)g。设计对照组(不额外添加氨氮,水中本底氨氮质量浓度约为1 mg/L)、低浓度组(10 mg/L NH4Cl)、中浓度组(50 mg/L NH4Cl)、高浓度组(100 mg/L NH4Cl)4种不同的氨氮质量浓度,分别于胁迫的第1天、3天、5天、15天抽取血淋巴进行相关免疫指标测定,并观察氨氮胁迫15 d后对肝胰腺组织结构的影响。结果表明:(1)3个处理组的血细胞密度(DHC)在胁迫初期(第1天和第3天)均显著低于对照组(P<0.05);在胁迫第5天,各组血细胞密度均升至最高;但至第15天时,高浓度组的DHC下降,显著低于对照组(P<0.05)。低浓度的氨氮胁迫在短期内可促进超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性,高浓度的氨氮胁迫却抑制其活性;随胁迫时间延长,SOD活性变化趋势与DHC相似,CAT活性在胁迫第5天时出现显著下降(P<0.05),且3个氨氮处理组显著低于对照组(P<0.05),而第15天时各组之间差异不显著。丙二醛(MDA)含量随胁迫时间延长而不断增加,不同浓度的氨氮胁迫使MDA增加速度不同,浓度越高,MDA在体内累积量越大;(2)与对照组相比,3个氨氮处理组的中华绒螯蟹在遭受氨氮胁迫15 d后,其肝胰腺B细胞数量均减少,转运泡体积明显增大,细胞核增大且数量增多;而且在高浓度组中,中华绒螯蟹的部分肝小管基膜破裂、细胞结构模糊,少量细胞核解体。结论认为,随着氨氮胁迫浓度的增加和胁迫时间的延长,中华绒螯蟹DHC逐渐下降,MDA含量逐渐增加,机体非特异性免疫防御系统遭到损伤,同时机体细胞和组织受到伤害甚至出现死亡。研究结果从免疫学与形态学的角度阐明了氨氮胁迫对中华绒螯蟹的毒害机制。     

氨氮与拥挤胁迫对吉富品系尼罗罗非鱼幼鱼生长和肝脏抗氧化指标的联合影响

采用中心复合试验设计(CCD)和响应曲面方法(response surface methodology,RSM),探讨了氨氮(0.02 ～ 2.00 mg/L)和养殖密度(1～5尾/10 L)对吉富罗非鱼幼鱼生长和肝脏抗氧化指标的联合影响.结果表明,本试验条件下,氨氮和养殖密度的一次与二次效应对特定生长率有显著影响(P＜0.05),随着氨氮或养殖密度的上升,特定生长率呈先上升后下降的变化.氨氮与养殖密度之间存在互作效应(P＜0.05),氨氮浓度为0.02 ～0.20 mg/L,养殖密度在1～2尾/10 L时,幼鱼特定生长率较高;而氨氮浓度高于0.20 mg/L,养殖密度在3尾/10 L左右时,生长速度较快.肝脏丙二醛(MDA)含量随氨氮浓度和养殖密度的上升而上升,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力呈先上升后下降的变化.氨氮与养殖密度的一次效应对MDA含量和两种酶活力均有显著影响(P＜0.05),二次效应对两种酶活力的表达有极显著影响(P＜0.01);氨氮与养殖密度对CAT活力有互作效应,高浓度氨氮与高养殖密度环境会抑制SOD和CAT活力的表达.因子与响应值间二次多项回归方程的决定系数分别达到0.972 4、0.913 2、0.938 9和0.969 2(P＜0.01),可用于预测;氨氮效应对生长和抗氧化酶活力的影响较养殖密度明显.建议在罗非鱼的养殖过程中合理安排好养殖密度,保持溶氧充足,降低氨氮胁迫,提高罗非鱼的生长与抗病力.     

氨氮胁迫对翘嘴鳜幼鱼鳃、消化道酶活力的影响

为揭示翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)幼鱼对氨氮胁迫的生理变化,以体质量(13.31±0.49)g、体长(9.73±0.46)cm的翘嘴鳜幼鱼为实验鱼,研究了在水温(22.0±0.5)℃下、48.65 mg·L-1氨氮胁迫对其鳃和消化道相关酶活力的影响。结果表明,在氨氮胁迫下翘嘴鳜幼鱼处于应激状态并引起Na+/K+-ATP酶、呼吸代谢酶和消化酶活力水平显著变化。其中Na+/K+-ATP酶活力与对照组差异显著,先升高再降低;呼吸代谢酶活力呈升高趋势;对胃囊和消化道中的消化酶也有显著影响,其中淀粉酶(AMS)呈降低-升高的趋势,胃蛋白酶和脂肪酶(LPS)呈升高-降低的趋势。综上,氨氮胁迫会对翘嘴鳜幼鱼产生损害,使其呼吸代谢功能下降,鳃的呼吸功能受损,机体诱导消化酶与无氧代谢酶活力升高为机体抗应激反应提供能量。     

急性氨氮胁迫和恢复后中华条颈龟主要器官组织结构的变化

氨氮是水产养殖过程中最主要的环境污染物之一。为探究急性氨氮胁迫对中华条颈龟主要器官组织结构的影响,以体质量(218.26±12.65) g的1龄中华条颈龟为对象,应用苏木精—伊红染色的方法研究氨氮(200 mg/L)胁迫(24、48 h)及去除氨氮(48 h)对其脑、肝脏、心脏、肾脏和脾脏组织结构的影响。试验结果显示,氨氮胁迫后脑组织出现间质增宽、疏松,神经元细胞核发生偏位,神经元变性、坏死等现象,恢复48 h后神经元肿胀与细胞核偏位现象减少;肝脏出现肝细胞肿胀、颗粒变性、水泡变性、坏死等病理现象,肝血窦缩小甚至消失,恢复48 h后肝细胞肿胀减少,肝血窦基本恢复到胁迫前水平,但肝细胞颗粒变性、水泡变性现象依旧存在;心脏间质血管充血,恢复48 h后心肌细胞间隙缩小趋于胁迫前水平,充血现象消失;肾脏肾小管上皮细胞发生颗粒变性,部分细胞从基膜脱落,细胞膜破裂,肾小球体积增大、毛细血管网扩张,细胞核固缩甚至溶解消失,间质中有炎性细胞浸润,恢复48 h后炎性细胞基本消失,但肾小管管腔不规则和颗粒变性等病理现象依旧存在;脾脏白髓区域增大,恢复48 h后白髓与红髓趋于正常水平。试验结果表明,急性氨氮...     

Detoxification Pathways in Response to Environmental Ammonia Exposure of the Cuttlefish,Sepia pharaonis: Glutamine and Urea Formation

To investigate the ammonia detoxification pathways of the cuttlefish, Sepia pharaonis, the effects of environmental ammonia nitrogen exposure (control, 1, 3, and 6 mg/L) on nitrogen metabolism were quantified in the hemolymph, liver, and gills. The levels of glutamine synthetase, glutamate dehydrogenase, and arginase activities and ammonia, glutamine, and urea concentrations in the hemolymph, liver, and gills significantly increased upon exposure to 3 and 6 mg/L ammonia nitrogen and exhibited a dose‐dependent relationship with the ammonia exposure concentration. These results suggest two main pathways of metabolic ammonia detoxification in S. pharaonis exposed to ammonia in this study: (1) conversion of ammonia to urea, which is stored temporarily or excreted, via the ornithine‐urea cycle and (2) conversion of ammonia to glutamine, which can be stored in the body or used for other anabolic processes.     

Antioxidant defence to ammonia stress of characins (Hyphessobrycon eques Steindachner) fed diets supplemented with carotenoids

This study aimed to find out whether dietary carotenoid (CD) supplement could influence the resistance of characins (Hyphessobrycon eques Steindachner) to ammonia stress. Two types of CD and its combination [astaxanthin (AX), β‐carotene (BC), 1 : 1 combination of AX and BC (MX)] at three concentrations (10, 20 and 40 mg kg⁻¹) were used resulting in nine pigmented diets. No differences in growth and survival of the fish among treatments were found after 8‐week rearing. Experimental and control fish were then exposed to 15 mg total ammonia nitrogen L⁻¹ (stress group) and 0.15 mg total ammonia nitrogen L⁻¹ (normal group) for 72 h, and their blood was withdrawn. No mortality resulted under such TAN concentrations. Serum total antioxidant status (TAS), serum antioxidant enzymes [superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidases (GPx)] and serum transaminases [alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST)] were chosen as indices of fish antioxidant capacity or stress resistance. SOD, GPx and AST were affected by the interactions of dietary CD and ammonia stress. The activities of TAS, SOD, GPx and AST increased under the stress. Dietary CD reduced serum SOD, GPx, ALT and AST activities. In conclusion, dietary CD increased the resistance of characins to ammonia stress.     

中国明对虾天门冬氨酸转氨酶基因的克隆及氨氮胁迫对其时空表达的影响

利用RACE技术克隆获得中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)天门冬氨酸转氨酶GOT基因(FcGOT)。FcGOT 基因cDNA全长为1 910 bp, 其中, 开放阅读框1 284 bp, 编码427个氨基酸。同源性分析表明, 中国明对虾天门冬氨酸转氨酶GOT氨基酸序列与其他节肢动物高度保守, 与克氏原螯虾(Procambarus clarkii) 和桔粉蚧壳虫 (Planococcus citri) 的同源性分别为78%和73%。系统进化分析表明, FcGOT基因氨基酸序列与克氏原螯虾GOT聚为一支。组织表达分析发现FcGOT基因在肝胰腺、鳃、血细胞、肌肉、心脏、淋巴中均有表达, 其中肝胰腺中表达量最高。氨氮胁迫后, 荧光定量PCR分析结果表明, FcGOT基因在肝胰腺和鳃组织中的表达与对照组相比具有显著差异(P<0.05), 表明FcGOT基因在氨氮代谢方面具有重要的作用, 参与了中国明对虾机体的急性氨氮胁迫应答反应。

     

氨氮胁迫对四鼻须鲤鱼肝脏GST酶活力的影响

实验采用生态毒理学方法,以NH4Cl为实验药物,设置0、50、150和250mg/L实验浓度。通过对野生和养殖群体的四鼻须鲤鱼氨氮对肝脏谷胱甘肽巯基转移酶（GST）活力的影响,比较两个群体抗氨氮能力。结果表明：在相同的氨氮浓度和胁迫时间下,四鼻须鲤鱼养殖群体GST酶活力的变化趋势与野生群体大致相同。除250mg/L浓度组在胁迫5d和10d时,野生群体酶活性略低于养殖群体外,在其余时间点的野生群体酶活性均高于养殖群体,而且,在高浓度氨氮胁迫下,野生群体肝脏的GST酶活性达到峰值的时间比养殖群体更短,显示出较强的抗氨氮能力。     

Effects of ammonia exposure on stress and immune response in juvenile turbot (Scophthalmus maximus)

The aim of this study was to investigate the effects of ammonia exposure on stress and immune response in turbot. The species was exposed to five total ammonia nitrogen (TAN) concentrations: 0 (control), 1, 5, 20 and 40 mg L^?1 for 96 h. After 0, 24, 48 and 96 h of exposure, blood samples were collected to measure the levels of corticotropin‐releasing hormone (CRH), adrenocorticotropic hormone (ACTH), cortisol, growth hormone (GH), lysozyme (LZM), complement 3 (C3), complement 4 (C4) and immunoglobulinM (IgM); liver samples were taken to analyse oxidative stress parameters (superoxide dismutase, SOD; catalase, CAT; glutathione, GSH; malondialdehyde, MDA), and gene expression of heat shock proteins (HSP 70 and HSP 90) and insulin‐like growth factor‐1 (IGF‐1). The results showed that exposure to higher concentrations of TAN (20 and/or 40 mg L^?1) enhanced the levels of CRH, ACTH and cortisol and attenuated the levels of GH, LZM, C3, C4 and IgM in plasma of turbot after 48 and 96 h. In liver, TAN (20 and/or 40 mg L^?1) apparently increased the activities of antioxidative enzymes (SOD and CAT), mRNA levels of HSP (HSP 70 and 90) and formation of MDA, decreased the content of GSH and mRNA levels of IGF‐1 after 48 and 96 h of exposure. Overall, our results suggested that high ammonia exposure caused activation of hypothalamic–pituitary–interrenal axis, inhibition of GH/IGF axis and immunity, and occurrence of oxidative stress.     

氨氮胁迫对锦绣龙虾代谢酶和抗氧化酶活力的影响

为了研究急性氨氮胁迫对锦绣龙虾(Panulirus ornatus)抗氧化系统及氨氮代谢机制的影响,通过设置对照[(0.24±0.07)mg/L]、低浓度[(1.04±0.08)mg/L]、中浓度[(9.75±0.21)mg/L]和高浓度[(19.87±0.46)mg/L]氨氮胁迫方法对锦绣龙虾进行48 h急性实验,测...