应用环介导逆转录等温扩增技术快速检测新城疫病毒

参考新城疫病毒融合基因(fusion gene, F gene)序列,设计了2对能够特异性地识别F基因上的6个区域的引物,并以此建立了一种简单、快速、有效的环介导逆转录等温扩增(RT-LAMP)方法检测NDV. 试验结果表明:该方法用时短(2 h内完成)、特异性好而且灵敏度高,最小检测限可达100 pg;对人工发病样品进行鸡胚分离和RT-LAMP检测,二者的阳性符合率高达93.5%;同时采用镁离子沉淀对检测结果进行可视化处理,方便利用肉眼直接观察.     

鼠伤寒沙门菌免疫磁珠的构建及应用效果评价

【目的】制备鼠伤寒沙门菌高免血清并纯化抗体,构建免疫磁珠,进行吸附效果评价,为建立鼠伤寒沙门菌快速检测方法奠定基础。【方法】利用试验兔制备高免血清,检测效价后纯化提取IgG抗体,纯化后的抗体采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺方法与四氧化三铁磁性纳米颗粒偶联,制备出鼠伤寒沙门菌免疫磁珠。利用抗原抗体反应原理,通过免疫磁珠对样品中的鼠伤寒沙门菌进行富集分离,将鼠伤寒沙门菌捕获到磁珠表面,达到检测鼠伤寒沙门菌的目的。【结果】制备出的血清效价达1∶51 200,纯化后的抗体特异性强,仅与鼠伤寒沙门菌有凝集反应,与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌均无凝集反应;制备的免疫磁珠能够富集奶样样品、肉样样品与蛋黄样品中的鼠伤寒沙门菌,灵敏度为10¹CFU/mL。【结论】该研究制备的鼠伤寒沙门菌免疫磁珠,能够有效富集各种样品基质中的鼠伤寒沙门菌,有望用于鼠伤寒沙门菌快速检测方法的建立。     

玉米内州萎蔫病菌荧光重组酶介导等温扩增检测方法的建立

玉米内州萎蔫病菌(Clavibacter michiganensis subsp. nebraskensis)是进境玉米重要检疫性病原物之一。通过分析比较玉米内州萎蔫病菌的纤维素酶基因celB,筛选出独特和保守的基因序列用于设计引物和探针,利用重组酶介导等温扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA)建立玉米内州萎蔫病菌的荧光RAA检测方法。以celB基因序列作为靶标序列设计出引物2F、6R和探针P,建立了玉米内州萎蔫病菌荧光RAA检测方法,该方法在39 ℃恒温条件下,20 min内可完成检测反应,特异性好,且灵敏度高达130 fg·μL^-1,利用该方法检测4份玉米模拟样本阳性,8份玉米真实样品阴性,检测结果与参照国家标准GB/T 36840—2018一致。结果表明,建立的荧光RAA检测方法快速、特异、灵敏,能够满足现场检测要求。     

我国研制成功监测肉类药残智能系统

用于检测肉类兽药残留的生物芯片检测系统在生物芯片北京国家工程研究中心研制成功，这是世界上第一个能够监测肉类中兽药残留的生物芯片系统。该生物芯片能够分析大量的生物分子，快速准确地完成肉类中兽药残留的检测工作。已研制成功的这套兽药残留蛋白质免疫芯片检测系统，能够在几分钟内检测出肉类中的兽药残留。目前该芯片的第一代样品已经研制成功，可以对包括瘦肉精、磺胺二甲嘧啶、链霉素在内的几种重点兽药进行检测。     

副猪嗜血杆菌平板凝集检测方法的建立与应用

【目的】建立快速检测副猪嗜血杆菌抗体的平板凝集试验方法,以便能够对副猪嗜血杆菌病进行快速、准确的诊断。【方法】利用9株(Ea、Ec、Ew、A1、A2、B1、B2、C1、C2)副猪嗜血杆菌陕西分离株制备平板凝集抗原,用其免疫健康家兔制备血清抗体,建立副猪嗜血杆菌平板凝集检测方法,对制备抗原的优势菌株进行筛选,并对该方法的特异性、敏感性、抗原最佳工作浓度进行检测。【结果】选出Ew株作为制备抗原的种子菌株,成功建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的平板凝集试验方法;该方法具有良好的特异性和敏感性,抗原最适工作浓度为8×109 CFU/mL。采用本试验建立的副猪嗜血杆菌平板凝集试验方法对临床血清样品的检测结果与临床诊断结果基本一致。【结论】建立的副猪嗜血杆菌平板凝集试验方法能够对副猪嗜血杆菌病做出较为快速、准确的诊断;陕西省存在副猪嗜血杆菌不同程度的感染,规模猪场集中饲养的猪感染副猪嗜血杆菌的比率明显高于散户。     

4HUA抗原回滴操作在禽流感试验中的重要性

禽流感微量血凝抑制试验，因为其微量、快速、可靠，能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽类血样的禽流感抗体滴度水平，因此成为基层兽医实验室常用的方法。禽流感HI检测结果的准确与否，对掌握禽群的禽流感抗体水平。发现防疫漏洞能否及时补免、制定合理的免疫程序，以及提高对禽流感疫病的监控，确保不发生禽流感疫情至关重要。笔者在长期的禽流感HI检测中，积累了如下的经验，愿与大家进行交流探讨。     

植物中淀粉含量的流动注射分析

本文采用国产ZSY-1型流动注射分析仪及其附属设备,建立了植物中淀粉含量的流动注射碘比色分析法。通过对红松苗木,白皮松种籽等植物样品中淀粉含量测定及其与化学法对照实验和外加已知淀粉样品回收实验,都取得了满意结果,样品回收率在90％以上。本文系统探讨了分析检测流路及显色剂载流的选择和分析检测条件;深入讨论了该方法的准确度、灵敏度和精密度。FIA法测定淀粉具有:样品前处理简捷,干扰少、误差小、重复性好;选择性佳,灵敏度、准确度、精密度高;分析测定速度快、费用低、适于短时间内进行大批量样品淀粉含量测定等特点。     

胶体金免疫层析法检测水产品中孔雀石绿前处理方法的优化

为了提高胶体金检测孔雀石绿方法的精密性、准确度、检测限等指标,并尽可能缩短样品处理时间,对样品用量、提取剂用量、离心时间、吹干温度、空气出量等检测条件进行优化,建立一种简便、快速检测水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的胶体金免疫层析方法。优化后,在满足检测限、假阳率和假阴率不变的条件下,样品处理过程更加简单,省去了传统方法需要过柱的步骤;单个样本处理,除去空气吹干的时间,只要最少7min即可完成样品的前处理,大大低于市场上样品前处理的时间;出带速度快,检测时间短,单个样本的检测时间在10~15min;对组织(鱼)中孔雀石绿的检出限可提高到2μg/kg;减少样品处理过程中耗材和试剂的用量,节约检测成本。该方法节省了大量的人力和物力,适用于日常的大批量样品检测,为胶体金免疫层析法检测孔雀石绿及其代谢物,提供了一种新的样品处理方法。     

水环境中诺如病毒RT-LAMP快速检测方法的建立及应用

[目的]基于诺如病毒(NV)基因保守区,设计一套RT-LAMP简并引物,建立能简便、特异、灵敏检测水环境样品中NV的一步法RT-LAMP技术。[方法]通过试验,优化反应温度(64℃)、反应时间(40 min)、Mg2+浓度(2 mmol/L)等参数,建立反应体系。[结果]该方法只需1台水浴锅在1 h内即可完成检测,可直接用肉眼观察结果,检测灵敏度比普通RT-PCR高100倍;简并引物的设计增强了特异性,可检测多个血清型的NV。[结论]在样品检测中,RT-LAMP技术的灵敏度达97.7%,高于RT-PCR的90.7%,更适用于野外样品和简陋实验室的快捷检测。     

高效液相色谱法检测蔬菜中吡虫啉残留试验分析

本文以蔬菜作为主要研究对象,对蔬菜中的吡虫啉残留情况进行针对性的检测。从检测结果中可以看出,高效液相色谱法可以在短时间内快速完成检测,并有效保证检测结果的准确性,对蔬菜中的吡虫啉残留测定非常适合。     

基于PCR-LFB的羊源性成份检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成份检测技术,为动物源性成份的检测提供新思路。方法:进行动物源性成份DNA快速提取;针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增;制备LFB对羊源性成份核酸扩增物进行检测。结果:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。结论:建立的羊源性成份PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

基于PCR-LFB的羊源性成份检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成份检测技术,为动物源性成份的检测提供新思路。方法:进行动物源性成份DNA快速提取;针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增;制备LFB对羊源性成份核酸扩增物进行检测。结果:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。结论:建立的羊源性成份PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

基于PCR-LFB的羊源性成份检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成份检测技术,为动物源性成份的检测提供新思路。方法:进行动物源性成份DNA快速提取;针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增;制备LFB对羊源性成份核酸扩增物进行检测。结果:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。结论:建立的羊源性成份PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

试论蔬菜农药残留检测中速测技术的运用

检测人员在蔬菜农药残留分析工作中运用速测技术,能够在短时间内测得蔬菜农药残留量。文章从生化检测技术以及生物检测技术2方面介绍了目前农药残留检测工作中较为常用的速测技术,以期提高检测结果的准确度,缩减检测所消耗的时间。     

基于PCR-LFB的羊源性成份检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成份检测技术,为动物源性成份的检测提供新思路。方法:进行动物源性成份DNA快速提取;针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增;制备LFB对羊源性成份核酸扩增物进行检测。结果:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。结论:建立的羊源性成份PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

大丽轮枝菌分泌蛋白提取方法比较

【目的】采用超滤法（UF）、三氯乙酸沉淀法（TCA）、离子交换富集法（IEX）分别从大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）高致病性菌株VdG1培养上清液中提取分泌蛋白,对提取样品进行质谱鉴定。寻找适合大丽轮枝菌分泌蛋白的提取方法,为大丽轮枝菌分泌蛋白组深入研究奠定基础。挖掘大丽轮枝菌分泌蛋白中潜在的致病相关蛋白,为其深入功能验证及致病机理研究提供平台。【方法】3种方法提取大丽轮枝菌VdG1分泌蛋白,shot-gun方法进行质谱鉴定。利用生物信息学软件WoLFPSORT、SignalP、TMHMM、PHOBIUS对其中经典分泌蛋白进行预测。通过CAZy和PHI数据库进行经典分泌蛋白中碳水化合物水解酶（CAZy）和病原菌寄主互作因子（PHI）注释,BLASTp软件进行RxLx、LysM、Cys Pattern等模体蛋白比对分析。提取的蛋白样品接种感病棉种（军棉1号）进行样品生物学活性及致病性检测。【结果】TCA法、IEX法和UF法制备大丽轮枝菌分泌蛋白,其提取效率分别为1.18、0.96和0.56 mg?L-1。SDS-PAGE电泳检测显示UF法提取的蛋白样品条带少而模糊。而TCA法和IEX法提取的蛋白样品条带较多,样品的纯度也较高;经生物信息学软件预测分析,提取的蛋白样品中含有经典分泌蛋白分别为124、112和75个;质谱鉴定的分泌蛋白中含有潜在致病因子分别为98、85和57个;另外,IEX法制备大丽轮枝菌分泌蛋白效果较好,具有小分子偏好性,且能够保持样品的生物学活性,该蛋白样品接种棉花叶片能够引起萎蔫、坏死的症状。【结论】3种方法提取大丽轮枝菌分泌蛋白,UF法提取效率最低,纯度最差,蛋白数量最少,蛋白样品中含有潜在的毒素蛋白数量也最少,而且对于大体积处理相当耗时。TCA法和IEX法都适合大丽轮枝菌分泌蛋白的制备,但是TCA法制备过程中不能保持样品的生物学活性,后续适合于2-D电泳检测等试验。IEX法首次应用于病原菌分泌蛋白的制备,操作简单、方便,全部过程均由仪器系统完成。制备的大丽轮枝菌分泌蛋白具有生物学活性,能够引起棉花叶片的萎蔫、坏死病症。另外,数据库及软件比对分析发现大丽轮枝菌分泌蛋白组中含有CAZy酶类61个、PHI相关蛋白38个、RxLx模体蛋白13个、LysM模体蛋白1个、Cys Pattern的模体蛋白15个、VdNEP蛋白家族2个。该结果将为致病相关蛋白的筛选和深入功能验证提供重要依据。     

吉林农业科技名人

<正>张明(Zhang Ming),男,1954年生,汉族,研究生学历,研究员,吉林省农业科学院生物技术研究中心党支部书记,农业部转基因植物环境安全监督检验测试中心常务副主任,全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会委员,国家计量认证评审员。"七五"期间完成了国家攻关课题"大豆种质资源主要品质鉴定";"八五"期间作为参加单位项目负责人完成了国家攻关课题"主要粮食作物品种资源品质鉴定及优质种质的深入评价";"九五"期间承担了国家自然科学基金"中国野生大豆的生物学研究及其应用的探讨"项目、完成了与中国农科院分析测试中心的合作项目"氨基酸检测方法标准的制定及标准样品的研究与制备"、完成了省科委课题"果树种质资源收集鉴定筛选与数据库建立"。     

微波消解ICP-AES快速分析林蛙样品的应用

利用微波辅助消解林蛙肝脏、骨粉、内皮和外皮组织样品,30 min完成称样,消解到定容全部前处理过程,电感耦合等离子体光谱法1 min检测1个样品中22种元素,省时、省力、快速、准确,准确度和精密度高于常规的湿法消化和低温干灰化法制备样品的方法,实验时选择微波消解时间15 min,功率360 W,混合酸体系为HNO3-HCl-H2O2-H2O,混酸配比为8: 2: 2: 3.微波消解林蛙皮肤样品大大缩短分析流程,采用标准溶液基体匹配法消除基体干扰,利用电感耦合等离子体原子光谱分析技术,同时检测林蛙组织中常量和微量元素.该方法经国家猪肝标准物质GBW08551验证,测得方法相对误差在0.17%～6.67%,相对标准偏差在0.47%～4.94%,各项检测指标均能满足生物样品检测要求,达到满意的测量结果.     

新人参二醇血浆样品制备方法初探

建立新人参二醇血浆样品制备方法。以高效液相色谱法检测小鼠血浆提取物中新人参二醇的含量,确定小鼠血浆预处理方法。结果石油醚、乙醚和醋酸乙酯等萃取法制备的血浆样品中新人参二醇提取率低;甲醇萃取法、SPEC18固相萃取法制备的血浆样品提取率均较高,但甲醇萃取制备的样品中杂质峰干扰较大,而SPEC18固相萃取法制备的血浆样品中杂质峰对样品无干扰。SPEC18固相萃取法可作为新人参二醇血浆样品的制备方法。     

农产品农药残留检测技术研究

正农药残留是对农业发展以及农产品销售造成制约的主要原因,对农药残留进行严格检测,是对消费者权益的维护,也是为了农产品市场的健康发展。现阶段在农药残留检测方面,技术水平在不断提升,促进农业竞争力进一步发展。1农药残留检测流程对农药残留进行检测,流程可以概括为采集样品、处理、制备样品以及仪器分析。对样品进行采集,涉及到采样、运输以及保存三个主要的