转基因溶菌酶羊hLZ-J1品系特异性数字PCR方法及样本中痕量转基因成分检测

人溶菌酶是一种天然抗生素,具有抗细菌、真菌,抗炎症,预防感染等功能。转基因溶菌酶山羊可以在乳腺中特异性表达,从而可以从羊乳中规模化制备溶菌酶。本研究旨在建立一种适用于痕量样本中转基因溶菌酶羊成分定量检测的品系特异性数字PCR方法,并利用该方法对山羊的血液、羊奶、粪便和环境土壤样本等进行检测,用于对转基因溶菌酶山羊成分的溯源。建立的数字PCR方法具有高特异性、灵敏度、准确性,检测限和定量限低至15个拷贝每个反应,可以对羊血、羊乳等制品进行准确的定量检测。研究结果还表明该方法可以准确测定粪便和环境土壤样本中的痕量转基因溶菌酶羊成分,可进一步用于转基因动物外源基因的水平转移检测及环境风险评估。     

应用双重数字PCR对转基因玉米成分进行定量方法研究

基于微滴式数字PCR平台,研究建立了一种在同一个微滴反应体系中同时测定样品中两种靶序列的双重微滴式数字PCR定量方法。结果表明,所建立的T25品系双重PCR方法能特异性检出转基因玉米T25,而其他转基因玉米、油菜、水稻等作物品系均没有扩增。灵敏度实验数据表明,所建立的T25双重数字PCR方法,在相对标准偏差≤25%时可以检测到4.6个T25特异性边界序列分子,在不考虑各重复间相对标准偏差的情况下可以检测到1个拷贝。定量结果准确性比较研究显示,与采用分别定量内源基因和T25边界序列来定量转基因成分结果相比较,所建立的T25双重数字PCR定量结果因消除了取样误差结果更准确,以上研究结果表明双重微滴式数字PCR定量方法比单重微滴式数字PCR定量方法更适用于进出境农产品转基因成分的定量检测。     

用于转基因玉米品系检测的PCR芯片的应用研究

本研究旨在建立一种能够对多种转基因玉米进行同时检测的PCR芯片,用于玉米及其制品中的转基因成分的检测。在实验中选择了6种转基因玉米品系(BT10、BT11、BT176、GA21、MON863、MON89034)和1种非转基因玉米作为实验材料,对PCR芯片的特异性和灵敏度进行了测试。结果表明,该研究成功构建了能够同时对6种转基因玉米品系进行检测的PCR芯片,且芯片具有较高的特异性,检测灵敏度可达0.1%。该PCR芯片检测结果可靠,可用于玉米及其制品转基因成分的检测。     

基于PCR技术的植物病原菌分子定量检测技术研究进展

植物病原菌的菌源量是病害发生和流行的重要因子之一,对其精准的定量测定或检测可大大提高植物病害预测的准确性,本文对实时荧光定量PCR (qPCR)与数字PCR在植物病原菌定量检测、以及基于RNA水平的real-time PCR和基于核酸染料(EMA/PMA)与qPCR相结合的技术在植物病原菌活体定量检测中的应用进行了综述,并展望其在植物病害流行和预测中的应用前景。     

双重数字PCR在转基因水稻检测中的应用

本研究基于微滴式数字PCR(droplet Digital PCR,dd PCR)技术,针对转基因水稻Bt汕优63外源基因建立了双重数字PCR检测方法。该方法在常见的转基因品系中具有很好的特异性,转基因样品绝对定量检测范围为0.5%～100%,定量检测限可达0.5%、定性检出限可达0.05%。与目前的标准检测技术相比,双重数字PCR具有更低的定量检出限,可以更好的满足实际检测的需要。     

多重PCR检测转基因菜籽粕中的转基因成分

以油菜内源基因PEP、抗除草剂基因(BAR、PAT)、筛选基因NPTII、常见启动子(CaMV35S、FMV35S)和终止子NOS为检测对象,通过研究不同引物终浓度的配比以及退火温度对转基因菜籽粕多重PCR检测的影响,建立了菜籽粕转基因成分7重PCR检测体系。结果表明,本研究所建立的检测体系能有效检测出菜籽粕以及其他作物(大豆、玉米、大米、棉花籽)中的转基因成分,检测过程简便、准确,值得推广应用。     

转基因延熟番茄"华番一号"的品系特异性检测方法

本文使用反向PCR方法克隆了转基因延熟番茄"华番一号"(Bioscein)的外源基因和番茄基因组之间的一段边界序列,并依据此段序列设计了具有品系特异性的引物和荧光探针,以实时荧光PCR技术建立了华番一号的品系鉴定检测方法,扩增片段长108bp,横跨在Nos启动子和番茄基因组之间.以转基因大豆(RR)、转基因玉米(Mon810)、转基因抗草甘膦油菜、转基因棉花(保龄棉)、非转基因番茄、马铃薯、茄子、大椒、大米、小麦、烟草等为试材,证明本方法同其它转基因作物及其它蔬菜无非特异性反应.本方法在检测华番一号番茄时,相对检测灵敏度可达到0.1%,绝对灵敏度达到20个拷贝.由于本方法的PCR扩增产物长度只有108bp,因此该方法也可以用于检测加工产品中的转基因成分,或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法.     

转基因玉米品系GA21拷贝数百分含量与质量百分含量关系研究

转基因成分含量一般以质量百分含量表示,而转基因成分定量检测只能检测内、外源基因的拷贝数,并以外源和内源基因拷贝数百分比值表示其含量。由于玉米、大米等种子含有三倍体的胚乳,导致样品中转基因成分质量百分含量并不等于其拷贝数百分比值。为深入探究两者之间的关系,本文首先建立了转基因玉米品系GA21二重数字PCR检测方法,并在此基础上,测定了品系GA21 5种不同质量百分含量标准参考物质的外源和内源基因拷贝数百分比。结果表明,该品系不同质量百分含量与其拷贝数百分比值存在线性相关,线性方程为:y=0.2464x+0.1458,两者相关系数达0.9951。本研究提供了一种可将样品拷贝数百分比值直接转化为质量百分含量的新方法,该方法适用于玉米、大米等含胚乳种子及其产品转基因质量百分含量的检测。     

实时荧光PCR定性检测菜籽粕中转基因成分的研究

本文针对使用实时荧光PCR对深加工的饲料菜籽粕进行转基因检测的研究,就DNA抽提、纯化和实时荧光PCR过程中使用样品DNA的最适浓度等方面,对检测方法进行了适当的改进,并探讨了如何根据所得荧光曲线的Ct值判定菜籽粕中是否含有转基因成分.     

大豆制品转基因成分检测和定量标识分析

分别以大豆凝集素(Lectin)和5-莽草酸-3磷酸合成酶(CP4-EPSPS)为内源和目标基因,对28种大豆制品进行实时荧光PCR检测.检测结果表明,4种大豆制品的CP4-EPSPS扩增结果为阳性,含有转基因大豆成分.转基因成分的定量检测在贸易和可操作性方面要优于定性检测.     

Plant-derived enzyme inhibitors and lectins for resistance against plant-parasitic nematodes in transgenic crops

Due to increasing restrictions on the use of toxic and expensive nematicides, there is now a greater than ever need for crop cultivars that are resistant to plant-parasitic nematodes. Genetically engineered nematode resistance is not as well developed as other engineered traits but, even so, the first genetically modified plants with enhanced nematode resistance have been produced and tested. Plant-derived enzyme inhibitor and lectin genes are being evaluated for their ability to confer broad-spectrum nematode resistance in transgenic crop plants. Early indications are that these are likely to be effective. Gene pyramiding has potential to increase field durability and to widen the spectrum of nematodes controlled by any one transgenic line. © 1998 SCI.     

转基因植物对蜂类昆虫安全性

随着转基因植物的大规模商业化种植,其对蜂类等有益昆虫的影响成为研究转基因生物风险评估的主要内容。一方面蜜蜂等蜂类取食植物花粉,有可能直接接触到杀虫蛋白,产生毒性效应;另一方面转基因植物的性状、营养成分等可能发生变化,对蜜蜂的行为可能产生潜在影响。本文综述了目前转基因植物对蜂类昆虫安全性研究进展,并提出克服转基因植物对非靶标生物可能的负面效应的治理对策,以期对转基因植物生物安全性的研究提供科学依据。     

转Bt基因抗虫作物对非靶标生物的影响

迄今为止,已经获得了大量的抗虫转Bt基因作物。尽管这些作物中表达的Bt蛋白只是针对靶标害虫起到杀虫效果,但是抗虫转Bt基因作物是否会对非靶标生物产生影响一直存在争议。本文就抗虫转Bt基因作物对节肢动物群落、非靶标植食性昆虫、天敌和有益昆虫的影响进行了综述。综合评价认为,现有的抗虫转Bt基因作物对非靶标生物是安全的。     

杜松烯合成酶作为转基因棉花PCR检测的内参照基因

根据棉属植物中棉酚合成的关键酶之一杜松烯合成酶[（＋）-d-cadinene syhnthase]基因序列，设计合成了该酶的实时荧光PCR的引物和TaqMan探针，经研究发现，此套引物探针能特异性检测海岛棉和陆地棉，有较高的检测灵敏度。同马铃薯、大椒、茄子、烟草、番茄、玉米、大豆、小麦、水稻和其它转基因作物无非特异性反应，可以作为转基因棉花检测的内参照。     

应用基因枪法获得抗大麦黄矮病毒转基因小麦

 以我国特有的大麦黄矮病毒GPV株系的外壳蛋白(CP)基因为材料,设计合成了分别含有Act启动子或Emu启动子的植物表达载体pPPI2、pPPI3和pPPI5。采用基因枪法分别转化小麦幼胚和愈伤组织。诱导成苗后进行PCR检测,T₀代阳性率为18%。对转基因苗的后代进行进一步检测,部分转基因苗阳性株至T₃代PCR检测阳性率为100%,PCR结果CP探针杂交呈阳性反应,序列测定结果与GPV CP基因序列一致,表明GPV CP基因已整合到小麦基因组中。室内抗病性鉴定结果,虽然转基因植株全部发病,但对大麦黄矮病毒GPV株系具有一定的延迟发病作用。     

Altered pesticide use on transgenic crops and the associated general impact from an environmental perspective

The large-scale commercial cultivation of transgenic crops has undergone a steady increase since their introduction 10 years ago. Most of these crops bear introduced traits that are of agronomic importance, such as herbicide or insect resistance. These traits are likely to impact upon the use of pesticides on these crops, as well as the pesticide market as a whole. Organizations like USDA-ERS and NCFAP monitor the changes in crop pest management associated with the adoption of transgenic crops. As part of an IUPAC project on this topic, recent data are reviewed regarding the alterations in pesticide use that have been observed in practice. Most results indicate a decrease in the amounts of active ingredients applied to transgenic crops compared with conventional crops. In addition, a generic environmental indicator -- the environmental impact quotient (EIQ) -- has been applied by these authors and others to estimate the environmental consequences of the altered pesticide use on transgenic crops. The results show that the predicted environmental impact decreases in transgenic crops. With the advent of new types of agronomic trait and crops that have been genetically modified, it is useful to take also their potential environmental impacts into account.     

转G2_EPSPS和GAT基因大豆栽培地生存竞争能力以及对节肢动物多样性的影响

转基因作物的全球快速发展,其对环境的安全性影响成为人们关注的热点。我国转基因大豆的发展还处于试验研究阶段,对转基因大豆环境安全性进行科学严谨评价是我国转基因大豆商业发展的有力支撑,具有非常重要的理论和实践生产意义。本研究以转G2_EPSPS和GAT双价基因抗草甘膦大豆材料GE-J16与受体材料Jack以及当地主栽品种中黄37为研究对象。采用田间栽培试验,比较其生长时期的竞争能力以及成熟期繁育和生存能力的差异,研究了转基因和非转基因大豆栽培环境生存竞争安全性;连续3年调查供试大豆品种田间节肢动物的种类与数量,分析其多样性指数、优势集中性指数、均匀性指数的动态变化,明确转基因和非转基大豆以及草甘膦除草剂对豆田节肢动物群落多样性的影响。试验结果显示,不同生育时期的3个大豆品种的株高、复叶数、田间覆盖度、繁育系数和落粒性都基本一致无差异显著性,无栽培地生存竞争优势;转基因大豆GE-J16人工除草、转基因大豆GE-J16喷施草甘膦和非转基因大豆Jack人工除草三个处理3年的节肢动物的多样性指数、均匀性指数、优势集中性指数变化趋势一致,且3个处理同一生育时期之间各指标无显著性差异,说明耐草甘膦转基因大豆以及草甘膦除草剂并不会引起豆田节肢动物群落多样性的明显变化。