蛹虫草不同栽培菌株产虫草素及腺苷差异性研究

目的：测定不同栽培菌株蛹虫草子实体中虫草素和腺苷的含量,为人工蛹虫草的质量评价提供依据。方法：采用高效液相色谱法测定11个栽培菌株人工蛹虫草样品中虫草素和腺苷的含量。结果：所测定的不同栽培菌株人工蛹虫草的腺苷含量为0.1%-0.17%,虫草素含量为0.06%-0.39%,表明蛹虫草不同栽培菌株的虫草素含量变化较大,腺苷含量则相对稳定。     

不同接种物对蛹虫草子实体营养成分的影响

以蛹虫草菌株母种的表层菌皮、母种基内菌丝和成熟的待分离的新鲜子实体顶端接种到液体培养基进行液体培养,分析比较栽培所获得不同蛹虫草子实体的有效成分得出:以母种表层菌皮接种液体培养所获得的子实体虫草素和硒元素含量最高;以母种培养基的基内菌丝接种培养栽培所获得子实体的虫草酸、腺苷、虫草多糖、SOD酶、蛋氨酸、酪氨酸含量较高。     

蛹虫草液体发酵过程中虫草素含量的分析

以2个蛹虫草菌株2014072503-1和2014072301-1为试材,采用高效液相色谱(HPLC)法,分析蛹虫草40d液体发酵过程中其发酵液中的虫草素产量,研究了蛹虫草发酵时间对虫草素产量的影响,旨在确定虫草素开始产生、产量迅速升高、产量最高的3个关键时间点,为下一步对以上时间节点的菌丝样品进行转录组测序分析,进而挖掘与虫草素产量密切相关的候选基因奠定基础。结果表明:2个蛹虫草菌株发酵过程中产虫草素的起始时间点为发酵后3d,迅速升高的时间点是12d,虫草素产量最高的时间点2014072503-1号菌株为发酵后37d,而2014072301-1号菌株为发酵后34d。2014072301-1号菌株发酵产生的虫草素含量高(382.43μg·mL~(-1)),时间短(34d),更适于作为生产虫草素的菌株。     

蛹虫草继代中菌株退化早期外部识别标志研究

以蛹虫草菌株W5继代培养(8d转接1代)1～5代菌株(W5-1～W5-5)为研究对象,观察蛹虫草继代培养过程中菌落形态、细胞超微结构和活性氧含量的变化,以期揭示继代培养过程中蛹虫草菌株退化的早期外部识别标志.结果表明:蛹虫草W5菌株退化是个渐变的过程,继代培养至3代菌落形态、菌丝和孢子形态开始出现变化,节律环和颜色变化...     

不同栽培基质蛹虫草的主要有效成分含量比较

选用大米和桑蚕蛹基质栽培蛹虫草,比较子实体生长情况并分别测定子实体和基质部分的虫草素、腺苷及多糖含量。结果表明,桑蚕蛹基质蛹虫草子实体色泽金黄、密度大,生物转化率高,达95.72%,其子实体虫草素、腺苷和多糖含量分别为223.41 mg/100 g、294.78 mg/100 g和254.91 mg/100 g;大米基质蛹虫草子实体呈浅黄色、分散,生物转化率为22.78%,其子实体虫草素、腺苷和多糖含量分别为246.73 mg/100 g、118.43 mg/100g和999.55 mg/100 g;栽培后桑蚕蛹基质的虫草多糖、虫草素和腺苷含量分别为3 785.27 mg/100 g、446.19 mg/100g和120.52 mg/100 g;栽培后大米基质的多糖含量高达8 852.23 mg/kg,虫草素、腺苷含量低。建议对基质中的高含量有效成分进行针对性开发利用。     

蛹虫草活性成分的测定

分别用薄层层析法和高碘酸氧化法测定了蛹虫草(Cordyceps militaris)、冬虫夏草(C.Sinensis)及其发酵菌丝中腺苷和甘露醇的含量。结果证明,蛹虫草Y3菌株发酵菌丝的甘露醇含量达16.04％,明显高于天然蛹虫草。不同来源的蛹虫草的腺苷含量相近,为1.4％左右。刚联苯三酚自氧化法测定了蛹虫草的SOD)活性,人工栽培的蛹虫草SOD)活性最高,为1882U/mgPr。上述结果表明,蛹虫草具有和冬虫夏草相似的药效成分,有重要的开发应用价值。     

蛹虫草白化菌株生物学特性及其子实体成分分析

对在栽培蛹虫草(Cordyceps militaris)B6过程中发现的白化菌株AB6的部分生物学特性和所获得的子实体成分进行研究。结果表明,AB6在光照条件下菌丝不变色,其菌丝最佳生长温度为25℃、pH 4.0~6.0。AB6子实体的粗蛋白、粗纤维、水、灰分、总水解氨基酸和粗多糖等成分含量与B6子实体无显著差别;而其灰分和虫草素含量较高,分别为8.29%和12.9 mg/g,均高于退化的白化菌株DAB6和B6的子实体;其黄酮类、虫草酸和腺苷,分别为0.22%、14.8 mg/g和1.16 mg/g,比B6子实体低。     

交配型基因作为分子标记鉴定蛹虫草退化菌株的核相初步研究

根据蛹虫草(Cordyceps militaris)交配型基因的序列设计3对特异性引物,对收集到的14株蛹虫草正常菌株和退化菌种进行PCR鉴定.结果表明,3株正常菌株含有MAT-HMG和MAT-alpha两类交配型基因,判定为异核体;11株退化菌株仅仅含有MAT-HMG或者MAT-alpha交配型基因,判定为同核体.笔者推测,蛹虫草发生不形成子实体的菌种退化的原因之一是核相发生了改变,即异核体变成了同核体.     

甲基化相关基因和交配型基因在蛹虫草退化过程中的作用

通过继代培养正常蛹虫草(Cordyceps militaris)菌株CmHY-1(双交配型)获得不同继代次数菌株CmHY-2～CmHY-9并栽培,测定菌株CmHY-1、CmHY-7和CmHY-9液体培养时的腺苷和虫草素含量;制备菌株CmHY-1、CmHY-5、CmHY-7和CmHY-9分生孢子单孢分离菌株并鉴定交配型;...     

低温刺激对蛹虫草子实体产量及品质的影响

目的:研究温差刺激对蛹虫草子实体干重、虫草素和腺苷含量的影响.方法:以蛹虫草同一子实体头部和中部组织分离的异核体菌株CMS1和CMZ1为材料,采用小麦固体栽培基质室内培育子实体,在原基形成阶段进行温差刺激,培养45 d后,测定子实体数及干重、虫草素和腺苷质量分数.结果:低温10℃处理,CMS1菌株处理6 h/d时,子实...     

激发子对蛹虫草子实体中虫草素和腺苷含量的影响

研究了不同激发子菌株对蛹虫草子实体中虫草素和腺苷含量的影响。结果表明:就虫草素而言,JF4对虫草素积累的诱导作用在发酵培养40d时达到最大,为162.22 mg/L,与对照组相比增加了3.85倍,并且JF4对虫草素的诱导作用是4种激发子中作用最强的;就腺苷而言,JF2对腺苷积累的诱导作用在发酵培养40d时达到最大,为29.16mg/L,与对照组相比增加了4.13倍。由此可见,激发子对蛹虫草子实体中虫草素和腺苷的积累因激发子种类及添加后培养时间的不同而产生不同的影响。     

蛹虫草遗传多样性分析

比较12个蛹虫草菌株菌丝生长特性、子实体农艺性状,分析其酯酶同工酶,研究蛹虫草菌株的遗传特性及亲缘关系.结果表明:12个蛹虫草菌株的菌丝生长速度、菌丝密度、菌丝形态有一定差异,匍匐状菌丝更有利于现蕾;农艺性状不同的菌株间其酯酶同工酶酶带也不同,子实体农艺性状差异大的菌株其亲缘关系较远.酯酶同工酶电泳技术为蛹虫草良种选育...     

不同储存时间对蛹虫草中化学成分含量的影响

以蛹虫草为试材,研究了不同储存时间对新鲜蛹虫草中多糖、虫草酸、总黄酮及7种核苷类成分含量的影响。结果表明:随着处理时间的递增,蛹虫草颜色由橙黄色变为暗黄色,最终变为黑色;气味由菌香味变为腐烂臭味;储存时间对新鲜蛹虫草中化学成分含量影响明显,其中的化学成分变化规律为多糖含量先下降后升高,而总黄酮含量则是先升高后降低,虫草酸含量变化为逐步下降;尿嘧啶和腺嘌呤含量逐渐升高,与之相反,腺苷、虫草素和鸟苷含量则是逐渐降低,尿苷和肌苷含量先升高后降低。三次曲线方程可用于描述新鲜蛹虫草中化学成分含量与储存时间的变化关系。多糖、虫草酸、尿嘧啶、腺嘌呤、腺苷和虫草素等指标,可用于新鲜蛹虫草质量控制。     

硒和钙对蛹虫草活性物质含量的影响

向培养液中分别添加不同浓度的亚硒酸钠、氯化钙,用液体振荡培养法培养蛹虫草菌丝体,用HPLC法测定虫草素与腺苷含量,用苯酚-硫酸法测定多糖含量,用高碘酸钠比色法测定虫草酸含量.以研究2种微量元素对蛹虫草菌丝体中虫草素、腺苷、多糖和虫草酸含量的影响.结果表明:向培养液中添加适量的硒或钙,可显著提高蛹虫活性物质含量.添加15 mg/L亚硒酸钠,虫草素和虫草酸含量比对照组分别提高了29.0％和34.9％;添加16 mg/L氯化钙,虫草素含量比对照提高24.05％.     

高产虫草菌素蛹虫草菌株的紫外线诱变选育

蛹虫草是重要的药食用真菌。通过对蛹虫草原生质体进行紫外诱变处理,筛选到1株优良的菌株CMM-81。经固体发酵,虫草菌素和腺苷含量分别为0．437％和0．036％,是出发菌株的2倍。菌株CMM-81经连续15代传代培养,虫草菌素和腺苷的含量保持稳定。     

不同来源蛹虫草核苷类成分分析

采用超高效液相色谱法测定了不同来源蛹虫草样品中的9种核苷类成分,包括尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、胸苷、腺苷、2’-脱氧腺苷、虫草素,使用统计产品与服务解决方案(19.0)和中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012)软件,分析不同来源蛹虫草核苷类成分的含量差异。结果表明,不同来源蛹虫草9种核苷类成分总含量在4 488.36μg·g~(-1)~10 294.16μg·g~(-1),平均值为8 115.06μg·g~(-1),变异系数为15.33%;蛹虫草中9种核苷类成分含量高低依次为腺苷、鸟苷、尿苷、虫草素、肌苷、腺嘌呤、尿嘧啶、 2’-脱氧腺苷、胸苷,其中,腺苷、鸟苷、尿苷和虫草素是蛹虫草中主要的核苷类成分;聚类分析结果显示,不同来源蛹虫草中核苷类成分的含量具有一定的地理相关性。指纹图谱相似度计算结果显示, 30个样品间指纹图谱相似度在0.69~0.99,表明不同来源蛹虫草核苷类成分相似度较高,但仍然存在一定的差异。     

运用基因枪法进行蛹虫草遗传转化的研究

采用蛹虫草[Cordyceps militaris（L.）Link]野生型菌株CM01为供试材料,以金粉包裹质粒pDHt-gpdA-GFP-bar,运用基因枪法转化,经草铵膦抗性筛选,最终在靶距离6 cm或9 cm,氦气压力7.58 × 106 Pa或8.96 × 106 Pa条件下,获得2个遗传稳定的转化子Gfp2与Gfp3,转化效率为0.4 cfu ? μg-1。PCR鉴定与Southern杂交分析显示,草铵膦抗性基因Bar已经以单拷贝或者多拷贝方式整合到蛹虫草转化子的基因组中。蛹虫草转化子的菌丝在荧光显微镜下可以观测到绿色荧光,表明载体携带的绿色荧光蛋白基因在蛹虫草转化子中得到表达。研究结果表明可以把基因枪法应用于真菌蛹虫草,建立了一种简便有效的遗传转化方法,而转化效率需要通过优化基因枪参数设置、受体材料制备等途径进一步提高。     

继代培养对蛹虫草菌丝生长速度及酯酶同工酶的影响

以蛹虫草菌株为试材,通过垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳和菌丝生长速度测定,对不同代次蛹虫草菌丝生长速度和菌株酯酶同工酶表现型进行比较分析,旨在寻找蛹虫草菌种退化机理。结果表明:不同代次蛹虫草的菌丝生长速度差异不显著,而酯酶同工酶酶谱发生较大变异。9个菌株共有3条迁移率不同的条带,分别为0.63、0.65和0.67,其中F1、F3、F4和F5代菌株出现第2、3条酶带,迁移率分别为0.65和0.67,而F2、F6、F7、F8、F9代菌株发生变异,迁移率为0.67的条带消失,菌株酶谱条带中产生了迁移率为0.63的新条带。     

蛹虫草虫草素高产原生质体融合子鉴定与筛选

以蛹虫草(Cordyceps militaris)4号和8号菌株作为亲本,采用灭活原生质体融合技术获得228个再生菌株。酯酶同工酶与ISSR-PCR方法相结合鉴定融合子,以虫草素含量和子实体性状为筛选指标,经过初步的遗传稳定性测试,得到虫草素含量显著提高的5个稳定融合子——CM59、CM61、CM69、CM136和CM186 ,其虫草素含量分别为8号菌株的1 .17 ~1 .73倍。实验证明融合子菌丝中虫草素含量普遍提高。筛选得到的5个融合子经进一步遗传稳定性验证后可用于以获得虫草素为目的的菌丝体发酵培养。     

光照对蛹虫草子实体农艺性状及活性成分的影响

分别采用白光、紫光、蓝光、绿光、橙光、红光共6种光质,每种光质分别设250、500、750、1000 lx 4种光照强度,在蛹虫草(Cordyceps militaris)生殖生长阶段给予差异化处理,分析不同处理下蛹虫草的农艺性状及虫草素、腺苷含量。结果表明：绿光处理的蛹虫草子实体干重较大,且在750 lx光照强度下子实体干重达到最大值,为每瓶(5.21±0.23) g,较其他5种光质具有显著差异,但不同光照强度间并无显著差异。在高光照强度1000 lx蓝光下,蛹虫草的虫草素含量最高为(2.03±0.07) mg·g^-1,与其他5种光质具有显著性差异;在低光照强度250、500 lx下,紫光、绿光、橙光、红光对虫草素含量积累的影响大于蓝光。在不同光照强度下,橙光处理的蛹虫草子实体腺苷含量相对较高,为(2.52±0.03)～(2.72±0.15) mg·g^-1;光照强度为250 lx时,橙光处理的蛹虫草子实体腺苷含量显著高于其他5种光质的处理;相同光质不同光照强度的处理间,腺苷含量无显著性差异(除紫光外)。总体而言,光质对于蛹虫草子实体生长发育...