红花蛋白的提取及利用价值评价

本文在对红花蛋白的提取方法作了大量研究的基础上。指明了采用等电沉淀法提取红花蛋白时，ｐＨ值，温度，籽粕含油量，不同浸提液与蛋白质得率的关系。同时，用多种方法对红花蛋白作了较全面的利用价值的评价。     

植物组织双向电泳样品制备方法研究进展

摘要：双向电泳是目前应用最广泛的蛋白分离技术，该技术的核心是蛋白样品的制备。植物组织中通常含有大量蛋白酶和次生代谢物，这严重干扰蛋白提取、分离和鉴定。从植物组织中提取高质量的蛋白样品用于蛋白组分析充满挑战，本文简要阐述了植物组织蛋白提取的关键点，特别是植物组织中的次生代谢物及去除方案。此外，本文还对三种植物蛋白提取方法、三种方法的优缺点及适用植物组织作了概述。     

红花油体蛋白基因CtOleosin的克隆及表达

【目的】克隆红花油体蛋白基因CtOleosin,研究其表达特性,为探索其功能奠定基础。【方法】以红花种子为研究对象,于开花后4,8,12,16,20,24,28,32d,提取红花种子总RNA,利用RT-PCR技术克隆红花CtOleosin全长cDNA片段,生物信息学方法分析其特性及结构功能;利用Protparam在线工具分析CtOleosin蛋白的理化性质,用Blastp比对该蛋白与其他物种相关蛋白的同源性,使用SMART软件进行功能区分析;利用荧光定量方法检测该基因在种子不同发育时期的表达量。【结果】克隆了红花CtOleosin基因,其全长639bp,编码213个氨基酸,蛋白理论分子质量约为21.48ku,理论等电点9.39,带正电荷残基18个,负电荷残基14个;红花CtOleosin基因编码产物与向日葵Oleosin的同源性高达59.11%,属于油体蛋白家族成员,此蛋白不存在信号肽,无糖基化位点,存在2个跨膜区;以EF1α作为内参基因分析发现,CtOleosin基因表达量在红花种子发育初期逐渐升高,28d时达到最高,之后又有所下降。【结论】成功克隆了红花CtOleosin基因,明了了其特性、功能、编码产物的基本理化性质,以及其在红花种子不同发育时期的表达量变化情况。     

红花油酸去饱和酶基因的克隆及序列分析

【目的】对红花油酸去饱和酶FAD2基因进行克隆和生物信息学分析,为深入研究该酶的功能提供理论依据。【方法】提取红花种子总RNA,通过RT-PCR方法进行反转录,PCR扩增得到FAD2基因全长cDNA序列。运用生物信息学方法,对红花FAD2氨基酸序列的理化性质、系统进化、蛋白定位和跨膜区域等进行预测和分析。【结果】成功克隆获得了红花FAD2基因,其开放阅读框cDNA长1 140bp,编码380个氨基酸,预测分子质量43.6ku,理论等电点8.37,带有正电残基(强酸性)30个、负电残基(强碱性)34个。FAD2蛋白含有3个极度保守的His-Box,不存在明显的信号肽,存在6个跨膜结构域,与疏水区域预测结果一致。红花FAD2核苷酸的分子进化树分析显示,其与日本栽培稻的亲缘关系较近。红花FAD2氨基酸序列比对结果表明,不同植物的FAD2具有较高的同源性,同源性平均达72.94%。【结论】成功克隆了红花FAD2基因,并对其编码的蛋白进行了生物信息学分析。     

稻田绿肥提取叶蛋白新工艺及其应用前景

对四种叶蛋白沉淀方法的沉淀效果进行了比较，研究了澄清液经乳酸发酵发酵后作沉淀的机理，应用条件及沉淀技术，提出了叶蛋白提取新工艺。试验证明，这种新工艺叶蛋白提取率高，品质好，设备简易，成本较低，适合农村推广应用。     

固相萃取——高效液相色谱法分离红花中的黄酮类物质

目的 研究红花中的黄酮类物质。方法 乙醇浸泡提取，固相萃取分离，液相色谱法进行纯度检测，结果 采用的红花中有两种黄酮类物质。结论 洗脱液V（H2O）：V（C4H5OH）=3：7，能很好的分离红花中的两种黄酮类物质。     

红花提取物清除自由基能力的初步研究

本研究分析了红花清除自由基的能力,并探讨了有效提取其抗氧化成分的方法,旨在为红花的保健效用及其开发利用提供基本资料。以红花为试材,通过超声波、过滤、离心等方式,采用水、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙酸乙酯等溶剂提取抗氧化成分,应用水杨酸法测定其清除羟自由基的能力,应用光照核黄素法测定其对超氧阴离子自由基的清除作用。结果表明,通过超声波和离心结合的方式,利用95%乙醇对红花进行提取,提取液对羟自由基的清除作用最佳,清除率(98.31%)高于绿茶(81.85%)和VE(57.17%),与VC(99.60%)相当。同时,红花提取液对超氧阴离子自由基也有一定的清除作用,以70%乙醇对红花进行提取对超氧阴离子自由基的清除效果为佳。     

红花花瓣总RNA提取方法的比较研究

红花花瓣富含多糖、多酚和花色素苷等次生代谢产物,严重影响花瓣总RNA的提取。为探索适合红花花瓣总RNA的提取方法,以4种红花不同时期的花瓣为材料,通过对4种RNA提取方法,即RNA提取试剂盒、RNAiso Plus试剂法、改良的CTAB法和SDS法进行比较研究。结果表明:RNAiso Plus试剂法效果最好,提取的总RNA完整性好,纯度高、浓度高。通过RT-PCR验证,所提取的RNA达到基因克隆和实时定量PCR等分子生物学实验要求。     

玉米醇溶蛋白的提取和应用

玉米蛋白粉中所含蛋白质主要是玉米醇溶蛋白，近年来随着对玉米醇溶蛋白的研究的深入，它的应用范围逐步扩大。本文着重介绍了玉米醇溶蛋白的几种提取方法，同时根据它独具的特性，在涂膜剂、可食性薄膜，粘结剂、渐释性制等应用方面作相应的阐述。     

不同溶剂和提取方法对红花提取物抗氧化活性的影响

为了提高红花中的总酚提取率,评价其抗氧化活性,以水、70％乙醇、70％酸性乙醇、正丁醇、乙酸乙酯和正己烷为溶剂,采用冷浸提取、超声提取、回流提取和ASE快速溶剂萃取法对红花进行提取,采用Folin-Ciocalteu方法,DPPH抗氧化活性体外评价体系测定红花不同提取物的抗氧化活性.结果表明:4种提取方法中,回流提取总多酚含量最高,其余依次为超声提取、ASE提取和冷浸提取;6种不同溶剂提取总多酚含量效果排序为70％酸性乙醇＞70％乙醇＞水＞正丁醇＞乙酸乙酯＞正己烷.结论:各提取方法中,70％酸性乙醇回流法提取物总多酚含量最高,抗氧化能力最强.     

朱顶红花红色素的提取条件及理化性质

研究了朱顶红花红色素的提取条件和理化性质。结果表明，pH1．0的95％乙醇是朱顶红花红色素的最佳提取剂；朱顶红花红色索属花青素类色素，易溶于水和酸性乙醇；pH值对色素影响明显，在酸性条件下色泽稳定且具有热稳定性。光照能加快色素降解。金属离子Na^＋，Ca^2＋，Al^3＋，Cu^2＋，Zn^2＋对色素色泽无影响，而Fe^3＋，Pb^2＋有不良影响。色素的抗氧化还原性能较好。蔗糖、葡萄糖和盐等添加剂对色素无影响。     

基于蛋白质组学分析跳枝梅花色差异

本研究采用TCA/丙酮法提取‘复瓣跳枝’梅白色和红色花蕾的总蛋白进行2-DE和MALDI-TOF/TOF MS分析,初步研究其跳色的分子机理。结果显示:红花和白花相比有21个蛋白质点的相对丰度变化大于2倍,7个上调,14个下调。通过数据库鉴定出其中20个蛋白质,根据其功能分为:能量与代谢、转录、细胞结构、信号途径、次生代谢、蛋白合成、细胞生长以及防御。其中,核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶、无机焦磷酸酶等在红花中为上调蛋白,可能为植物色素的合成运输提供能量。我们进一步采用qRT-PCR方法对编码12个差异蛋白的基因在转录水平进行了分析;同时对过氧化物酶蛋白的酶活性检测,结果显示在红花中该酶活性显著高于白花,这与蛋白趋势一致。基于蛋白质组分析,我们推测与信号转导相关的生长素结合蛋白和茉莉酸甲酯合成的关键酶丙二烯氧化物环化酶可能是造成跳枝梅花色变化的关键环节。     

红花优质高产栽培技术

新疆气候干燥，光照时间长，热量资源丰富，降雨量少，是红花的理想环境，是国内红花的主要产区。红花是经济价值高的油、药兼用的作物，花丝是传统的中药材，也可提取色素，红花油是一种很好的保健油。根据生产经验和科研成果，总结出红花优质高产栽培技术。     

转角质细胞生长因子-2基因红花研究

【目的】构建转角质细胞生长因子-2基因(KGF2)红花,为KGF2药用蛋白的生产奠定了基础。【方法】利用融合PCR方法扩增人源KGF2基因与拟南芥油体蛋白Oleosin基因的融合基因,将融合基因克隆至表达载体pOP上,构建了重组质粒pOP-OL-KGF2,采用冻融法将质粒pOP-OL-KGF2转入根癌农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化红花,采用PCR检测筛选转基因红花阳性植株,SDS-PAGE检测Oleosin-KGF2融合蛋白的表达情况。【结果】成功构建了植物特异表达载体pOP-OL-KGF2,转染后共获得了12株转基因红花植株,其中2株鉴定为阳性,阳性率为17%,对转化植株进行DNA水平检测和蛋白水平检测,可知KGF2基因已经整合进红花基因组中,且有所表达。【结论】成功获得转KGF2基因的红花株系。     

红花蜂花粉多糖提取工艺的优化及其抗氧化性质研究

采用水提醇沉法从红花(Carthamus tinctorius L.)蜂花粉中提取多糖,以多糖提取率为指标,设计正交试验优化多糖提取的工艺条件,并观察红花蜂花粉多糖在体外的抗氧化作用.结果表明,红花蜂花粉多糖的最佳提取工艺条件为提取温度90℃、提取时间12h、料水质量比1∶15;此工艺条件下多糖平均得率为2.35％.体外抗氧化结果表明,红花蜂花粉多糖对羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2-·)有一定的清除作用.     

红花高产栽培技术

红花是一种名贵药材，花不仅可供药用，也是提取色素的重要原料，红花油是一种很好的保健油，根据我地多年生产经验和示范栽培，总结出红花优质高产栽培技术。     

红花基因组DNA的提取及RAPD体系的优化

用多种方法提取红花老叶及嫩叶DNA,进行比较,最后确定老叶DNA的提取用高盐低pH法,嫩叶用Michael等的方法.设计两次正交实验来确定红花RAPD体系中各成分的浓度,最终确定了一个既稳定又能扩增出最多条带的适合红花的RAPD最优体系,即25 μL反应液中,dNTP 200 μM, Mg2+1.5 mM,引物0.8 μM,Taq酶1U,模板30～60 ng.     

红花超临界提取物的GC-MS成分分析及抗菌活性研究

[目的]了解红花超临界CO_2萃取物的化学成分并检测其抑菌活性。[方法]采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对超临界CO_2提取的红花成分进行分析,并采用滤纸片法检测萃取物对6种常见病原菌的抑菌活性。[结果]从红花萃取物中鉴定了41个化合物,占总萃取物的52.11%。红花超临界萃取物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念球菌、枯草芽孢菌有抑制作用。[结论]该试验为红花的进一步研究及开发利用提供科学依据。     

ELISA方法鉴定转Bt基因抗虫棉

采用ELISA（酶联免疫）方法，对转Bt基因抗虫棉种子、子叶及苗期叶片中Bt毒蛋白的含量进行了测定，同时比较了两种不同pH值的样品提取缓冲液及不同的提取时间对测定棉花叶片中Bt毒蛋白含量的影响，以进一步完善测定转Bt基因抗虫棉Bt毒蛋白含量的ELISA方法，并探讨了ELISA方法鉴定转Bt基因抗虫棉的可行性。     

林地红花栽培技术

红花系菊科红花属植物红花的干燥花冠，又名红蓝花、草红花、刺红花，为常用妇科重要药物，也是中医常用活血药。红花作为药用植物在我国已有上千年的栽培历史，主治血淤经闭、痛经、跌打损伤、淤血肿痛、产后淤血等症。红花除药用外，其花又为纺染工业及化妆品的重要色素原料，种子油可作食用油或作油漆、蜡纸原料，也可作为机械的润滑油等。