磁场对白僵菌菌丝生长和产孢量的影响

优质菌株能获得最佳产品和防治效果。长期以来,研究菌种退化问题,从不同途径和处理方法提高产孢量。宋明芝(1976)用钴₆₀和化学药剂处理白僵菌株;张爱文(1991)紫外线诱变选育等,都获得优质菌株^[2],但随转代递增退化严重。为此,本着简单易行经济有效的原则,应用磁场处理白僵菌株达到加快菌丝生长,提高产孢量的作用。     

球孢白僵菌

理化性质：球孢白僵菌属半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、白僵菌属，是一种昆虫病原真菌。产品的有效成分为分生孢子．属微生物杀虫剂。在SDAY培养基上．球孢白僵菌菌落绒毛状、丛卷毛状至粉状，白色至浅黄色，偶成淡粉色。在显微镜下．“之”字形弯曲的产孢结构是其重要鉴别特征。产孢细胞单生或簇生于菌丝或分生孢梗上．基部柱状或膨大呈烧瓶形．顶部变细。其分生孢子球形或近球形．     

球孢白僵菌液体生长营养和培养条件优化

以菌株液体发酵过程中菌丝干重和芽生孢子浓度为测试指标, 对球孢白僵菌DZDC-9菌株液体发酵营养需求进行优化, 结果表明, 菌株生长的适宜碳源为葡萄糖, 适宜氮源为酵母粉, 在基础培养液中添加0.000 5 mol/L KCl可以显著提高菌丝和芽生孢子浓度。通过单因素分析和正交设计对不同培养条件下菌丝生长量进行测定, 结果表明, 在培养温度26 ℃, 培养液装样量1/5, 初始接菌量107个/mL, 转速200 r/min的培养条件下, 菌株液体发酵能在60 h达到最大菌丝生长量(13.184±0.328 6)g/L。利用筛选出的培养基和培养条件进行液固双相发酵试验, 得到的孢子粉产量为(22.30±1.78)g/kg大米, 显著高于优化之前的产量(13.04±1.90)g/kg大米。     

球孢白僵菌分生孢子乳悬剂的配方筛选

从6种常用的食品乳化剂中，筛选适合于球孢白僵菌（Beuaveia bassiana)分生孢子粉使用的乳化剂。除单二甘酯外，其余5种乳化剂的乳化性能与孢子浓度呈正相关。除十二烷基硫酸钠外，各种乳化剂均能以孢子极好地相容。综合乳化性、生物相容性、湿润力和其它理化特性、蔗糖脂肪酸酯S－1可作为白僵菌孢子粉较为理想的乳化剂，使用浓度为0．2％。以0．3％的羧甲基纤维素钠为稳定剂和0．1％的抗坏血酸作为紫外线保护剂，能显著提高孢子悬液在2h内的稳定性，并能较好地保护孢子免受紫外线损伤。     

球孢白僵菌对桃蚜种群数量的影响

在田间网室中研究了球孢白僵菌对分别以4龄无翅若蚜和无翅成蚜为起始的桃蚜种群数量的影响。以无翅成蚜起始的桃蚜种群，在接菌后的第6d，对照和接菌处理之间只有成蚜数量差异显著，虽各龄期若蚜数量和桃蚜总数处理与对照之间差异不显著，但接菌处理的总数量少于对照的总数量；在接茵后的第13d，两者的种群数量水平相当。以4龄无翅若蚜起始的桃蚜种群，在接菌后的第6d，处理和对照之间的种群数量就已接近。     

球孢白僵菌对桃蚜生殖力的影响

室内测定了球孢白僵菌三个菌株对桃蚜生殖力的影响。运用生命生殖力表分析了该菌对桃蚜种群的控制能力。结果表明,成蚜被白例题菌感染后至死亡前的生殖率下降不明显,但成 陆续死亡导致感染病群体的繁殖量下降,最后导致感病桃蚜的内增长能力不同程度的下降,但下降幅度不大。感病成所产后代能正常存活和发育。试验结果显示球孢白僵菌对桃蚜种群的控制作用有一定的局限性。     

不同浓度增效剂对金龟子绿僵菌、黄绿绿僵菌和球孢白僵菌产孢的影响

生防菌作为一种重要的生物杀虫剂,被开发成多种制剂应用于农林害虫的防治;微生物制剂的生产成本高、耗时长,极大影响其生产效率。本试验通过液固两相发酵法筛选出提高金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae、黄绿绿僵菌Metarhizium flavoviride和球孢白僵菌Beauveria bassiana产孢量的最优增效剂浓度。结果表明0.1%浓度增效剂对金龟子绿僵菌的促产孢作用达最大化,浓度达4.48×10⁹孢子/g;黄绿绿僵菌的最适增效剂浓度为0.05%,浓度达2.75×10⁹孢子/g;当增效剂浓度小于0.1%时利于黄绿绿僵菌的产孢,增效剂高于0.1%时抑制产孢;而球孢白僵菌的产孢量与增效剂浓度正相关,最大浓度达7.41×10⁹孢子/g。在真菌液体发酵过程中添加产孢增效剂,有效提高了真菌产孢量,缩短了真菌培养周期,为提高真菌制剂生产效率、节约成本提供理论支持。     

几种微胶囊适宜加工材料与球孢白僵菌分生孢子的相容性

采用不同的供试材料与球孢白僵菌孢子粉混合培养的方法,研究了10种不同的高分子材料与球孢白僵菌分生孢子的生物相容性。结果表明,球孢白僵菌孢子悬浮液与甲基纤维素钠、预胶化淀粉、阿拉伯胶和明胶预混6h后,孢子的发芽率与对照之间无显著性差异;与预胶化淀粉、海藻胶、甲基纤维素钠、明胶、羧甲基纤维素钠和阿拉伯胶在室温下混合贮存12个月后,萌发率仍达75%以上,均显著高于对照;加入明胶、预胶化淀粉和甲基纤维素钠对于菌落的直径生长无显著影响;加有预胶化淀粉、阿拉伯胶、明胶等的培养基产孢量与对照相比无显著性差异。综合比较,相容性能最好的材料依次为预胶化淀粉、明胶和甲基纤维素钠。     

不同的球孢白僵菌对草地螟的毒力测定

用16个分离自内蒙古地区的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)菌株对草地螟(Loxostege sticticalis L.)幼虫的致病力作了室内测定.结果表明,16个菌株对草地螟幼虫均表现出一定的致病率,但毒力强弱有所不同.通过对16个菌株进行毒力测定,筛选出1个毒力相对较强,有效死亡率(僵虫率)仍较高的菌株S3.同一个菌株处理下,草地螟幼虫的累积死亡率随孢子浓度增加而上升,接种后的幼虫死亡数逐日减少.说明累积死亡率是随着处理后时间的延长而递升;菌株的半死亡时间(LT50)随浓度的增加而减小.     

球孢白僵菌剂量对西花蓟马偏好温度的影响

球孢白僵菌是一种对西花蓟马具高致病力的重要生防真菌。球孢白僵菌感染改变了西花蓟马的偏好温度。探讨这一现象对于提高球孢白僵菌对西花蓟马的防治效果具有重要意义。本研究分析了西花蓟马偏好温度随球孢白僵菌剂量和感染时间的变化趋势。结果表明,在各观察时间点（24～120 h,48 h除外）,感染高剂量球孢白僵菌的西花蓟马偏好温度显著低于被低剂量真菌侵染的个体。与健康西花蓟马的偏好温度（24℃±0.5℃）相比,无论是高剂量还是低剂量真菌,染菌蓟马偏好温度均随时间推移呈先下降后上升的趋势。染菌0～48 h时,蓟马的偏好温度逐渐下降。染菌后48～120 h,偏好温度回升。感染高剂量球孢白僵菌的蓟马体内真菌基因拷贝数大于被低剂量真菌感染的个体,随染菌时间的推移,差异进一步加大。本研究将为建立西花蓟马的高效防控体系提供理论支持。     

萧氏松茎象致病性白僵菌培养基的筛选

对萧氏松茎象致病性白僵菌培养基进行了筛选。结果表明,白僵菌各菌株在PPDA培养基上的生长量明显大于其它培养基,感病率也明显低于PDA培养基,因此,PPDA是萧氏松茎象致病性白僵菌的最佳培养基。     

萧氏松茎象致病性白僵菌无纺布菌条的制作及培养基的筛选

分离培养采自安福县林间自然僵虫的白僵菌菌株,在液体和固体无纺布培养基上培养10d后的平均含孢量分别是1．09×10^8个·cm^-2。和2．01×10^7个·cm^-2,前者是后者的5倍。其在液体和固体无纺布培养基上24h后的平均萌发率分别为75．10％和71．86％。表明液体无纺布培养基更优于固体。     

球孢白僵菌不同分离株的生物学特性的研究

为了明确不同白僵菌菌株的生物学特征,对15株白僵菌菌株的ITS片段进行测序分析,并对这些菌株的菌落生长速率、产孢量、孢子萌发率、单芽管孢子萌发比例、单芽管平均长度和长芽管平均长度等多项生物学指标进行测定。结果表明,单芽管孢子萌发比例变化范围在11．91％～96．03％;单芽管平均长度和双芽管平均长度分别为6．28-21．43μm和10．338～19．902μm;各菌株间孢子萌发率差异很大,变化范围22．09％-86．32％。对菌株的培养特性（孢子萌发率、产孢量和菌落生长速率）与孢子萌发特性（单芽管孢子萌发比例、芽管总平均长度和芽管整齐度）这两个主因子进行典型相关分析,两性状集团总体相关不显著（P=0．341）,而孢子萌发率与单芽管孢子萌发比例相关显著,菌落生长速率与芽管总平均长度呈显著相关。     

木耳菌糠培养球孢白僵菌的条件筛选及优化

白僵菌是一种虫生真菌,目前在农林害虫防治中取得了明显的效果。为了进一步促进白僵菌农药的发展,开发低成本的白僵菌发酵方法或优化其发酵条件是不可缺少的一环。本文尝试以木耳菌糠作为主要培养基液体发酵球孢白僵菌,通过单因素试验和正交试验确定菌糠培养基配方并优化发酵条件。结果表明,废弃菌糠适宜作为球孢白僵菌的主要培养基,当料液比为1:4,补充0.3%硫酸锰、0.5%硝酸铵,接菌量10%,培养温度为25℃,培养时间为4 d时,球孢白僵菌的产孢量达到了2.0×109个孢子/mL。研究证实了木耳菌糠培养球孢白僵菌的可行性,希望为低成本发酵其他生防菌提供新思路。     

白僵菌绿僵菌分生孢子对高温的耐受力

试验研究了２株白僵菌和３株绿僵菌的分生孢子在高温短时处理及高温培养条件下的萌发和成活。３５℃短时处理对孢子的萌发和生长基本无影响。４０～５０℃是孢子的敏感区。从高纬度地区吉林采集的菌株Ｂ９对高温最敏感，在４０℃处理１０分钟，发芽率下降８０％。采自非洲的菌株Ｍ１８９对高温的抵抗力最强，在４０℃处理４小时和５０℃处理１小时，孢子的发芽率保持在４０％以上，６０℃处理２０分钟仍有大约１％的发芽率。高温培养结果表明，３５℃时只有Ｍ１８９的成菌落数为６７．７％，其它４个菌株均在１％以下。     

球孢白僵菌有性世代培养及子代毒力稳定性鉴定

在利用球孢白僵菌Beauveria bassiana有性态改良球孢白僵菌菌株的研究中,菌株的选择非常重要,其中利用交配型基因选择菌株是必要手段。而且虫生真菌的有性态能够使菌株间产生基因交流,促进其进化的过程。为更好地研究球孢白僵菌的遗传规律,以获得避免菌种衰退的方法,本研究建立了分别以柞蚕蛹为活体寄主和糙米培养基为基质的2种人工培养有性世代繁殖体系。结果表明,交配型为MAT1-1-1型和MAT1-2-1型混合型菌株BbDPSD5,经过自交在2种基质上均能够产生有性态。而具有2种单一交配型的菌株BbOFDH1-5和BbDPSD2进行配伍试验,BbOFDH1-5×BbDPSD2、BbOFDH1-5×BbDPSD5和BbDPSD2×BbDPSD5在2种基质上均没有有性态产生。对获得的有性态子囊孢子经无性繁殖产生的菌株进行r DNA-ITS片段以及交配型基因检测,并对测序结果进行比对分析。结果显示,扩增得到的r DNA-ITS序列和MAT1-2-1交配型基因与亲本序列同源性为100%,而没有检测到MAT1-1-1型。2种培养方式获得的结果完全一致。对有性态子代子囊孢子产生的株系进行毒力测试结果表明,所有子代菌株与原始菌株BbDPSD5的毒力差异不显著,子代交配型基因虽然缺失了MAT1-1-1,但是毒力没有衰退,未出现菌种退化现象。     

球孢白僵菌在玉米苗期的定殖及其对玉米生理生化特性的影响

为明确球孢白僵菌D1-5在玉米苗期的定殖规律及其对玉米生长状态和生理生化特性的影响,采用盆栽控制试验,研究了两种浸种时间（12和24 h）对菌株D1-5在玉米苗期不同部位（根、茎、叶）的定殖偏好性的影响,同时研究了几种生长指标对不同浸种时间的响应,分析了抗性相关防御酶活性（出苗14 d）变化情况。结果表明,叶片中菌株D1-5定殖检出率最高,达到40%,茎部其次,定殖检出率为10%,玉米根系未检测出菌株D1-5;各检测时期菌株D1-5处理组均高于对照组,差异显著,其中玉米出苗19 d生长势增长率最高,达到5.34%,出苗21 d叶面积增长率最高,达到13.71%,出苗28 d地上生物量增长率达到27.2%;菌株D1-5处理后叶片中抗性相关防御酶——苯丙氨酸解氨酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）活性均呈升高趋势,SOD活性增加最高,达到24.90%。菌株D1-5浸种对玉米苗期的生长发育有一定的促进作用,其中浸种12 h更有利于玉米幼苗生长,玉米相关防御酶的活性变化同球孢白僵菌-玉米之间的互作存在一定的相关性。