甘加型藏羊发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴中ERβ mRNA及其蛋白的表达

为阐明甘加型藏羊(Ovis arise)发情周期下丘脑-垂体-卵巢(hypothalamic-pituitary-ovarian axis, HPO)轴中雌激素受体β(estrogen receptor β,ERβ)mRNA和蛋白的表达及分布,本试验选取健康且在发情周期内的甘加型藏羊32只,运用qRT-PCR、Western blot 技术和免疫组织化学染色法检测甘加型藏羊发情周期ERβ mRNA及蛋白在HPO轴中的表达和分布差异。结果显示,甘加型藏羊整个发情周期(发情前期、发情期、发情后期及间情期)ERβ mRNA及其蛋白在HPO轴中均有表达和分布。下丘脑中ERβ mRNA及其蛋白在下丘脑中发情前期表达最多,显著高于其他3个时期(P<0.05);垂体中ERβ mRNA及蛋白均在发情前期表达最高,与其他3个时期差异显著(P<0.05);在卵巢中间情期表达最高,显著高于其他3个时期(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示,ERβ阳性表达主要分布在下丘脑大神经元胞体和轴突中;在垂体中多分布在远侧部及中间部嗜酸性细胞胞浆中,胞核中分布较少;在卵巢中,生长卵泡颗粒细胞胞浆和胞核、卵泡内膜细胞及黄体细胞胞浆中均有分布。ERβ mRNA及其蛋白在甘加型藏羊发情周期HPO轴的差异性表达表明雌激素受体β参与调节甘加型藏羊的生殖生理活动。     

甘加藏羊发情周期和乏情期血浆T3和T4浓度动态变化及HPOA轴 DIO2和 DIO3的表达

为探讨甲状腺激素（T3、T4）及其合成酶（ DIO2、 DIO3）对甘加藏羊生殖活动的调控,本研究以发情周期和乏情期甘加藏羊（Ovis arise）为研究对象,应用酶联免疫吸附法、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测甘加藏羊发情周期和乏情期血浆中T3和T4的动态变化、下丘脑-垂体-卵巢轴（Hypothalamic-pituitary-ovarian axis, HPOA）及甲状腺组织中 DIO2、 DIO3 mRNA和蛋白的表达。结果显示：整个发情周期和乏情期血浆中T3和T4浓度均以脉冲式和波动式交替变化,T4的浓度均显著高于T3,T3的平均浓度在发情前期最高,T4的平均浓度在发情期最高,与其他各时期比较差异均显著。藏羊发情周期和乏情期HPOA和甲状腺组织中均有 DIO2 、 DIO3 mRNA及其蛋白的表达,且差异显著;垂体、卵巢、甲状腺 DIO2 mRNA及其蛋白的相对表达量均高于 DIO3 mRNA及其蛋白的相对表达量。甘加藏羊发情周期和乏情期血浆T3、T4的浓度和 DIO2、 DIO3在HPOA及甲状腺组织中的表达呈现动态变化,表明甲状腺激素及其合成酶参与调控甘加藏羊的生殖活动。     

甘加藏羊发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴KISS-1/GPR54的表达与分布

为了研究高原甘加藏羊(Ovis aries)发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamic-pituitary-ovary axis,HPOA)中肿瘤转移抑制基因(kisspeptins,KISS-1)/G蛋白偶联受体54(G protein-coupled receptors 54,GPR54)的表达及其对藏羊季节性发情周期的调控作用,本实验选取处于发情周期的甘加藏羊32只,应用qRT-PCR和免疫组织化学技术,检测其在发情周期HPOA组织中的表达和分布。qRT-PCR结果显示,甘加藏羊整个发情周期HPOA组织中均有KISS-1和GPR54 mRNA表达。下丘脑组织中发情前期KISS-1 mRNA相对表达量显著(P<0.05)高于其他3个发情时期;在垂体组织中发情前期和间情期的相对表达量较高,与发情后期差异显著(P<0.05);卵巢轴组织中间情期的相对表达量最高,显著(P<0.05)高于其他3个时期。下丘脑组织中发情期GPR54 mRNA相对表达量显著(P<0.05)高于其他3个时期;垂体组织中发情前期的相对表达量显著(P<0.05)高于其他时期...     

甘加型藏羊发情周期血浆孕酮动态变化及HPO轴PGR的表达

为研究甘加型藏羊(Ovis arise)发情周期血浆孕激素(P₄)的分泌及孕激素受体(Progesterone receptor, PGR)在HPO轴中的表达,分析其在藏羊繁殖活动中的调控作用,本研究应用酶联免疫吸附试验、蛋白免疫印迹法、实时荧光定量和免疫组织化学染色法检测甘加型藏羊发情周期血浆中孕酮含量的动态变化、HPO组织中PGR mRNA及其蛋白的表达和组织分布。结果显示：1)甘加型藏羊发情周期血浆孕酮呈波动式和脉冲式分泌,在间情期达到最高峰值,发情期最低,二者差异显著(P<0.05)。2)PGR mRNA及其蛋白在HPO组织中均有表达;下丘脑中,PGR mRNA及其蛋白相对表达量在间情期最高,各时期之间差异显著(P<0.05);垂体中,PGR mRNA表达量在发情后期达到最高,显著高于发情前期和间情期(P<0.05),发情前期蛋白相对表达量高于其他时期;卵巢中,PGR mRNA在发情期最高,与间情期差异显著(P<0.05),蛋白表达水平在发情前期最高。3)PGR免疫阳性反应产物表达在下丘脑神经胶质细胞和大神经元胞体中,腺垂体嗜酸性细...     

甘加型藏羊发情周期血浆雌激素测定及HPO轴ERα的表达

为研究甘加型藏羊(Ovis arise)发情周期内血浆雌激素的分泌规律及其受体α(Estrogen receptor α,ERα)在下丘脑-垂体-卵巢(Hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPO)组织中的表达及分布,选取发情周期内健康且未孕甘加型藏羊32只,运用酶联免疫分析法(ELI...     

猪初情期瘦蛋白b型受体在下丘脑-垂体-卵巢轴内的分布定位

为检测猪初情期瘦蛋白b型受体(Ob-Rb)在下丘脑、垂体和卵巢的分布和定位,使用免疫组织化学方法检测苏姜母猪初情期下丘脑-垂体-卵巢轴中Ob-Rb的表达分布及定位.结果表明,Ob-Rb阳性颗粒广泛分布于下丘脑,尤其是弓状核;垂体中Ob-Rb阳性颗粒主要集中于垂体前叶细胞;卵巢中Ob-Rb阳性颗粒出现在各级卵泡的颗粒细胞,而卵母细胞没有阳性颗粒.结论是Ob-Rb分布于下丘脑-垂体-卵巢轴内,在下丘脑-垂体-卵巢轴对雌性生殖的调节中具有关键的调控作用.     

Preproorexin和OX1R mRNA在苏钟猪发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴中的表达

选取苏钟种母猪16头,在第2个发情期后,按发情前期、发情期、发情后期和间情期随机分成4组。用RT-PCR检测苏钟猪发情周期不同时期preproorexin和orexin 1受体（OX1R）mRNA在下丘脑-垂体-卵巢轴中的表达。结果显示：发情周期不同时期preproorexin mRNA在下丘脑、垂体和卵巢中变化趋势一致,preproorexin mRNA在猪的发情前期表达最高,随后其表达量开始下降,在发情后期其表达最少,在间情期时又开始上升。下丘脑中OX1R mRNA在发情前期开始上升,在发情后期达到最高,随后在间情期又开始下降。垂体和卵巢中OX1R mRNA的变化与下丘脑中OX1R mRNA的变化趋势一致。上述结果表明：orexin可能参与调控动物生殖过程。     

猪初情期NPY-Y1 mRNA在下丘脑-垂体-卵巢轴的表达定位

[目的]研究猪初情期NPY-Y1 mRNA在下丘脑、垂体和卵巢的分布定位。[方法]选取60日龄、体重为20 kg和160日龄、体重为80 kg的苏姜母猪各3头,麻醉后,取出其下丘脑、垂体和卵巢,制成冰冻切片。采用原位杂交技术检测各样品中NPY-Y1 mRNA的表达定位,并用PBS液取代杂交液作阴性对照。[结果]不同发育阶段的下丘脑、垂体和卵巢中均检测到NPY-Y1 mRNA的阳性杂交信号,且初情期前期（60日龄）样品的阳性信号较初情期（160日龄）强。[结论]下丘脑-垂体-卵巢轴内分布有NPY-Y1 mRNA,其对雌性生殖过程具有调控作用。     

Nesfatin-1在雌性大鼠生殖轴上的表达及对其初情期的影响

[目的]本研究旨在探究Nesfatin-1在雌性大鼠生殖轴上的表达及其对初情期启动的影响.[方法]以雌性SD大鼠为研究对象,采用免疫组化技术对成年雌性大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)上的Nesfatin-1/Nucb2蛋白进行定位;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法分析Nesfatin-1/Nucb2、Tac2...     

S100蛋白在动情周期大鼠子宫中的分布

【目的】研究S100蛋白在动情周期SD大鼠子宫中的分布情况及其变化规律。【方法】采用阴道涂片方法将16只雌性SD大鼠分为动情前期、动情期、动情后期和动情间期4组,处死各组大鼠取子宫制作石蜡切片,采用免疫组织化学超敏感法(Streptavidin-Peroxidase,SP),研究S100蛋白在大鼠动情周期子宫中的分布规律。【结果】S100蛋白免疫阳性产物在各期子宫各层中均有不同程度的分布,主要定位于子宫内膜上皮细胞、腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、肥大细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞中。S100蛋白免疫阳性产物在动情周期子宫内膜、肌层和外膜中的表达变化规律一致:动情前期着色最弱,动情期着色最深,动情后期着色变浅,动情间期着色又加深,表达呈双峰变化趋势。【结论】S100蛋白在动情周期SD大鼠子宫中的表达具有一定规律,可能受性类固醇激素的调节。     

甘加型藏绵羊发情周期内输卵管和子宫中MTR1a mRNA的表达

旨在研究褪黑素受体(MTR1a)基因在甘加型藏绵羊(Ganga Tibetan ovis aries)输卵管和子宫组织中的表达规律,选取发情周期内正常且未孕的甘加型藏绵羊32只,应用qRT-PCR方法检测输卵管和子宫组织中MTR1a基因的表达差异。结果显示:在整个发情周期中,甘加型藏绵羊输卵管和子宫中均有MTR1a mRNA表达。在发情前期、发情期、发情后期、间情期4个阶段,输卵管组织中MTR1a mRNA的相对表达量分别为0.604±0.253、 0.033±0.031、 0.202±0.151和1.000±0.221,间情期的相对表达量最高,与发情期差异极显著,与其他时期差异显著;子宫组织中MTR1a mRNA的相对表达量分别为0.188±0.086、0.525±0.347、1.878±0.209和1.000±0.094,发情后期的相对表达量最高,与其他3个时期差异极显著。发情周期内MTR1a基因在输卵管和子宫中的表达变化规律表明褪黑素(Melatonin,MT)在动物排卵、受精及早期胚胎发育过程中起调节作用。     

5-羟色胺在动情周期大鼠子宫中的分布

【目的】研究5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)在不同动情周期SD大鼠子宫中的分布情况和变化规律,探讨5-HT在雌性生殖系统中的作用。【方法】采用阴道涂片法鉴定动情周期,选取均为正常动情周期的20只雌性SD大鼠,将其分为动情前期、动情期、动情后期和动情间期4组,处死各组大鼠,取子宫制作石蜡切片,经免疫组织化学超敏SP法染色后,观察5-HT在不同动情周期大鼠子宫中的分布及变化规律。【结果】5-HT免疫阳性产物在子宫各层中均有不同程度的分布,其中主要存在于子宫内膜上皮细胞、子宫腺上皮细胞、血管内皮细胞、基质细胞以及子宫内膜固有层中的胚性结缔组织细胞中。子宫内膜固有层以椭圆形状和圆形的5-HT阳性细胞为主。此外,还有一些呈细丝状、串珠状的5-HT阳性神经纤维分布于子宫内膜固有层。环行肌层多为细丝状和串珠状且粗细不等的5-HT阳性神经纤维。纵行肌层5-HT阳性产物呈点状、细丝状、椭圆形状和串珠状分布。子宫内膜和肌层5-HT阳性产物在动情期和动情间期均呈强阳性表达,而在动情前期和动情后期均呈弱阳性表达。【结论】5-HT在不同生理时期大鼠子宫中的表达分布存在一定规律性,可能与其生理调节功能有关。     

神经肽Y在动情周期大鼠子宫中的分布

【目的】研究神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)免疫反应阳性物质在大鼠动情周期子宫中的分布情况及其变化规律。【方法】采用阴道涂片法鉴定发情周期,选取情期正常的20只雌性大鼠,均分为动情前期、动情期、动情后期和动情间期4组,处死各组大鼠,取子宫制作石蜡切片,经免疫组织化学SP法染色后,观察NPY在大鼠动情周期子宫中的分布及变化规律。【结果】在内膜层,大多数NPY免疫阳性产物位于细胞中,小部分位于点状和细丝状纤维中。在肌层,NPY免疫阳性产物主要位于NPY纤维中。NPY免疫阳性产物相对表达量的t检验结果表明,子宫内膜NPY在动情期和动情间期的表达较动情前期显著减少(P0.05),较动情后期极显著减少(P0.01);子宫肌层NPY在动情后期的表达较动情期显著回升(P0.05),在动情间期的表达较动情后期极显著减少(P0.01)。【结论】NPY在不同生理时期大鼠子宫中的表达分布存在一定规律性,可能与其生理调节功能有关。     

冷季补饲对泌乳期藏羊母羊乳汁成分与代谢产物的影响

为了使用乳品快速分析仪和液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术对放牧与补饲条件下藏羊母羊乳成分和代谢产物进行差异分析,选取胎次一致、体重相近（43.85 kg±7.06 kg）且发育良好的3岁龄藏羊母羊440只,随机分成两组,即自然放牧（control group,CG）,放牧+补饲0.25 kg·d^-1精料补充料（test group,TG）。试验期为60 d（配种后150～210 d）。试验结束时,从两组中各收集5只母羊的乳汁分析营养成分,同时检测其代谢产物。结果显示：（1）与CG组相比,TG组藏羊母羊的产奶量、脂肪、蛋白质、灰分及非脂固形物含量均有所提高,其中产奶量与脂肪含量差异显著（P＜0.05）。（2）两组共获得已注释显著性差异代谢物39种,其中24种上调,15种下调;结合KEGG通路分析,发现脂肪细胞脂解调节（regulation of lipolysis in adipocyte）,含血清素神经突触（serotonergic synapse）,醛固酮合成与分泌（aldosterone synthesis and secretion）,FcεRI信号通路（Fc epsilon RI signaling pathway）,不饱和脂肪酸生物合成（biosynthesis of unsaturated fatty acid）,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成（phenylalanine, tyrosine and tryptophan biosynthesis）是最为显著性关键代谢通路,并筛选出花生四烯酸（arachidonic acid）,二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid）和D-果糖-1-磷酸（D-fructose-1-phosphate）作为差异显著相关代谢物。综上,通过冷季补饲提高了泌乳期藏羊母羊乳汁品质,并能改善其代谢产物,这为今后绵羊母乳的研究与开发提供一定理论依据与技术支持。     

欧拉型藏羊Callipyge基因多态性与生长性状相关性研究

利用PCR-SSCP方法,对215只欧拉型藏羊Callipyge基因序列的多态性进行了检测,并分析了AA和AB基因型与生长性状的相关性.结果表明:Callipyge基因存在AA、BB和AB 3种基因型,其基因型频率分别为0.823 3、0.009 3和0.167 4;测序结果显示:基因多态的产生是在扩增序列的第176bp处发生了C→T的突变;χ2检验表明,该群体在这一位点上处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05),遗传杂合度和多态信息含量分别为0.168 7和0.154 5.对生长性状(体重、胸围和胸深)的相关性分析表明:AA和AB 2个基因型个体之间生长性状的差异不显著,但AB型有大于AA型的趋势.